腸易激綜合征患者腸道菌群分析及應用益生菌療效觀察

姜彬言，王巧民，胡樂義

(安徽醫科大學附屬省立醫院、安徽省立醫院消化內科，合肥230001)

腸易激綜合征(IBS)指一組包括腹痛、腹脹、排便習慣和大便性狀異常，持續存在或間歇發作，而無形態學和生化異常改變的癥候群，用解剖、生化或組織學等檢查結果都難以解釋的功能性疾病。由于其發病機制尚未完全明確，所以臨床治療上多以緩瀉劑、止瀉藥、調節腸道動力等對癥治療藥物為主，其療效并不肯定。國內外研究表明，IBS發病與腸道菌群紊亂有密切關系，補充益生菌能夠改善IBS患者癥狀，而其療效及機制尚無統一定論。本研究旨在通過對IBS患者腸道菌群分析及益生菌治療IBS的療效觀察，了解IBS患者腸道菌群變化，進一步明確益生菌制劑對IBS的療效，初步了解其治療機制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2011年3月至2011年6月于安徽省立醫院消化內科門診就診的IBS患者26例，年齡(42.9 ±13.4)歲，男性14 例，女性12 例;同時根據年齡、性別比例，選取健康對照組25例，年齡(38.8±9.3)歲，男性13例，女性12例。兩組間年齡差異無統計學意義，有可比性。

1.2 診斷標準 診斷符合羅馬Ⅲ標準(反復發作的腹痛或腹部不適，最近3個月內每月發作至少3日，伴有以下2項或2項以上:(1)排便后癥狀緩解;(2)發作時伴有排便頻率的改變;(3)發作時伴有糞便性狀改變)，經體格檢查，血、尿、糞常規、血生化及腹部超聲，電子結腸鏡或鋇劑灌腸檢查排出腸道器質性疾病。排除:年齡小于18歲及大于75歲，有腸道器質性疾病或有心血管、呼吸、腎臟等其他系統的嚴重疾病者，有腹部手術史者，妊娠期或哺乳期者，且患者近1個月內過使用膨脹劑、止瀉藥、解痙藥、益生菌及抗生素等藥物，對益生菌制劑過敏者。

1.3 方法

1.3.1 腸道菌群培養計數方法 ①培養基的選擇:雙歧桿菌選擇性培養基莫匹羅星鋰鹽改良MRS、乳酸桿菌選擇性培養基LBS、擬桿菌(主要為弱脆擬桿菌)選擇性培養基BBE、腸球菌(主要為糞腸球菌)選擇性培養基PSE瓊脂、腸桿菌(主要為大腸埃希菌)選擇性培養基EMB。②糞便標本收取:IBS患者分別于治療前后各收集糞便樣品1次進行細菌培養正常對照人群收集糞便樣品1次進行細菌培養。常溫無菌收集新鮮糞便0.5g，按照10倍連續稀釋法稀釋至10-2～10-65個稀釋度。③標本的接種與培養:取20 μl的10－4/10－5/10－63 個稀釋度稀釋液分別滴種于腸桿菌、擬桿菌、雙歧桿菌專屬培養基;取20 μl的 10－3/10－4/10－53 個稀釋度稀釋液分別滴種于腸球菌、乳酸桿菌專屬培養基。厭氧菌專屬培養基分別置入手套式厭氧箱中培養48h，需氧菌專屬培養基分別置于常規的恒溫培養箱內培養24 h。④菌群的計數與鑒定:選擇菌落數量在30-300培養基進行菌落計數，同一稀釋度取平均數，按公式CFU/g(ml)標本=某稀釋度平均菌落數×稀釋倍數×50計算出每克標本中的菌含量。取常用對數值log10 CFU/g形式，通過計算雙歧桿菌和腸桿菌對數值的比值(B/E值)來代表腸道定植抗力(CR)，正常值＞1。采用細菌三級鑒定法將細菌鑒定到屬的水平。

