陜產中藥鐵筷子質量標準研究

王月茹 趙 濤 盧 露 謝 偉 王西芳 陜西國際商貿學院醫(yī)藥學院（咸陽 712046）

鐵筷子，別名黑毛七、見春花、九百棒，經考諸歷代本草文獻認為中藥鐵筷子主要有兩種：毛茛科植物鐵筷子和臘梅科植物臘梅根，陜西生長的中藥鐵筷子為毛茛科植物鐵筷子的干燥根及根莖，其主要功效有清熱解毒，活血散瘀，消腫止痛。主治：膀胱炎、尿道炎、瘡癤腫毒、跌打損傷、勞傷。為了能有效控制陜產中藥鐵筷子的質量，本文中采用定性和定量實驗法對其進行了質量標準的研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 2695高效液相色譜儀，Empower色譜工作站，2996二極管陣列檢測器；SB3200DT超聲波清洗機；梅特勒電子天平。

1.2 試藥 葡萄糖對照品、甘露糖對照品、薯蕷皂苷元對照品（中國藥品生物制品檢定所提供），甲醇、乙腈均為色譜純，其他試劑均為分析純。鐵筷子藥材，分別購于陜西太白、周至、漢中等草藥店，部分藥材采自陜西秦嶺山區(qū)。

2 方法與結果

2.1 薄層層析定性鑒別［1～3］

2.1.1 鐵筷子多糖TLC鑒別對照品溶液的制備：精密稱取葡萄糖、甘露糖對照品各5mg，溶入少量50%乙醇中，移入10mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，制成濃度為0.5mg／mL的對照品溶液。

鐵筷子多糖供試品溶液的制備：稱取鐵筷子藥粉2g，于100mL錐形瓶中，加入95%乙醇50mL，連接回流裝置，加熱回流2h，取出，放冷至室溫，濾過，棄去濾液，殘渣和濾紙同時移至錐形瓶中，加入50mL蒸餾水，加熱回流2h，取出，放冷至室溫，濾過，濾液蒸干，殘渣加50%乙醇1mL溶解，即得。

薄層條件：將硅膠GF254濕法制板，110℃活化30min后使用。供試品點樣量為10μl，對照品點樣量為5μl，以乙酸乙酯－乙酸－甲醇－水（13∶3∶5∶2）的混合溶液為展開劑，將硅膠G板放置于層析缸中飽和10min后展開，當溶劑前沿線約至12cm左右時，取出，晾干，先用苯胺－鄰苯二甲酸顯色，105℃干燥數分鐘，使其斑點清晰，顯色穩(wěn)定；再用α－萘酚試液顯色，于105℃加熱至斑點清晰，于紫外光燈（365nm）下檢視。結果：在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的淺黃色和藍紫色斑點。

2.1.2 鐵筷子皂苷元TLC鑒別

薯蕷皂苷元對照品溶液的制備：精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.5mg溶液，即得。

供試品樣液的制備：稱取鐵筷子藥材粉末約4g于100mL錐形瓶中，加（30～60℃）石油醚50mL，超聲處理30min，濾過，棄去濾液，殘渣和濾紙同時移至錐形瓶中，加入50mL乙醇，加熱回流2h，取出，放冷至室溫，濾過，濾液蒸干，殘渣加3mol／L的鹽酸20mL進行酸水解（溫度為70℃），水解液依次用30mL、20mL、20mL氯仿萃取三次，合并氯仿層，蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容，搖勻，即得。

薄層條件：將硅膠GF254濕法制板，110℃活化30min后使用。供試品點樣量為15μl，對照品點樣量為10μl，以氯仿－甲醇（10∶1）混合溶液為展開劑，將硅膠G板置于層析缸中飽和10min后展開，當溶劑前沿線約至12cm左右時，取出，晾干，用10%硫酸乙醇液顯色，于105℃加熱至斑點清晰，于自然燈光和紫外光燈（365nm）下檢視。結果：在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.2 含量測定［4］

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗：用Waters 2695高效液相色譜儀，2996PDA檢測器，Empower色譜工作站進行3D掃描，以確定最優(yōu)的色譜條件為：色譜柱 Akasil－C18ODS柱（5μm，250mm×4.6mm）；流速：1.0mL／min；柱溫：25℃；檢測波長：203nm；流動相：（乙腈∶水＝85∶15）。

