鼻咽癌血清或血漿標志物研究進展

周 丹綜述，何進才審校

(廣州中醫藥大學深圳附屬醫院 深圳市中醫院檢驗科，廣東 深圳 518033)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是發病率居首位的頭頸部惡性腫瘤，具有高度的侵襲性和轉移性，好發于中國南部，特別是廣東為世界發病率最高的地區。大多數文獻研究認為其發病與遺傳易感性、EB 病毒(Epstein-Barr virus，EBV)慢性感染及環境暴露等相關，國際癌癥研究中心1999年對致癌因子的分類標準中，EB病毒已經被明確列為人類致癌(尤其是鼻咽癌)因子之一[1]。目前最新研究還顯示miRNA與鼻咽癌亦存在緊密關聯。由于鼻咽部解剖位置隱蔽，鼻咽癌臨床表現復雜多變，早期癥狀不典型，極易漏診。因此，尋找高度敏感而特異的血清或血漿標志物，對于提高鼻咽癌的診治水平具有重要臨床意義。本文就近年來鼻咽癌血清或血漿標志物應用研究進展做一綜述。

1 與鼻咽癌相關的基因及其表達產物

鼻咽癌是一種多基因遺傳性疾病，其發生可能涉及多個細胞分裂、分化和凋亡相關的轉導通路的中斷，是癌基因、抑癌基因和調控基因等綜合作用的過程，同時還與遺傳和環境因素相關。研究已經證實鼻咽癌的發生與多個基因的表達改變有關，如 c-myc、MDM2、p53、Ha-ras在鼻咽癌患者鼻咽部組織中高表達[2]。國外有文獻報道，c-myc和bcl-2蛋白可作為反映鼻咽癌放療效果和判斷預后的標志物[3]。崔曉波等[4]在鼻咽癌相關腫瘤抗原基因篩選及鑒定研究中提到，通過篩選、鑒定所獲得的15個陽性克隆中，包括MAGE基因、CREM基因、β-2微球蛋白、核糖體蛋白等已知基因或EST，這些基因的表達及其表達產物與腫瘤的發生、發展有著密切的關系，同時特別指出鼻咽癌患者中NPC-14、NPC-18表達抗體陽性率較高，表明這些基因表達產物具有較高的腫瘤特異性，有可能作為診斷鼻咽癌的血清分子標志物。國內有資料列舉了可能與鼻咽癌相關的癌基因(TX、NAG23/FBXO30、NAG18、c-erbB-2、met、bcl-2、Her2) 和抑癌基因 (NP9、ING1、FHIT、UBAP1、NGX6、NAG7、P35、P16、Rb)[5]，這些基因及其表達產物均可能成為鼻咽癌標志物，有待我們進一步研究。

2 與EB病毒相關的鼻咽癌標志物

自從1966年Old等首次用免疫擴散試驗證明EB病毒和鼻咽癌的血清學有關以來，國內外對EB病毒作了大量研究。EB病毒及其基因表達的相關抗原和抗體以及重組的EB病毒抗原成為研究鼻咽癌病因和相關血清標志物的重要研究方向。

2.1 針對EB病毒抗原的特異性抗體檢測

EB病毒基因表達的蛋白比較復雜，在潛伏期病毒不進行復制，細胞主要合成核心抗原(EB virus associated nuclear antigen,EBNA)和潛伏膜蛋白(latent membrane protein，LMP)，在裂解期病毒基因完全表達，細胞主要合成早期膜抗原、早期細胞內抗原(early intracellular antigen，EA)，衣殼抗原(EB virus capsid antigen，VCA)。在臨床上和前瞻性流行病學調查中，用血清學方法檢測EB病毒特異性抗體，是早期發現鼻咽癌病人的重要手段。

