時間分辨熒光免疫法檢測日本鰻鱺的產酸克雷伯氏菌

摘 要 從皮膚點狀出血的日本鰻鱺中分離出產酸克雷伯氏菌菌株B12，經福爾馬林滅活后，注射新西蘭兔，制備免疫抗血清，G蛋白親和層析純化得到抗體（IgG），以固定于微孔板的IgG作為捕獲抗體，Eu3+螯合物標記的IgG作為檢測抗體，建立了產酸克雷伯氏菌的夾心型時間分辨熒光免疫檢測法（TRFIA），并研究了抗體濃度、免疫時間及離解時間對檢測的影響。本方法檢出限為5.0×103 cfu/mL； 線性范圍5.0×103～1.0×107 cfu/mL，相關系數達0.99以上。交叉反應表明其具有較高的特異性，板內和板間相對標準偏差分別為5.64%和2.27%。將本方法標準化后，檢測了29份人工感染的日本鰻鱺樣品，包括鰓、腎、腸、肝和肌肉組織，結果滿意。

關鍵詞 時間分辨熒光免疫檢測； 產酸克雷伯氏菌； 日本鰻鱺