2.2.2 對照品溶液的制備：精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.5mg溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備：精密稱取鐵筷子藥材粉末適量，加10倍量75%乙醇，浸泡0.5h后，超聲處理30min，濾過，收集濾液，水浴蒸干，用3mol／L的鹽酸20mL進行酸水解（溫度為70℃），水解液分別用30mL、20mL、20mL氯仿萃取三次，合并氯仿層，蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容，搖勻，即得。

2.2.4 標準曲線的繪制：精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每1mL含薯蕷皂苷元0.05mg的高濃度標品溶液；再將高標液取1mL稀釋5倍，制成每1mL含薯蕷皂苷元0.01mg的低濃度標品溶液，分別取高標液（5，10，20μL）和低標液（5，10，20μL）注入高效液相色譜儀中，在上述的色譜條件下進行分析，以峰面積A為縱坐標，薯蕷皂苷元含量C（μg）為橫坐標繪制標準曲線。計算得回歸方程為：A＝2010115C－38918，相關系數r＝0.9999，結果表明，薯蕷皂苷元在0.051～1.02μg范圍內線性關系良好。

2.2.5 精密度試驗：精密稱取鐵筷子藥粉適量，按供試品溶液的方法制備樣品溶液，并依據上述色譜條件，吸取該樣品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結果RSD為1.89%，表明本方法精密度良好。

2.2.6 重復性試驗：取本品適量，共6份，照“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，分別精密取10μl進樣，在上述色譜條件下測得樣品，RSD為3.96%，表明此方法重復性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗：采取加樣回收法，取一定量已知含量的樣品6份，分別精密加入薯蕷皂苷元對照品適量，照“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定含量，計算回收率為99.32%，RSD為3.15%。結果表明，本方法回收率良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗：精密取本品適量，照“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，間隔4h進樣，記錄峰面積，共測定4次，RSD為2.33%。結果表明，供試品在12h內穩(wěn)定性良好。

2.2.9 樣品的含量測定：將樣1，樣2，樣3，樣4，樣5，樣6，照“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定，其中含鐵筷子皂苷的最高含量為0.0036%，最低為0.0028%，平均含量為0.0032%，考慮到藥材的來源差異，以及實驗誤差、儲藏等因素，故暫定陜產鐵筷子藥材中含甾體皂苷不得少于0.003%。

3 討 論 目前國內外對鐵筷子藥材的化學成分研究較多，但成分含量測定多停留在多糖上，且均采用紫外－可見分光光度法測定，該方法存在準確性差，誤差大等缺陷，較難以控制該藥材的質量。曾在實驗中嘗試用高效液相色譜法，采用蒸發(fā)光檢測器進行多糖的含量測定，但實驗過程中發(fā)現此方法穩(wěn)定性差，分離度低等缺陷。然而，鐵筷子甾體皂苷又是另一熱點活性成分，具有較強的生理活性，目前國內尚無鐵筷子皂苷類成分的標準對照品，故實驗中選擇了結構與鐵筷子皂苷類成分相似的薯蕷皂苷元為對照品，雖然測量結果會稍有出入，但由于二者的基本骨架結構相似，故在暫無標準品的情況下，仍不失為一種較佳的選擇。

在酸水解鐵筷子皂苷成苷元的實驗中，發(fā)現隨著水解溫度的升高，樣液的顏色會顯著加深；樣品液在存放的過程中，溶液顏色也會隨時間發(fā)生很大的變化，然而皂苷元的含量并未隨之變化，這一點在今后的實驗中應再做進一步研究。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.北京：化學工業(yè)出版社，2010.

［2］王冬梅.安宮消瘤膠囊質量標準的研究［J］.中藥材，2008；31（12）：1911.

［3］楊 健，苗 芳，趙 偉，等.正交設計優(yōu)選鐵筷子甾體［J］.中藥材，1991，14（3）：20－21.

［4］曾 里，夏之寧.超聲波和微波對中藥提取的促進和影響［J］.化學研究與應用，2002，14（3）：245－249.