大豆纖維多糖降解技術研究進展

姚 磊，王振宇，趙海田，程翠林，富校軼，孫樹坤

（1.哈爾濱工業大學食品與工程學院，哈爾濱 150090；2.國家大豆工程技術研究中心/東北農業大學，哈爾濱 150030；3.東北林業大學林學院，哈爾濱 150040）

豆渣是大豆經提取油脂、蛋白質后的副產物（約占大豆質量的40%），每年產量約600萬t，一般都作為飼料或廢棄物處理，只有少部分被加工利用，經濟效益較低，資源浪費極大，同時也容易造成環境污染[1]。豆渣中含有豐富的不溶性纖維多糖類物質（約70%），通過微生物、酶法、氧化、物理降解等方法對豆渣進行降解可以得到不同分子質量范圍的大豆纖維降解多糖（以下簡稱大豆多糖）、寡糖以及葡萄糖等單糖類物質。近年來研究發現，多糖是一類重要的生物活性物質，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抑菌等多種生物活性和保健功能[2-4]，可作為各種藥物和保健品的有效成分。然而，由于相對分子質量大，多糖大多存在溶解性差的缺點，嚴重影響了其生物利用率。對纖維多糖的適度降解，降低其相對分子質量，可大大增進其溶解性，更利于其生物活性的釋放[4-6]。本實驗室研究發現，不溶性大豆纖維多糖，經酶解后得到的大豆纖維降解多糖具有良好的清除自由基及抗輻射功能[7]。因此，如何快速有效的降解纖維多糖，并使其保持或增進其良好的生物活性的研究，具有重要的意義。本文對近年來國內外大豆纖維多糖降解技術的研究進展作一綜述。

1 大豆纖維多糖降解技術研究

1.1 化學法

化學法降解主要有酸法、堿法及氧化法。

1.1.1 酸法處理

酸水解法是最早被研究也是研究得最深入的。應用最多的為硫酸和鹽酸。另外，硝酸或醋酸亦有應用。其中效果最好、應用最廣泛的是稀硫酸[8]。酸法水解纖維素的機理如下：酸在水中解離出氫離子，水合氫離子與纖維素鏈上的β-1，4-糖苷鍵接觸，β-1，4-糖苷鍵上的氧接受一個氫離子（H+），使氧鍵斷裂，并與水反應生成羥基同時放出H+，H+可再次催化水解反應[9-10]。酸法處理的木質纖維素原料，在半纖維素水解的同時，可破壞纖維素的結晶結構，使原料結構變疏松，從而提高了纖維素的水解率。酸法水解多糖的缺點是，反應時間較長，腐蝕金屬設備，處理后產生發酵抑制物，在有后續微生物發酵或酶法工藝處理的情況下，必須在發酵前將酸中和。熊杰等采用有機酸水溶液提取大豆渣中水溶性大豆多糖，得到最佳工藝條件：溫度110℃，提取時間1.5 h，用酒石酸調節pH 3.8，水溶性大豆多糖得率達27.65%[11]。適當條件下，酸水解法可將多糖有效水解成單糖，在單糖組分分析中有廣泛的應用[12-13]。Hoebler等研究了二步酸水解法，第一步，于72%硫酸中，25℃水解30 min，第二步，于2 mol·L-1硫酸中，煮沸120 min，利用此法對多種植物纖維多糖進行單糖組分分析，取得了較好的效果[14]。

1.1.2 堿法處理

堿性降解與上述酸性水解相似，即多糖在適當pH、溫度和時間下糖苷鍵斷裂，聚合度下降。堿性降解包括堿性水解反應和剝皮反應兩種類型。在堿性溶液中，很溫和的條件下，纖維素和半纖維素會從還原性末端發生β-氧烷基消除，逐個糖基降解，即發生剝皮反應直到產生末端基轉變為偏變糖酸基的穩定反應為止。條件強烈時，發生水解反應，使糖苷鍵斷裂，暴露更多還原端，可加速剝皮反應的發生。由于堿性降解產物異變糖酸鈉鹽會制約不溶解性纖維向可溶性多糖的轉變，因此堿解可溶性多糖得率較酸解差些[15]。馬殿君等以豆渣為原料[16]，在堿性條件下脫除蛋白，所得豆渣用1∶4的30%氫氧化鈉溶液，在45℃下反應90 min，以干豆渣計算，水溶性大豆多糖提取率為48%。孟岳成等在堿性條件下提取可溶性大豆多糖的工藝[17]，通過試驗得出最佳的提取條件為料液比1∶20，pH 11.0，提取溫度120℃，反應時間2.0 h，大豆多糖平均得率為16.24%。