1.3.2 療效評價 IBS患者雙歧三聯活菌制劑［上海醫藥(集團)有限公司信誼制藥總廠生產，由雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞鏈球菌、乳糖、淀粉等組成。］3片，0.21g/片，3 次/d，治療 4 周，分別于治療前后填寫IBS患者腸道癥狀評分量表，由?？漆t生參照評分量表對IBS患者治療前后各項癥狀評分及總分進行對比觀察，腹痛時間、腹痛頻率、排便形狀異常、排便通過異常、黏液便和排便時腹脹情況6個方面進行評估，每項計為0～3分，總分0～l8分。顯效:癥狀消失或癥狀積分減少80%以上;有效:癥狀積分減少≥50%并且＜80%;無效:癥狀積分減少少于50%。總有效包括顯效和有效。

1.4 統計學處理 采用SPSS16.0統計軟件處理數據，用t檢驗分析數據。

2 結果

2.1 治療前后兩組菌群數量分析 見表1。

2.2 療效觀察 所有患者均完成原定治療計劃，26例患者中3例顯效，13例有效，10例無效，總有效率為62%，無不良反應報道。治療組治療前癥狀總積分為(11.23 ±2.40)，治療后降至(6.04 ±3.01)，兩者差異有統計學意義(P＜0.01);各項癥狀評分見表2。

3 討論

目前普遍共識認為腸道微生態平衡對人類的健康至關重要，腸道菌群通過以上皮組織為基礎、包含大量免疫細胞的腸道黏膜屏障與宿主腸道組織隔離，與腸腔環境保持動態平衡，被稱為腸道微生態平衡，一旦平衡被打破便會導致疾?。?］。IBS患者存在菌群失調已得到公認，本組研究采用糞便細菌培養的方法，對糞便細菌進行計數，結果顯示:IBS患者與健康對照組相比雙歧桿菌、乳桿菌比例明顯降低，腸桿菌比例明顯升高，定植抗力指標雙歧桿菌/腸桿菌(B/E)比例＜1且明顯降低，均有統計學意義，與Si等［2］研究相似;而腸球菌和擬桿菌無統計學意義。提示IBS患者存在腸道菌群變化，主要表現為乳酸桿菌與雙歧桿菌等益生菌的減少以及兼性菌大腸桿菌和腸球菌的增加、腸道定植抗力的降低。

表1 治療前IBS患者與正常人群糞便中菌群數量及BE值比較(±s，Log10 CFU/g濕糞)

表1 治療前IBS患者與正常人群糞便中菌群數量及BE值比較(±s，Log10 CFU/g濕糞)

注:治療前與對照組比較，aP＜0.05，bP＜0.01;治療后與治療前比較，cP＜0.01，dP＜0.05

組別 例數腸桿菌 腸球菌 乳酸桿菌 雙歧桿菌 擬桿菌B/E 值治療前 治療后對照組 25 8.20 ±0.73 6.76 ±0.95 7.07 ±1.14 8.92 ±0.88 8治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后.43 ±0.53 1.09 ±0.13 IBS 組 26 8.66 ±0.82a8.56 ±0.99 6.59 ±1.17 6.30 ±1.24 6.21 ±0.97b 7.28 ±1.08c 8.36±1.03a 8.80±0.88d 8.64 ±0.75 8.66 ±0.76 0.97±0.15b 1.04 ±0.15

表2 治療前后26例IBS患者各項癥狀評分及總積分比較(±s)

表2 治療前后26例IBS患者各項癥狀評分及總積分比較(±s)

注:與治療前比較，aP＜0.05，bP＜0.01

黏液便比例 排便時腹脹比 總積分治療前 1.61 ±0.85 1.92 ±0.93 2.23 ±0.95 1.96 ±1.08 1.4時間 腹痛時間(h/d) 腹痛發生頻率(d/周)排便形狀異常比例排便發生通過異常比例2 ±0.76 2.08 ±1.06 11.23 ±2.40治療后 1.15 ±0.88a 0.81 ±0.75b 1.23 ±0.91b 0.92 ±0.84b 0.77 ±0.71b 1.15 ±0.67b 6.04 ±3.01b

