補腎復方對圍絕經期大鼠卵巢超微結構的影響

丁原全，劉鵬，馬乾章

（1 中國人民解放軍沈陽軍區衛生技術干部訓練中心，遼寧 大連 116017； 2 遼寧中醫藥大學； 3 遼寧省中醫院）

圍絕經期卵巢功能衰退，卵泡閉鎖，卵泡數量減少［1］，體內雌激素水平顯著降低，從而出現各種臨床癥狀。本研究觀察了圍絕經期大鼠卵巢的超微結構及補腎復方的干預作用，探討補腎復方作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 雌性Wistar大鼠，由沈陽醫學院實驗動物中心提供。實驗前，置遼寧省中醫院動物實驗中心動物室內適應性飼養1周。實驗期間同一室內（室溫18～22℃），12 h－12 h晝夜環境條件下籠養，自由飲水，攝食顆粒飼料（由沈陽醫學院實驗動物中心提供）。

1.1.2 藥物 補腎復方由熟地、山藥、山萸肉、菟絲子、仙靈脾、丹參組成。補腎復方和六味地黃湯生藥均由遼寧省中醫院門診中藥局提供，并經生藥檢驗。由制劑室制作相應濃度的水煎劑，高壓密封備用。

1.1.3 儀器 超薄切片機，瑞典LKBⅤ型；電子顯微鏡，日本JEM100CX－Ⅱ型。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及處理 4月齡青年鼠（青年組）、18月齡老年鼠（老年組）各10只；11～12月齡鼠50只（根據陰道脫落細胞檢查，無規律性動情周期變化，確定為圍絕經期大鼠），隨機分為模型組、對照組及補腎復方高、中、低劑量組各10只。補腎復方高、中、低劑量組大鼠分別給予高、中、低劑量補腎復方20 mL／kg（相當于人臨床一日用量的10、6、3倍量，分別含生藥5.80、3.50、1.75 kg／L），每天9：00灌胃；對照組灌服等體積六味地黃湯；模型組、青年組與老年組灌服等體積的生理鹽水。

1.2.2 超微結構觀察 大鼠灌藥4周，于最后一次給藥后24 h，以200 g／L烏拉坦腹腔注射麻醉后，固定，剖腹迅速取卵巢，切成1 mm3大小的組織塊若干，以25 g／L戊二醛、10 g／L鋨酸雙重固定，乙醇梯度脫水，環氧樹脂Epon812包埋，超薄切片機切片，厚度5μm，醋酸鈾、檸檬酸鉛雙染色，于電鏡下觀察，并拍照。

2 結 果

各組電鏡觀察所見如下。①青年組：細胞處于增殖分化狀態，卵巢皮質的淺表部有大量的卵泡。卵泡周圍為單層扁平的顆粒細胞。在生長卵泡中可見多層顆粒細胞，其數量多，細胞核和細胞基質密度均勻，核大，核仁明顯，胞質豐富。胞漿中滑面內質網、脂滴均較豐富，滑面內質網無擴張，線粒體分布均勻，囊泡形成較少，基質密度高，體積小，多為管狀嵴；異染色質聚集核膜內側。②模型組：顆粒細胞內線粒體嵴髓峭樣變、空變，溶酶體空泡化，并可見滑面內質網擴張，顆粒細胞核孔增大，高爾基體肥大，線粒體腫脹，黃體細胞出現凋亡。③補腎復方高劑量組：細胞結構接近于青年組，細胞處于高度合成與分泌狀態，胞漿中存在大量大小均勻的脂滴，電子密度高，滑面內質網充滿胞漿，有豐富的高爾基復合體。④補腎復方中劑量組：滑面內質網豐富，中度擴張，胞質內脂滴較多，電子密度不等，線粒體數目增多，體積增大，部分線粒體腫脹，核膜擴張。⑤補腎復方低劑量組：顆粒細胞線粒體豐富，脂滴體積增大，滑面內質網輕度擴張，線粒體擴張顯著，脂滴較多，大小不等，卵泡數量較青年組稍少，核膜擴張，核孔增寬。⑥對照組：顆粒細胞豐富，可見少量線粒體腫脹，卵泡細胞出現電子密度高的脂滴，高爾基復合體豐富，核膜擴張。⑦老年組：可見大量髓峭樣結構，線粒體腫脹、空泡化，染色質濃縮、邊集，基質較薄，電子密度低，可見細胞凋亡。

模型組大鼠卵泡明顯少于青年組，閉鎖卵泡增多。應用補腎復方后，生長卵泡增多，與對照組比較，補腎復方各劑量組卵巢的超微結構明顯改善，表現在線粒體豐富、有大量的脂滴等，且呈一定的劑量效應關系。

3 討 論

卵巢具有生殖和內分泌功能，其超微結構是鑒定卵巢發育狀況，評定其活力及健康狀況的重要手段之一。線粒體的形態結構、功能變化等易受細胞內、外環境的影響而發生明顯的變化，是細胞病變或衰老最敏感的指標之一［2］。粗面內質網分布情況及發達程度可作為判斷細胞功能狀態和分化程度的一個指標。滑面內質網主要分布在能合成類固醇激素的細胞，其含有合成膽固醇的全套酶系和使膽固醇轉化為類固醇激素如腎上腺激素、雄激素、雌激素的酶類，對內外環境的變化極為敏感，是誘發凋亡的重要細胞器之一［3－4］。高爾基復合體在細胞內膜的交通上也起重要作用。溶酶體能進行內源性和外源性物質的消化，還參與機體的免疫過程、某些生理活動和發育過程［5］。

本實驗結果表明，補腎復方在卵巢局部的調節中發揮著重要的作用，可使卵巢滑面內質網增多，脂滴明顯增多，線粒體數目增多，且呈一定的劑量效應關系，與高慧等［6］的結論基本吻合。雌激素合成的原料為膽固醇，其在體內以脂滴的形式存在，合成雌激素過程的關鍵酶為芳香化酶，芳香化酶存在于滑面內質網上。因此，一定的條件可使膽固醇轉化成機體需要的雌激素，使卵巢的超微結構明顯改變，從而改善卵巢的功能，有利于卵泡的生長發育，在一定程度上延緩卵巢的衰老。補腎復方可以直接作用于卵巢等組織，有類雌激素的治療作用，能改善卵巢組織的營養狀態，有效延緩卵巢組織的萎縮。

［1］BURGER H G，DUDLEY E C，ROBERSON D M，et al.Hor monal changes in the menopause transition［J］.Recent Prog Hor m Res，2002，57：257.

［2］TRIFUNOVIE A，LARSSON N G.Mitoehondrial dysf unction as a cause of ageing［J］.J Intern Med，2008，263（2）：167.

［3］CHEN X Z，DOUG LAS B K，LUO J，et al.Endoplasmie reticulu m Ca2＋dysregulation and endoplasmic reticul um sress following in vitro neuronal ischemia of Na＋－K＋－Cl－contransporter［J］.J Neurochem，2008，106（11）：1563.

［4］MONIQUE C S，BARRY J C，TAREK M S.Ischemic tolerance following low dose NMDA involves modulation of cellular stress proteins［J］.Brain Research，2009，1247（2）：212.

［5］TURK V，TURK B，GUNCAR G，et al.Lysosomal cathepsins：structure，role in antigen processing and presentation and cancer［J］.Adv Enzy me Regul，2002，42：285.

［6］高慧，楊涓，夏天，等.補腎調沖方對卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢組織形態學的影響［J］.國醫論壇，2008，23（1）：35.