柱前衍生高效液相色譜法測定通絡下乳口服液中牛磺酸的含量

陳瑞瑾

廣西古方藥業有限公司，廣西 南寧 530221

通絡下乳口服液處方為雞血藤、章魚、木瓜、王不留行、通草，生姜，龍眼肉、大棗。功能為益氣補血，通絡下乳。用于改善婦女產后氣血虛弱引起的無乳，少乳，乳汁清稀等。為了更好的控制該口服液的質量，保證藥品使用安全、有效，本文采用HPLC法測定了牛磺酸的含量。

1 儀器與試藥

儀器 LC－10AP型高效液相色譜儀 (日本島津公司);SPD－10Avp紫外－可見檢測器;LC－10ATVP7725(i)型手動進樣器;色譜柱為Kromgsil 100－5c18(150×4.6mm);威瑪龍色譜數據工作站;kh－250db型超聲處理器。

試藥 鄰苯二甲醛，乙硫醇，色譜甲醇，水為超純水，牛磺酸對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號:111616－200301)。

樣品 通絡下乳口服液 (購自A廠，共3批)。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇—0.05mol/L醋酸鈉溶液 (60:40)為流動相，檢測波長為330nm，流速為1.0ml/min，進樣量為10μl;柱溫為25℃。理論板數按牛磺酸峰計算應不低于2000。在上述色譜條件下，供試品中牛磺酸能完全分離，對照品與陰性對照品溶液中沒有峰重疊，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取牛磺酸對照品，加水制成每1ml中含0.04mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取樣品溶液5ml于100ml容量瓶內加水定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定法 衍生試劑配制:稱取0.1g鄰苯二甲醛用10 ml甲醇溶解，加0.1 ml乙硫醇，0.4mol/L硼酸鈉緩沖液(PH=9.4)定容至100 ml。(用時新配，保存48小時)

精密吸取對照品工作液及樣品溶液各0.5ml，分別加衍生劑0.5ml，搖勻，在4min內取混合液10ul注入液相色譜儀，測定，即得。

2.5 線性關系考察 精密吸取牛磺酸對照品溶液以10.00、20.00、30.00、40.00、50.00mg/L按擬定的色譜條件測定峰面積，以峰面積分值為縱坐標，牛磺酸含量為橫坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程:Y=16466X+1051，r=0.9999，結果表明，牛磺酸進樣濃度在10～50mg/L范圍內，進樣濃度與牛磺酸峰面積呈良好線性關系。

2.6 精密度試驗 分別精密吸取牛磺酸對照品溶液和供試品溶液 (批號20110901)各10μl，重復進樣5次，記錄色譜圖，測定牛磺酸面積，0.42、0.43、0.41、0.42、0.41 mg/ml，其RSD為1.4%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液 (批號:20110901)10μl，分別于0、4、8、12、16、24小時進行測定，其峰面積RSD為1.6%，表明供試品溶液在24h內穩定。

2.8 陰性對照試驗 按處方比例取處方中缺章魚，照制法制取陰性樣品。取陰性樣品5ml，并按供試品溶液提取方法制成陰性對照溶液，測定，在上述色譜條件下，缺牛磺酸陰性對照溶液，在牛磺酸譜峰處無干擾峰出現，表明對被測成分無干擾。

2.9 重復性試驗 取同一批號供試品 (批號20110901)共5份，精密量取，按樣品測定項下方法進行提取，測定，結果測得平均值0.42mg/ml，RSD%=1.4%，表明重復性良好。

2.10 加樣回收率試驗 取已測知含量的供試品 (批號20110901，含量:0.42mg/ml)6份，每份精密量取樣品(精密吸取樣品溶液5ml于100ml容量瓶內加蒸餾水定容至刻度。搖勻，濾過，取續濾液，即得)1ml，精密加入0.03192mg/ml牛磺酸對照品溶液1ml，按樣品測定項下方法進行，并按上述色譜條件依法測定，計算回收率，結果見表1。

2.11 樣品中牛磺酸的含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液3批，按上述色譜條件測定，以外標法計算，結果見表2。結果表明，本法具有良好的回收率。

表1 加樣回收率試驗

表2 牛磺酸含量測定

3 討論

3.1 流動相的選擇 流動相組成及配比選擇:參考文獻［1－2］，曾試用甲醇－磷酸鹽緩沖液溶液和乙腈－水的不同配比，摸索液相色譜的最佳測定條件。試驗結果表明，選用甲醇—0.05mol/L醋酸鈉溶液 (60:40)，牛磺酸出峰時間適宜，與其它共存成分分離度大于1.5，達到基線分離，峰型和分離度較好，陰性對照無干擾。

3.2 波長的選擇 采用330nm作為檢測波長;文獻［2］(HPLC法測定食品中牛磺酸的含量)采用330nm作為檢測波長;故選擇330nm作為本品的檢驗波長。

3.3 樣品提取溶劑的選擇 精密稱取供試品10ml分別加水、流動相、甲醇30ml，制備供試液。結果表明，三種溶劑測得結果無明顯差別，但是用流動相和甲醇做提取溶劑所得雜質峰較多，故采用水為提取溶劑。

［1］國家藥品監督管理局標準 (試行)WS－5583(B－0583) －2002

［2］GB/T5009.169－2003食品中牛磺酸含量測定［S］.

［3］謝繼紅，陳玉仁等.高效液相色譜柱前衍生化法測定牛磺酸含量［J］.色譜，12(4).