高效液相色譜法測定格列齊特緩釋片有關物質和含量探討

北京萬生藥業有限責任公司（101113）趙建峰

格列齊特緩釋片為第二代酰脲類降糖藥，主要用于治療II型糖尿病。質量標準（國家食品藥品監督管理局標準YBH18762006)中有關物質的HPLC條件下，部分雜質不能有效分離，比如《中國藥典2010年版（二部）》格列齊特原料中控制的1-（3-氮雜環〔3.3.0〕辛基）-3-鄰甲苯磺酰脲（雜質Ⅰ）[1]。

1 儀器與試藥

安捷倫1200高效液相色譜儀及其色譜工作站（安捷倫公司）；1-（3-氮雜環〔3.3.0〕辛基）-3-鄰甲苯磺酰脲（雜質Ⅰ）對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：101191-201101)；格列齊特對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100269-200603)；格列齊特緩釋片（北京萬生藥業有限責任公司，規格：30mg/片）；乙腈(色譜純)；其余試劑均為分析純。

2 色譜條件

色譜柱：辛烷基硅烷鍵合硅膠，4.6×250mm（COSMOSIL）；流動相：水-乙腈-三乙胺-三氟乙酸（60：40：0.1：0.1）；流速：1.0ml/min；檢測波長：235nm；進樣量20μl。系統適用性試驗，理論塔板數按格列齊特峰計算不低于3000，格列齊特峰和雜質Ⅰ峰的分離度應大于1.8。

3 有關物質研究

3.1 實驗方法 取本品20片，研細，精密稱取適量（約相當于格列齊特50mg），加乙腈約20ml使格列齊特溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用40%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取對照溶液 20μl，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的15%；再精密量取供試品溶液、對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。

3.2 干擾實驗 按處方比例取輔料適量，按照供試品溶液的制備方法制成一定濃度的溶液，再按色譜條件進樣，同樣制備空白溶液。結果在格列齊特對照品相同保留時間處未見色譜峰，證明輔料對格列齊特的測定無干擾。

3.3 溶液穩定性考察 按要求配制供試液和對照液，于0、1、2、3、4時間分別注入液相色譜儀，證明本品溶液放置2h，有關物質明顯增加，故本品應臨用新配。

3.4 專屬性考察 高溫破壞試驗（120℃放置2小時），光照破壞試驗（4500lx放置10天），強酸破壞試驗（加1mol/L HCl 溶液5ml，于60℃水浴放置2小時），強堿破壞試驗（加1mol/L NaOH 溶液5ml，于60℃水浴放置2小時）和氧化破壞試驗（加6%雙氧水溶液5ml，于60℃水浴放置1小時），上述條件下均有新雜質產生，總雜質明顯增大，主峰與雜質峰能夠完全分離。

4 含量測定研究

4.1 標準曲線 精密稱量格列齊特對照品50.08mg，置100ml量瓶中，用40ml乙腈溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1、2、4、6、8ml置10ml量瓶中，用40%乙腈稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取各20 ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖。根據濃度與格列齊特峰面積繪制標準曲線，并求得線性回歸方程：A=30256C+5526.6，r=0.999（n=5)。可見格列齊特濃度在0.05008～0.40064g／ml之間呈良好的線性關系。

4.2 回收率實驗 按處方量稱取輔料，另取格列齊特對照品適量（約為8、10和12mg）各3份，置50ml量瓶中，三份均以按主藥為10mg處方加入輔料，加20ml乙腈溶解，用水稀釋至刻度搖勻，濾過，做為供試品溶液。按色譜條件進樣，并按外標法以峰面積計算回收率，結果平均回收率為99.6%，RSD為0.86%(n=9)。

4.3 精密度試驗 取格列齊特緩釋片一批（批號：20110228），于同一日內及不同日內分別按上述方法測定含量5次，日內格列齊特的平均含量為99.5%，RSD為0.32%；日間格列齊特的平均含量為99.3%，RSD值為0.76%。