利腦心膠囊對局灶性腦缺血模型大鼠血漿和腦組織中SOD、MDA含量的影響

劉金瑩，唐 燕，王洪鑫，王炫策，許 新*

(1.長春中醫藥大學藥學院，吉林 長春 130117；2.長春中醫藥大學研發中心，吉林 長春 130117)

腦血管疾病是發生在腦部血管的因顱內血液循環障礙而造成腦組織損害的一組疾病，具有發病率、致殘率和致死率高的特點[1]。利腦心膠囊是由丹參、紅花等15味藥物組成的具有活血化瘀、補氣行滯、降脂化濁之功效的復方中藥制劑，廣泛用于心腦血管疾病的治療。本實驗對利腦心膠囊對抗缺血性腦血管疾病的作用及其可能機制進行了實驗研究，報告如下。

1 實驗材料

1.1 動物 健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，體質量250～350 g,吉林大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK-(吉)2008-0005。

1.2 藥物 利腦心膠囊藥粉：由吉林敖東藥業集團股份有限公司提供(批號：110414)。通脈顆粒：市售，河北萬歲藥業有限公司生產(批號110303)。

1.3 試劑與材料 線栓，購自北京沙東生物技術有限公司；MDA試劑盒，SOD試劑盒，考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒，本實驗所用試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.4 儀器 低溫超速離心機，可調高速勻漿器，紫外可見分光光度計。

2 實驗方法

2.1 模型制作 參照改良后的Zea Longa線栓法[2-3]建立大鼠大腦中動脈梗死(MCAO)模型，待大鼠清醒后觀察其行為和神經癥狀，參照神經學分級方法[4]，選取提尾懸空時向對側轉圈的大鼠進行實驗研究。

2.2 樣品采集與處理 血漿[5]與腦組織[6]的采集與處理參照文獻即可。

2.3 血漿與腦組織中SOD、MDA含量測定 所有操作均按試劑盒說明書程序進行。

2.4 病理學檢查 腦切片行常規HE染色，然后光鏡下觀察大鼠腦組織情況。

3 實驗結果

3.1 血漿和腦組織中SOD、MDA含量測定結果 見表1，圖1。

圖1 大鼠血漿和腦組織中SOD、MDA含量測定結果

表1 大鼠血漿和腦組織中SOD、MDA含量測定結果(±s，n=8)

模型組與對照組比較，血漿和腦組織中SOD活力明顯降低，MDA含量明顯升高，兩者相比有極顯著性差異(P<0.01),證明本實驗造模成功；利腦心膠囊高、中、低劑量組和通脈顆粒組與模型組比較，都有提高血漿和腦組織中SOD活力，降低MDA含量的作用，且差異具有統計學意義(P<0.05)；利腦心膠囊3個劑量組兩兩比較亦有差異，對血漿和腦組織中SOD活力和MDA含量的影響均以利腦心膠囊中劑量組(P<0.01)效果最佳。

3.2 病理學檢查結果 對照組大鼠腦組織結構正常，細胞形態正常，胞漿豐富，核周圍少量氣泡；模型組大鼠腦組織水腫，部分腦細胞壞死，細胞核縮小，核周圍空泡多；通脈顆粒組和利腦心膠囊各劑量組對腦組織病變面積、組織水腫程度和細胞壞死程度等均有所改善。

4 討論

大鼠腦缺血模型有2種，分為全腦缺血模型和局灶性腦缺血模型[7]。全腦缺血模型多用于缺血再灌注對腦組織影響的研究，而局灶性腦缺血模型更接近人類腦血栓、腦栓塞等癥的發病過程和體征。線栓法自1986年Koizumi等[8]首次報道該模型以來，研究者們不斷探索，本實驗采用Zea Longa的方法并加以改進,無需開顱即可形成穩定、確切的腦缺血病灶，手術操作簡單易行，并且降低了動物死亡率。

組織處于缺氧狀態時，體內會產生大量氧自由基，它可以造成生物膜系統損傷以及細胞內氧化磷酸化障礙，產生具有細胞毒性的過氧化物，是人體疾病、衰老和死亡的重要影響因素。MDA是脂質過氧化的產物，它的含量可直接反映出體內脂質過氧化過程的程度,從而間接反映體內的氧自由基水平；SOD是體內主要的抗氧化酶,具有清除自由基的能力。本實驗研究結果表明，利腦心膠囊可提高腦缺血大鼠血漿及腦組織中SOD活力，降低血漿和腦組織中MDA含量，從而減輕自由基對腦組織的損害。其對中動脈阻斷腦缺血模型大鼠的治療作用，可能與其增強SOD清除自由基的能力和抑制MDA的產生有關。

目前，市場上治療缺血性腦卒中的西藥多達幾十種[9]，大致分為以下6類：血管擴張藥(如潘生丁等)，改善微循環、擴充血容量的藥物(如低分子右旋糖酐等)，溶解血栓的藥物(如尿激酶等)，抗凝藥物(如肝素等)，防止血小板凝聚藥(如阿司匹林等)和鈣離子拮抗劑(如尼莫地平等)。這些藥物雖然在治療缺血性腦卒中方面有較好的療效，但不良反應較大,稍有不慎就會引起腦出血等意外發生。中藥在治療腦缺血疾病方面，以活血化瘀藥為君藥，配伍行氣調和的藥物，內調外養，且無毒副作用。

[1]張林,李然,陳金,等.補陽還五湯對局灶性腦缺血大鼠神經功能、腦梗死體積和血清IL-10含量的影響[J].中華中醫藥雜志,2009(增刊):42-43.

[2]徐立新,袁芳.改良的大鼠腦局部缺血模型[J].中國康復理論與實踐,2005,11(1):23-24.

[3]Zea Longa E,Weinsten PR,Carlson S,et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in rats[J].Stroke,1989,20:84-91.

[4]吳遠華,朱廣旗,胡蓉,等.線栓法大鼠腦缺血再灌注模型改良與評價[J].中國實用神經疾病雜志,2010,13(18):4-6.

[5]SU Yan-bin,JIANG Yi-zhong,LU Ming,et al.Regulation of Content of Malondialdehyde by Siqi Decoction via Increasing Activity of Superoxide Dismutase in Blood Serum of Rats with Myocardial Ischemia[J].Chem.Res.Chinese Universitles,2009,25(5):686.

[6]楊春根.補陽還五湯對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用[J].現代中藥研究與實踐,2010,24(1):36-39.

[7]李雪麗,朱丹.腦缺血動物模型的研究進展[J].中央民族大學學報,2010,19(1):23-26.

[8]Koizumi J,Yoshida Y,Nakazawa T,et al.Experimental studies of ischemic brain edema.I.A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area[J].Jpn J Stroke,1986(8):1-8.

[9]劉國利,沈途,張錦英.異氟醚預處理對缺血再灌注損傷后幼兔心肌INF-α和iNOS mRNA表達的影響及其機制[J].吉林大學(醫學版),2011,37(4):622-625.