1.1.3 氧化法

氧化法就是利用過氧化氫、臭氧或氧氣等氧化劑，通過氧化反應，切斷糖苷鍵，達到多糖降解的目的。其中，研究最多，操作最簡便的是過氧化氫降解法。過氧化氫降解多糖的機理目前還不清楚。比較公認的降解機理是：過氧化氫在反應體系中會產生羥自由基（·OH），羥自由基隨機地進攻糖鏈上的任意一個糖殘基的C-1位的氫，發生分子內的重排，斷裂1，4-糖苷鍵，產生分子質量較小的糖[18]。氧化法降解隨機性較大，因此，降解所得產物分子質量范圍較寬，包括一系列分子質量大小不一的寡糖及單糖。韓玉紅等利用過氧化氫對海洋硫酸多糖降解進行了研究，過氧化氫濃度為3%，原料用量為2%，反應時間為3 h，海洋硫酸多糖916平均分子質量由8 000降到2 237。用這種方法降解多糖，方法簡便易行，試劑廉價易得，選用過氧化氫作為氧化劑效率高，無殘毒，是較理想的一種降解方法[19]。王靜等用過氧化氫水解分子質量40萬的殼聚糖，80℃下，水解3 h，殼聚糖完全水溶，產物殼寡糖分子質量降到609[20]。

1.2 物理法

1.2.1 超聲波法

超聲波降解大分子物質主要是自由基氧化和機械斷鍵兩種作用的共同結果。超聲波狀態下，大分子物質產生激烈機械運動，隨著波動的高速振動及剪切力的作用而降解。超聲波產生空穴效應，在空穴破碎時，會產生局部性的高壓和劇烈的溫度變化，為自由基產生提供能量。自由基則可攻擊分子鍵，造成氧化斷裂，是大分子物質降解[21]。超聲波對多糖的降解具有節省能源，時間少，操作程序簡單，有機溶劑用量少和污染小等優點，但是該法突出的缺點是收率太低，導致生產成本過高，要實現工業化還有待于進一步的研究。陳紅等研究超聲波輔助提取水溶性大豆多糖[22]，確定最佳工藝參數為提取pH 4.5，溫度90 ℃，液料比 20∶1（mL·g-1），超聲波功率200 W，提取時間40 min，大豆多糖得率為8.82%。李宏睿等采用超聲波輔助提取水溶性大豆多糖，最優工藝參數：超聲波功率150 W，超聲波處理20 min，提取時間4 h，溫度為80℃，料液比為1∶40，大豆多糖得率為3.542%[23]。

1.2.2 輻射法

聚合物的輻射降解是聚合物在電離作用下主鏈斷裂、分子質量降低，結果使聚合物在溶劑中的溶解度增加，而相應的熱穩定性、機械性能降低。利用高能離子輻射（如離子束、γ射線）對纖維素原料進行處理，獲得有所改變的纖維素聚合度和增加纖維素的反應可及度。輻射降解是無須添加物的固相反應，成本低，反應易控，無污染，具有廣闊的發展前景。但它的實施必須建立在有電離輻射設備，且輻射強度相當高的前提之下，這種方法在實際生產應用上有一定局限性[24]。Yang等通過60Co預處理小麥秸稈，以不同的劑量進行輻射，輻射能夠明顯破壞小麥秸稈的結構，使酶水解的糖產量明顯增加，在500 kGy達到最大值13.40%[25]。李治等利用γ射線輻射降解殼聚糖，當輻射劑量達到250 kGy時，大氣環境下殼聚糖的分子質量從27.4萬下降到2.4萬，降解反應主要由殼聚糖分子鏈上的C1-O-C4鍵斷裂引起[26]。

1.2.3 等離子體降解

高壓脈沖放電是常壓下產生等離子體的主要方法。等離子降解法包括物理作用下有機物的直接降解和化學作用下活性物質對有機物的高級氧化降解[27-28]。研究認為，等離子體兼具高溫熱降解、高能電子輻射、臭氧氧化、紫外光降解、光化學氧化、超臨界水氧化、液電空化降解、高能電子、自由基、激發態分子等多種作用的綜合效應[29-30]。等離子體作用產生的這些活性物質及其高能電子轟擊纖維素或多糖中C-C鍵及不飽和鍵，發生斷鍵和開環等一系列反應，可使大分子物質變成小分子，達到降解的效果。馬鳳鳴等采用脈沖放電等離子體提取黑木耳多糖的最佳提取工藝參數為：脈沖放電電壓為40.3 kV，液料比為1∶40.5，處理時間為4.1 min。在此條件下多糖得率達8.80%[31]。

