高效液相色譜法測定清熱通淋丸中苦參堿和氧化苦參堿含量

楊獻玲，翟宏宇

(吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033)

清熱通淋丸是由爵床、苦參、白茅根、硼砂4味中藥組成的復方制劑。具有清熱、利濕、通淋的作用[1-2]。清熱通淋丸現行標準為國家食品藥品監督管理局標準YBZ05982009,原標準采用高效液相色譜法測定方中苦參堿的含量，未測氧化苦參堿的含量，因此本研究增加了氧化苦參堿含量的測定，并以苦參堿和氧化苦參堿的總和計算苦參含量品的含測指標更為合理[3-5]。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent 1100高效液相色譜儀，Agilent 1200高效液相色譜儀，MILLI-Q純水處理器，CQX-12型超聲波清洗器。苦參堿對照品，購自中國藥品生物制品檢定所，批號為110805-200306，供含量測定用；氧化苦參堿對照品，購自中國藥品生物制品檢定所；批號為110780-200506，供含量測定用；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑為分析純。清熱通淋丸為通化博祥藥業股份有限公司提供。缺苦參的陰性對照樣品為自制。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取苦參堿對照品15 mg、氧化苦參堿對照品8 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取混合對照品溶液5 mL,置25 mL量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1 mL，精密加入三氯甲烷50 mL，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理(功率250 W，頻率50 KHz)30 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精密吸取續濾液25 mL,蒸干，殘渣用甲醇1 mL溶解后,加磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)稀釋并轉移至10 mL量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 標準曲線 精密稱取苦參堿對照品適量,加流動相制成每1 mL含0.314 4 mg的溶液，分別精密吸取1、3、5、7、9、11 μL測定，以對照品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，結果表明苦參堿進樣量在0.314 4～3.458 μg范圍內，呈線性關系，符合外標法定量測定的要求。

以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=110 2.1X+15.423，相關系數為r=1.000 0。

精密稱取氧化苦參堿對照品適量，加流動相制成每1 mL含0.007 4 mg的溶液,分別精密吸取1、3、5、7、9、11 μL測定，以對照品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，結果表明苦參堿進樣量在0.007 4～0.081 9 μg范圍內，呈線性關系，符合外標法定量測定的要求。

以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=110 6.6X+5.040 2，相關系數為r=0.999 2。

2.4 精密度試驗 對同一分供試品溶液(批號：110401)，按正文擬定的色譜條件，連續測定6次，結果其苦參堿RSD為0.13%，氧化苦參堿RSD為2.76%，結果表明儀器的精密度良好。

2.5 穩定性試驗 同一供試品溶液照正文方法,在0、2、4、6、8、10、12 h測定苦參堿和氧化苦參堿峰面積值，苦參堿峰面積RSD為0.58%，氧化苦參堿峰面積RSD為6.47%，結果表明：供試品溶液在12 h內，穩定性良好。

2.6 重復性試驗 對清熱通淋丸(批號:110401)樣品，按正文擬訂的方法獨立測定6分，結果氧化苦參堿和苦參堿之和的平均含量為5.308 mg/g(RSD=%,n=6)，表明本法的重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗 結果苦參堿平均回收率為99.01%，RSD=0.46%(n=6)符合定量分析的要求。氧化苦參堿平均回收率為97.91%，RSD=0.40%(n=6)符合定量分析的要求。

3 樣品測定

取4批樣品,按上述方法制備供試品溶液和對照品溶液，按上述色譜條件操作，結果陰性對照無干擾。4批樣品測定結果見表1。

表1 4批樣品測定結果

4 討論

本研究考察了樣品以堿性三氯甲烷(三氯甲烷+濃氨試液)溶解后超聲，回流,及溶解后靜置過夜再超聲，回流。結構表明靜置過夜后的結果明顯高于直接超聲，回流，而且過夜后的超聲，回流樣品含量無明顯差異，鑒于超聲的方法更為簡便，故選擇樣品以堿性三氯甲烷(三氯甲烷+濃氨試液)溶解，靜置過夜后超聲作為供試溶液的制備方法。

[1]劉瑩,孟慶妍,翟宏宇.HPLC法同時測定復方苦參腸炎康片中苦參堿和氧化苦參堿的含量[J].長春中醫藥大學學報,2011,27(5):842-843.

[2]宋小莉.苦參主要有效成分作用于肝臟的藥效學實驗研究[J].吉林中醫藥,2010,30(6):526-527.

[3]徐國紅.苦參治療濕疹的藥理作用研究[J].長春中醫藥大學學報,2010,26(5):781.

[4]張春麗,孫國英,黃超,等.青柏潔身洗液中苦參堿的含量測定方法比較研究[J].吉林中醫藥,2009,29(7):619-620.

[5]王琳,張羽,王曉明,等.舒心膠囊的生產工藝研究[J].長春中醫藥大學學報,2008,24(4):383.