Ki-67和Bcl-2在延邊地區口腔鱗狀細胞癌患者中的表達及其意義

金成日，金 彬，玄云澤

(延邊大學附屬醫院口腔科，吉林延吉 133000)

隨著口腔癌的發病率增加，口腔癌已成為威脅人類健康的一大疾病。目前研究證實[1-3],口腔癌的發生涉及眾多基因表達的改變，導致細胞正常生理過程及大分子代謝紊亂、信號轉導受阻、細胞結構改變及免疫調節紊亂等，從而導致細胞異常增殖，最終形成癌。本研究通過Ki-67和Bcl-2在口腔鱗癌中表達，分析Ki-67和Bcl-2的表達與口腔鱗狀細胞癌分化程度、腫瘤大小、淋巴結轉移、臨床分期的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇延邊地區1999～2009年術前均未接受過任何抗腫瘤治療的本院病理科口腔鱗狀細胞癌術后完整包埋的石蠟標本50例，其中35例帶有癌旁黏膜和正常組織，行4 μm厚的連續切片。其中男37例，女13例;年齡29～80歲，平均61.67歲；朝鮮族23例，漢族27例；舌癌20例，口底癌17例，頰黏膜癌10例，腭癌2例，牙齦癌1例，高分化鱗癌32例，中、低分化鱗癌18例。按2002年UICC制定的TNM分類標準分期，Ⅰ、Ⅱ期34例，Ⅲ、Ⅳ期16例；T122例，T2、T328例；N038例，N1、N212例；均無遠處轉移。

1.2實驗方法 采用免疫組化PV-6000-G法進行染色,鼠抗人Ki-67單克隆抗體、鼠抗人Bcl-2蛋白單克隆抗體和PV-6000-G二步法免疫組化檢測試劑，均由北京中杉金橋生物有限公司提供。

1.3判斷標準 Ki-67的陽性在癌細胞的胞核上著色，呈棕黃色顆粒狀，Bcl-2的陽性主要為癌細胞的胞漿染色為主，均在400倍顯微鏡下觀察，每張切片隨機觀察5個高倍視野，每個視野計數1 000個腫瘤細胞，平均計算陽性細胞數所占比例，染色強度分為3種，即黃色、棕黃色、黃褐色。染色強度和陽性細胞數所占比例進行半定量處理。(1)染色強度:不著色為0分，黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分；(2)陽性細胞所占比例評定標準：陽性細胞數小于10％者為0分，10％～40％者1分，41％～<70％者2分，≥70％者3分。0～1分為陰性(-)，2分為弱陽性(+)，3～4分為中度陽性(++),5～6分為強陽性(+++)。最后按評分進行統計學處理。

1.4統計學處理 數據采用SPSS13.0統計軟件進行分析處理，組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1高分化鱗癌和中、低分化鱗癌中Ki-67和Bcl-2的表達 高分化鱗癌和中、低分化鱗癌中Ki-67和Bcl-2的表達見封4圖1、2。Bcl-2蛋白在口腔鱗狀細胞癌的陽性表達率為94％，32例高分化鱗癌中3例-，5例+，24例++；在18例中、低分化鱗癌中10例++，8例+++，Bcl-2蛋白表達在高分化鱗癌與中、低分化鱗癌間比較差異有統計學意義(P<0.01)。32例高分化鱗癌Ki-67增殖指數為(178.09±52.88)，18例中、低分化鱗癌Ki-67增殖指數為(413.06±73.22)，兩者比較差異有統計學意義(P<0.01)；32例高分化鱗癌和18例中、低分化鱗癌中Bcl-2評分指數分別為(2.81±1.12 )和(4.06±0.87)，兩者比較差異有統計學意義(P<0.01)。

2.2Ki-67、Bcl-2與腫瘤大小 T1期22例和T2、T3期28例Ki-67增殖指數分別為(235.32±117.04)和(305.14±122.17)，兩者比較差異有統計學意義(P<0.05)；T1期22例和T2、T3期28例Bcl-2評分指數分別為(2.95±1.16)和(3.61±1.03)，兩者比較差異無統計學意義(P>0.05)。腫瘤大小不同Ki-67陽性表達率有差異，Bcl-2陽性表達率無差異。

2.3Ki-67、Bcl-2與淋巴結轉移 N0期38例和N1、N2期12例Ki-67增殖指數分別為(258.08±129.65)和(277.25±130.90)，Bcl-2評分指數分別為(3.26±1.31)和(3.58±1.51)，兩者比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.4Ki-67、Bcl-2與臨床分期 Ⅰ、Ⅱ期34例和Ⅲ、Ⅳ期16例Ki-67增殖指數分別為(237.65±107.75)和(315.69±129.45)，比較差異有統計學意義(P<0.05)；Bcl-2評分指數分別為(3.12±1.25)和(3.69±1.45)，比較差異無統計學意義(P>0.05)。

3 討 論

在中國，口腔頜面部的惡性腫瘤中鱗狀細胞癌為最多見，占80％以上，目前認為口腔鱗狀細胞癌的發病與多種因素有關。惡性腫瘤細胞最明顯的生物學特征是指細胞不受機體調控，能夠無限制地增長，因而腫瘤細胞的增殖活性即成為判斷預后的重要因素之一[4]。在正常生理情況下，細胞的增殖和凋亡是相互制約，相互維持動態平衡的，一旦這種平衡失調，就會有可能形成腫瘤。