1.3 生物技術法

1.3.1 酶法

利用酶水解糖苷鍵，降低纖維素或多糖的分子質量，具有反應條件溫和，容易控制，污染小等特點[32-33]。因此酶法降解一直是多糖降解工藝研究的熱點。最常用的酶有纖維素酶、半纖維素酶及淀粉酶、果膠酶等。纖維素酶是一種多組分的復合酶，包括內切型葡聚糖酶、外切型葡聚糖酶和纖維二糖酶三種主要成分。其水解機理一般認為是纖維素大分子首先在內切酶作用下，隨機生成寡聚糖，繼而外切酶在寡聚糖鏈的非還原性端水解，主要產物為纖維二糖。纖維二糖酶將其進一步水解得到葡萄糖[34-36]。半纖維素酶系包括內切型β-1，4-木聚糖酶，外切型β-木糖苷酶及幾種輔酶，如糖苷酶和酯酶。與纖維素酶系作用機理類似，木聚糖在內切酶作用下，降解為木寡糖；β-木糖苷酶切割木寡糖的末端而釋放木糖殘基；糖苷酶可從木聚糖主鏈上水解掉阿拉伯糖和4-O-甲基葡萄糖酸；而酯酶可水解連在木聚糖木糖單元和酚酸之間或阿拉伯糖側鏈殘基和酚酸之間的酯鍵，從而將半纖維素水解成木糖、阿拉伯糖等五碳糖[37]。酶水解不需要較高的溫度，可在常壓下進行，這樣就減少了能耗。而且酶的催化專一性很高，可形成單一產物，有較高的產率[38]。羿慶燕等采用纖維素酶法與熱水浸提相結合的方法提取大豆多糖，其最優條件為酶解溫度50℃，酶解時間50 min，pH 5.5，酶添加量1.0%，大豆多糖含量可達14.18%[39]。王立峰等以脫脂豆粕為材料，選取堿性蛋白酶降解制備大豆多糖，最優條件為pH 6.0，酶解溫度50℃，提取時間1.5 h，液料比分別為20∶1（mL·g-1），大豆多糖的提取率可達到17.92%[40]。

1.3.2 發酵法

發酵法是以纖維素多糖類材料為底物，進行固態發酵或液體深層發酵，通過微生物在發酵過程中產酸、產酶作用，對纖維素進行降解，使糖苷鍵斷裂，轉化為小分子多糖、葡萄糖等產物[41-42]。研究者們對不同微生物及微生物所產多糖降解酶進行了大量的篩選[43]，取得了不斷的進步。目前，國內外有記錄的產纖維素酶的菌株已有53個屬的幾千個菌株。通過對降解纖維素微生物系統的分析，可知具有降解纖維素能力的微生物主要分布在真菌、細菌和放線菌的多種菌屬中[44-46]，其中真菌被認為是自然界中有機質特別是纖維素物質的主要降解者?？山到舛嗵恰⒗w維物質的微生物主要有：

1.3.2.1 真菌類

絲狀真菌是最主要的纖維物質降解類群。研究較多的有木霉屬、曲霉屬、青霉屬、根霉屬和漆斑霉屬[47]。絲狀真菌產酶效率高，產生的多為胞外酶，同時可產生半纖維素酶、果膠酶和淀粉酶等，是降解纖維素原料的主要微生物。目前，產量最多的為木霉屬，其中活性較高的代表菌種有里氏木霉、康氏木霉、綠色木霉等[15]。黃寧珍等用稀釋法和表面消毒法分別從腐爛木屑和霉變樹枝中分離纖維素降解真菌，獲得兩個菌株，編號為34和H[48]。研究兩個菌株的生物學及產酶特性發現：復雜多糖比簡單雙糖或單糖更利于菌株的生長，淀粉是它們的最佳碳源；當MS為無機鹽、濾紙或CMC-Na為碳源、pH為6.0～7.0時，兩個菌株的纖維素酶活較高；其中，真菌34的最高FPase和CMCase為144.14和325.67 U·L-1，真菌H則為111.38和328.47 U·L-1。王洪媛等篩選到3株具有較強纖維素降解能力的真菌菌株[49]，經初步鑒定菌株98MJ為草酸青霉（Penicillium oxalicum）、菌株W3為木霉（Trichoderma sp.）、菌株W4為擴張青霉（Penicillium expansum），菌株W4具有非常強的秸稈纖維素降解能力，10 d內對秸稈的降解率可達56.3%，對纖維素、半纖維素和木質素的分解率分別為59.06%、78.75%和33.79%。菌株W4的胞外纖維素酶活力在14.25～49.75 U·mL-1之間。馬懷良等從長期堆放稻草的土壤中分離出12株常溫纖維素分解菌[50]。通過纖維素酶活力測定，最終篩選出對纖維素分解能力較強的木霉菌屬（Trichoderma）菌株NM5，其C1酶活力、羧甲基纖維素酶活力、濾紙酶活力分別為0.0170、0.7174和1.3435 IU·mL-1。