2.1.1 臨床常用的EB病毒血清抗體

目前已廣泛用于臨床的有血清VCA-IgA、VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgA、EA-IgG、EBNA-I-gA、EBNA-IgG等抗體的檢測。周鷹[6]等在血清EB病毒抗體檢測對鼻咽癌的臨床診斷價值研究中報道，3562例就診患者中，確證鼻咽癌患者(試驗組)145例，檢測VCA-IgA陽性率達91.0%，3507例非鼻咽癌患者 (對照組)中VCA-IgA檢測陽性率為18.9%，說明VCA-IgA檢測具有較高靈敏度，但仍有一部分鼻咽癌患者表現為陰性，如在分化好的鱗狀細胞癌患者中VCA-IgA并不表現為陽性，而在部分VCA-IgA陽性的患者并不表現為鼻咽癌，可見單獨一項指標的檢測不宜作為鼻咽癌的診斷指標。EA-IgA，EA-IgG抗體的靈敏度低于VCAIgA，但特異度高于VCA-IgA，三項指標的聯合測定能夠有效地降低漏診率和誤診率，對于其中任意兩項陽性的患者成為高危人群，醫師應高度重視。

2.1.2 抗EB病毒特異性胸腺嘧啶脫氧核苷激酶(TK)抗體

TK是一種催化胸苷磷酸生成胸苷酸的酶，在DNA的合成調控中起重要作用。Connolly等[7]用ELISA法檢測人血清中針對EB病毒編碼TK的IgA抗體，證實此抗體是一個良好的鼻咽癌標志物，與VCA-IgA和EA-IgA相比，具有更高的檢測靈敏度和相似或更高的特異性。

2.1.3 抗EB病毒編碼的Z蛋白(Zebra)抗體和Rta蛋白抗體

Zebra蛋白是調節EB病毒從潛伏狀態進入復制狀態的關鍵蛋白質，Rta蛋白是EB病毒進入裂解復制狀態必需的激活元件，研究表明二者在鼻咽癌發生發展中起重要作用。Dardari等[8]研究報道聯合檢測 Zebra–IgG、VCA-IgA、EA-IgA 等可早期診斷鼻咽癌，還發現大部分EA-IgA陰性者Zebra–IgG滴度很高，尤其是年輕患者，進而推測Zebra–IgG可作為年輕鼻咽癌患者的生物標記物。湯敏中等[9]在鼻咽癌高發區采用ELISA法對鼻咽癌新發病例進行血清中Zebra–IgG抗體檢測，研究結果顯示，鼻咽癌組(試驗組)Zebra–IgG抗體檢出率達92.7%，VCA-IgA抗體陽性及 EB病毒VCA-IgA抗體陰性兩組非癌對照組中，Zebra–IgG陽性率分別為14.8%和2.0%，證實重組的Zebra–IgG抗體有良好的特異性和靈敏度，作為鼻咽癌血清學診斷指標有良好的應用前景。任軍等[10]在以Rtac2/3為抗原用于鼻咽癌病人檢測的初步研究中證實，抗Rta-IgG可以作為診斷鼻咽癌的標志物，其與Zebra抗體檢測聯合使用，可以進一步提高鼻咽癌篩選和診斷的特異性和靈敏度。

2.2 EB病毒DNA

近年來大量研究證實，EB病毒DNA是一種良好的鼻咽癌標志物，可廣泛用于鼻咽癌早期診斷、臨床分期、療效監測、預后判斷等各個方面。鼻咽癌患者血液循環中的EB病毒DNA是一種游離的DNA片斷，并不是完整的病毒顆粒。Chan和Lo通過定量分析研究后發現約80%的這種DNA片斷長度在180bp以內，通過檢測血漿DNA水平來進行診斷鼻咽癌以及觀察療效明顯優于外周血細胞中EB病毒DNA[11]。買世娟等[12]以BamH1W片段為模板進行檢測，結果在鼻咽癌患者的血漿或血清中EB病毒DNA檢出率為84.85%，明顯高于健康人(10.34%)。血漿或血清EB病毒DNA檢測方法的敏感度高于VCA-IgA(1:40)檢測，特異性相同。血漿或血清EB病毒DNA和VCA-IgA(1:40)雙陽性的正確率、陽性試驗預測值和優勢比單獨血漿或血清EB病毒DNA或單獨檢測VCA-IgA高。曹素梅等[13]在血漿EB病毒游離DNA檢測對檢測鼻咽癌患者預后的意義的研究中證實，不同預后患者的血漿EBV-DNA含量中位數有顯著性差異，預后越差者其EBA-DNA水平越高，而VCA-IgA、EAIgA的水平卻未見有明顯變化。國外也有報道血漿EBV-DNA診斷鼻咽癌的靈敏度和特異性分別為96%和93%，并可用于鼻咽癌分期、預測、復發和轉移等檢測。Leung[14]在163例鼻咽癌患者和178例正常人對照組中通過聯合檢測EB病毒DNA和VCA-IgA兩種鼻咽癌血清標志物得出結論，單獨檢測EB病毒DNA和VCA-IgA的敏感性分別為95%和81%，而二者聯合檢測后敏感性達99%，并且在36例VCA-IgA檢測陽性的正常人中，通過EB病毒DNA檢測還鑒定出其中27例VCA-IgA為假陽性，由此可知，兩種標志物聯合檢測大大提高了鼻咽癌篩查的準確性。