Ki-67抗體可以和人的所有增殖細胞上的Ki-67核抗體發生反應，它可以識別除G0期以外處于其他細胞周期的細胞，故能較準確地反應細胞的增殖程度。所以，Ki-67高表達是細胞增殖活躍的重要標志，對腫瘤的浸潤、轉移及預后產生影響。高分化鱗癌中可以看到Ki-67蛋白染色于角化珠周圍，呈線形排列，而中、低分化鱗癌中Ki-67蛋白的染色則不規則散在排列的，且染色強度明顯強于高分化鱗癌。本實驗中，隨著口腔鱗狀細胞癌的病理分化程度降低，Ki-67蛋白的表達呈顯著性上升趨勢，兩者比較差異有統計學意義(P<0.01)。本實驗中，高分化鱗癌和中、低分化鱗癌中均可看出離原發灶中心越近Ki-67蛋白的表達強度越強，也就是其浸潤性越強，反之隨著癌旁黏膜與原發灶中心的距離增加，Ki-67蛋白的表達變弱，直至消失。還有，Ki-67在中、低分化鱗癌癌旁黏膜中的表達遠強于高分化鱗癌癌旁黏膜，但在正常黏膜中不表達或微表達,與文獻報道一致[5]。在T0和T1、T2，Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期、Ⅳ期比較，Ki-67的表達率比較差異有統計學意義(P<0.05)，但其表達強度與有無淋巴結轉移無關(P>0.05),與Carlos等[6]、王宇等[7]報道結果相似。

凋亡是一種具有特定形態改變的細胞死亡，是在一系列基因作用下所引起的生理性過程。Bcl-2癌基因是在t(14；18)染色體易位斷點處發現的一種癌基因，過表達可保護腫瘤細胞免于凋亡[8-9]。實驗結果說明，Bcl-2表達與口腔鱗狀細胞癌的病理分化程度有關，與文獻報道結果相似[10-11]。在鱗狀細胞癌中Bcl-2表達也越明顯，也就是說越能抑制癌細胞凋亡，促進腫瘤生長。本實驗中，口腔鱗狀細胞癌的腫瘤大小、淋巴結轉移、臨床分期與Bcl-2蛋白的表達強度無相關性(P>0.05)，與文獻報道相似[12]。所以，Bcl-2可作為判斷口腔鱗狀細胞癌惡性程度的重要生物學指標,但不能作為判斷口腔鱗狀細胞癌的有無淋巴轉移的指標。

[1]Kademani D,Bell RB,Scbmidt BL,et al.Oral and maxillofacial surgeons treating oral cancer:a preliminary report from the American association of oral and maxillofacial surgeons task force on oral cancer[J].J Oral Maxillofac surg,2008,66(10):2151-2157.

[2]Sathyan KM,Nalinakumari KR,Kannan S.H-Ras mutation modulates the expression of major cell cycle regulatory proteins and disease prognosis in oral carcinoma[J].Mod pathol,2007,20(11):1141-1148.

[3]Murugan AK,Hong NT,Cuc TT,et al.Detection of two novel mutations and relatively high incidence of H-RAS mutations in Vietnamese oral cancer[J].Oral Oncol,2009,45(10):161-166.

[4]de Sousa FA,Paradella TC,Carvalho YR,et al.Comparative analysis of cell proliferation ratio in oral lichen planus,epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinoma[J].Med Oral Patol Oral Cir Bucal,2009,14(11):563-567.

[5]Dadfarnia T,Mohammed BS,Eltorky MA.Significance of Ki-67 and p53 immunoexpression in the differential diagnosis of oral necrotizing sialometaplasia and squamous cell carcinoma[J].Ann Diagn Pathol,2012,16(3):171-176.

[6]Carlos VJ,Herrero ZA,Fresno MF,et al.Expression of cyclin D1 and Ki-67 in squamous cell carcinoma of the oral cavity:clinicopathological and prognostic significance[J].Oral Oncol，2002，38(3):301-308.

[7]王宇，嵇慶海，陸洪芬，等.Fascin和Ki67在口腔鱗癌中的表達及其臨床意義[J].中國癌癥雜志，2009，19(4)：257-261.

[8]Kelly PN,Strasser A.The role of Bcl-2 and its pro-survival relatives in tumorigenesis and cancer therapy[J].Cell Death Differ,2011,18(9):1414-1424.

[9]Llambi F,Green DR.Apoptosis and oncogenesis:give and take in the BCL-2 family[J].Curr Opin Genet Dev,2011,21(1):12-20.

[10]陳學升，陳作良，程筠，等.口腔白斑和癌組織中Smad4、Bcl-2的表達及其相關性研究[J].臨床口腔醫學雜志，2009，25(12)：707-709.

[11]Sulkowska M,Famulski W,Sulkowski S,et al.Correlation between Bcl-2 protein expression and some clinicopathological features of oral squamous cell carcinoma[J].Pol J Pathol,2003,54(1):49-52.

[12]LoMuzio L,Mignogna MD,Pannone G,et al.Expression of bcl-2 in oral squamous cell carcinoma:an immunohistochemical study of 90 cases with clinico-pathological correlations[J].Oncol Rep,2003,10(2):285-291.