2-甲氧雌二醇對HL60白血病細胞凋亡的影響

陳琦 湯一榕 陳仁利 陳康銀

隨著醫學的進步與發展，5年來白血病的生存率越來越高，但仍有部分白血病患者經過正規的化療治療后不能得到完全緩解，也有部分患者緩解后再次出現復發，故如何降低急性白血病的復發率和提高急性白血病患者的生存率是我們研究的關鍵，國內研究較少，這也是臨床需要解決的問題[1-2]。

2-甲氧雌二醇（2-ME2）具有選擇性的殺傷腫瘤細胞，對正常細胞的殺傷性較小的特點，這一優點受到醫務人員的青睞。并且有研究報道，它能在體外抑制各種組織來源的腫瘤細胞進行增殖，減少腫瘤細胞數量，為白血病的治療提供具有價值意義的資料[3]。

1 材料與方法

1.1 材料 于Sigma公司購買2-ME2，CCK8試劑盒（C0038，碧云天生物技術研究所）和Annexin V試劑盒（KGA101，南京凱基生物科技發展有限公司）購買于凱基生物公司，流式細胞儀（Guava，北京昊諾斯科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養 根據所接種的試劑不同分為2組，實驗組：將不同濃度的2-ME2（10、30、50μmol/L）和HL60（購買于中科院 ）于37.0℃的溫育箱中分別培養24、48和72h，并且分別接種3個孔，另起一排再接種3個孔。對照組：第一排和第二排不加2-ME2。

1.2.2 流式細胞術檢測 不同濃度的2-ME2分別培養24、48和72h后，按照Annexin V試劑盒的操作說明，離心收集懸浮細胞，去除培養基，用冷PBS洗滌細胞2次，并在細胞懸浮液中加入5μL Annexin V-FITC，冷藏避光保存15min。再用流式細胞儀檢測細胞，計算細胞凋亡百分率。

收集第2排細胞，制成懸浮液，每孔加入10μL CCK8，在培養箱中孵育4h后使用酶標儀在450nm檢測吸光值，再使用37.0℃培養箱收集細胞，用PBS洗滌2次，5μL Annexin V-FITC，冷藏避光保存15min。再用流式細胞儀檢測細胞。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件包分析數據，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同濃度2-ME2對HL60白血病細胞的抑制作用 不同濃度2-ME2對HL60白血病細胞增殖具有抑制作用，但是隨著濃度的增大，抑制作用越來越明顯，凋亡率越來越高，呈一定的相關趨勢，其中對照組凋亡率為（1.2±0.3）%，實驗組2-ME2 10μmol/L為（9.7±2.1）%，2-ME2 30μmol/L為（11.6±3.0）%，2-ME2 50μmol/L為（15.8±2.9）%。2-ME2 50μmol/L與其他組比較差異均有統計學意義（均P<0.01）。

2.2 不同濃度2-ME2下，HL60白血病細胞的增殖情況CCK8試劑盒檢測白血病細胞的增殖結果顯示，隨著2-ME2濃度的增高，HL60白血病細胞的增殖越來越少，濃度越大，增殖越少。

3 討論

根據有關文獻報道，多種機制參與2-ME2的抗腫瘤作用，其作用過程分別為抑制血管形成[4]，抑制微管聚合，介導G2/M期組織，促進P53的聚集和阻止SOD的活性。這種作用在腫瘤細胞的強度要大于正常細胞。凋亡是在生物體內廣泛存在的一種在基因嚴密控制下發生的，以DNA被核酸內切酶降解為特征，沒有明顯細胞溶解的細胞自殺過程，由于許多人類疾病的發生與細胞的凋亡紊亂密切相關，對凋亡的研究可能在多種疾病的治療方面取得重大突破。鑒于2-ME2對腫瘤細胞的選擇性和識別性，能在一定程度上抑制腫瘤細胞的增長。本研究結果表明，2-ME2濃度越高，其對腫瘤細胞抑制作用越強。不同濃度的2-ME2作用于腫瘤細胞，能明顯抑制細胞的生長，并且具有一定的相關性。另外CCK8對腫瘤細胞檢測結果發現，隨著2-ME2濃度的增高，腫瘤細胞的增殖越來越差。

急性白血病的治療機制就是抑制腫瘤細胞的生長和促進凋亡，所以及時治療白血病非常重要。2-ME2對腫瘤細胞有較強的抑制作用，在一定程度上可以阻止腫瘤細胞的增殖、抑制腫瘤的擴散，在治療白血病的過程中發揮至關重要的作用。

[1]蔡應本，張臻毋，肖穎秀，等.2-甲氧雌二醇對HL60白血病細胞增殖和凋亡的影響[J].國際檢驗醫學雜志，2007，28（11）：961-962.

[2]蔡應木，張俏忻，王雪華，等.2-甲氧雌二醇對HL60白血病細胞凋亡及Bcl-2蛋白表達的影響[J].汕頭大學醫學院報，2009，2（4）：212-213.

[3]董瑞紅，陸志剛.吳茱萸堿誘導不同起源的白血病細胞凋亡的研究[J].實用醫學雜志，2011，27（10）：1722-1723.

[4]劉加軍，伍新堯，呂德堅.三氧化二砷對RAJ細胞的誘導凋亡作用及其作用機制[J].實用醫學雜志，2004，20(1)：11-13.