3 與鼻咽癌相關的微小RNA(micro RNA)

微小RNA(micro RNA)是一種內源性非編碼小RNA，調節細胞的分化、增殖和凋亡，影響疾病的發生發展。國內外已有多項研究表明，miRNA在患者血液和尿液等體液中有表達，與腫瘤等疾病有關，可能扮演著分子標志物的角色[15]。目前觀點認為循環miRNA可能是來自于凋亡和壞死的細胞，細胞的主動釋放，或者循環細胞的裂解。國內外大量實驗研究表明，血清中miRNA比較穩定，血清中miRNA不但可以抵抗酶的消化，而且耐酸耐堿，更不受溫度變化及留置時間的影響，比一般的蛋白更適宜作為腫瘤標志物，對腫瘤患者診斷具有較好的敏感性及特異性，加上取材的相對無創性，顯示出了其作為腫瘤標志物的優勢[16-17]。

羅鵬輝等[18]研究報道miR29c在鼻咽癌患者血清中低表達，可能與鼻咽癌的發生、發展和侵襲轉移有關，在研究鼻咽癌的早期診斷、預后判斷以及基因治療方面可能具有重要價值。多項研究表明miR29c在鼻咽癌細胞中低表達，抑制VEGF、細胞外基質蛋白等表達，阻止鼻咽癌發生、發展和侵襲轉移[19-21]。因此在鼻咽癌血漿或血清標志物的研究中，尋找和驗證鼻咽癌特異性miRNA是我們努力的方向。此外，與腫瘤發生相關的一些糖類物質、糖蛋白、氨基酸及其代謝產物、細胞因子、細胞分化抗原等也被運用于鼻咽癌的輔助診斷。如血清唾液酸(SA)，有研究報道EBVCA-IgA聯合SA檢測，可明顯提高鼻咽癌患者的陽性檢出率，也可以作為鼻咽癌病情變化的動態監測指標[22-23]。又如骨橋蛋白(OPN)，其與鼻咽癌晚期轉移密切相關，有望作為一種檢測鼻咽癌發病和轉移的標志物[24]。再如腫瘤相關物質群 (TSGF)、細胞角蛋白19的片段(Cyfra21-1)，可用于廣譜腫瘤的篩查，但是這兩項指標聯合檢測可明顯提高鼻咽癌陽性檢出率，也可用于評估鼻咽癌的預后和監測轉移[25-27]。也有資料顯示 CD10、CD80、CD86、CD138 等 CD 分子的表達與鼻咽癌的預后密切相關，有可能成為評價其預后和療效的標志物[28-30]。

隨著新方法、新技術的應用，不斷地有新的鼻咽癌標志物被發現和運用，但是對于在不同臨床分級和分期鼻咽癌如何選擇合適的標志物還待我們去研究和總結，同時我們也可以看到單一的標志物檢測存在不同程度的缺陷，選擇幾種合適的鼻咽癌標志物進行聯合檢測對于提高鼻咽癌的診治水平十分必要。尋找更加敏感而特異的血清或血漿標志物，如miRNA可能也將是我們今后努力的方向。

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