近年來國內外研究發現，補充益生菌能夠改變腸道菌群的種類與數量［3-6］，改變腸腔環境，從而改善IBS癥狀［7-9］。對IBS治療有效，但其機制、獲益程度、有效菌株并不完全明確。本研究通過對雙歧三聯活菌制劑治療前后的癥狀評分及菌群數量變化分析發現:治療后，有效率為62%;患者糞便中雙歧桿菌及乳桿菌含量均高于治療前(P＜0.05);B/E值增加(B/E＞1)，但較治療前差異無統計學意義;腸桿菌、腸球菌、擬桿菌差異無統計學意義。提示IBS患者補充雙歧桿菌及乳酸桿菌能夠調節腸道菌群，改善IBS癥狀，對IBS治療有效，為益生菌治療IBS提供了臨床依據。

益生菌作用廣泛、用藥安全，已廣泛的用于臨床尤其是消化疾病的治療，但由于其具體機制并未完全明確，缺乏大樣本循證醫學的臨床實驗研究，其臨床應用上仍存在多方面亟待解決的問題。一方面宿主個體化差異(包括宿主受體細胞、飲食、遺傳因素)可能引起不同個體間對益生菌的反應不同，在不同的生理狀態下可能表現為不同的效果［10-11］;另一方面不同的種屬、甚至同一菌屬的不同菌株作用并不完全相同，在組合益生菌中并非每一菌株都發揮作用，組合治療是否優于單一菌株治療以及其有效劑量尚無定論。相信隨著分子生物技術的不斷發展，對腸道菌群與IBS關系及益生菌作用會有更深層次的認識，能夠提出更為有效的治療方案。

［1］ Wells JM，Rossi O，Meijerink M，et al.Epithelial crosstalk at the microbiota-mucosal interface［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108 Suppl 1:4607-4614.

［2］ Si JM，Yu YC，Fan YJ.Intestinal microecology and quality of life in irritable bowel syndrome patients［J］.World Journal of Gastroenterology，2004，10(12):1802-1805.

［3］ Nanda Kumar NS，Balamurugan R，et al.Probiotic administration alters the gut flora and attenuates colitis in mice administered dextran sodium sulfate［J］.J Gastroenterol Hepatol，2008，23(12):1834-1839.

［4］ 馬莉，喬紅.馬來酸曲美布汀聯合雙歧三聯活菌治療腸易激綜合征療效觀察［J］.中國臨床保健雜志，2006，9(5):458-459.

［5］ Moayyedi P，Ford AC，Talley NJ，et al.The efficacy of probiotics in the treatment of irritable bowel syndrome:a systematic review［J］.Gut，2010，59(3):285-286.

［6］ 余倩，周蓉.雙岐桿菌活菌液對腸道菌群調節效果的研究［J］.現代預防醫學，2008，35(20):4038-4040.

［7］ Ohland CL，Macnaughton WK.Probiotic bacteria and intestinal epithelial barrier function［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2010，298(6):G807-819.

［8］ Ulluwishewa D，Anderson RC，McNabb WC，et al.Regulation of tight junction permeability by intestinal bacteria and dietary components［J］.J Nutr，2011，141(5):769-776.

［9］ Madsen K.Probiotics and the immune response［J］.J Clin Gastroenterol，2006，40(3):232-234.

［10］呂曉燕.應用臨床護理路徑對腸易激綜合征患者實施健康教育［J］.中國臨床保健雜志，2011，14(2):211-212.

［11］ van Baarlen P，Troost F，et al.Human mucosal in vivo transcriptome responses to three lactobacilli indicate how probiotics may modulate human cellular pathways［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108 Suppl 1:4562-4569.