1.3.2.2 細菌類產纖維素酶的細菌屬主要包括纖維粘菌屬、生孢纖維粘菌屬、纖維桿菌和芽孢桿菌屬，代表菌種有熱纖梭菌、嗜酸纖維分解菌等。細菌產纖維素酶主要缺點為：纖維素酶的產量較少，內切葡聚糖酶活力低；所產纖維素酶多為胞內酶或吸附在細菌細胞壁上，處于類似“固定化”的狀態，提取純化困難，大多數對結晶纖維素沒有活性。另外，在自然條件下，分解纖維原料很快的細菌，經純培養后，

分解能力會大大下降，分解緩慢。劉晶等采用納豆芽孢桿菌發酵法生產納豆，最優工藝條件：發酵溫度35℃，發酵時間24 h，后熟時間為24 h[51]。黏多糖含量達5.08%。劉占英等從蒙古綿羊瘤胃內容物中分離到一株纖維素降解細菌WH-1，對該菌株纖維素降解特性的初步研究表明，溫度37℃，pH 7.0，接種量25%、纖維二糖添加質量占總碳源質量的20%時，WH-1的72 h濾紙降解率達（16.81±2.99）%[52]。

1.3.2.3 其他類

放線菌中的黑紅旋絲放線菌、玫瑰色放線菌和纖維放線菌等產纖維素酶能力稍高。酵母自身不產纖維素酶和半纖維素酶，但可以利用酵母表達系統表達纖維素酶和半纖維素酶基因[53-54]，利用產纖維素酶工程酵母進行纖維素的發酵降解已引起不少國家的關注。

2 結語

綜上所述，目前應用于大豆纖維多糖降解的技術主要有化學法、物理法和生物降解法三大類。其中，化學法研究較早，并已有一定的應用。但化學方中的酸法、堿法降解往往伴隨著大量腐蝕性的酸、堿溶液應用，對設備強度要求較高，易造成污染；氧化法存在著降解條件不易控制，降解產物分子質量分布差異較大，單糖相對含量較高等缺點。物理法降解纖維多糖技術的研究起步相對較晚，尤其是等離子降解技術，降解原理兼具物理、化學多種綜合作用，相對復雜一些，是目前廢水有機物降解處理技術的研究熱點。隨著研究的不斷深入，對降解條件進一步優化，加強對多糖降解產物組分的控制，等離子降解有望成為一種新型的高效降解技術。生物降解法因條件溫和，容易調節，污染小，一直是近年來纖維多糖生物降解技術研究的熱點，但生物降解通常存在效果不穩定、成本高、生產規模小等缺點。因此，需要生物技術、現代分離技術不斷發展，開發出高產降解酶的菌株以及高效低成本的生物酶分離提取技術，推進生物降解法的發展。另外，組合酶降解技術的開發也亟待深入研究。鑒于各種降解方法各有優點與缺點，根據不同降解效果需要，可以考慮分步降解、聯合降解等方式，對降解方法進行組合優化，以取得更理想的降解效果。隨著國內外對植物多糖的研究逐步深入，不斷發現多種多糖及其衍生物具有很好的生物活性。多糖經降解的產物，低分子質量多糖、寡糖或單糖往往保留甚至超越多糖的生物活性，而且在水溶性方面，遠遠超過了高分子質量多糖，使其加工特性以及生物利用率大大增加。因此，新型、高效、低成本的多糖降解技術有著很大的發展空間，具有廣泛的應用前景。

[1]楊曉娟,常忠義,高紅亮,等.豆渣的改性及其應用的研究[J].大豆科學,2011(1):147-149.

[2]高學軍,李慶章.黃芪多糖和香菇多糖對vMDV人工感染雛雞紅細胞免疫功能的影響[J].東北農業大學學報,2000,31(2):169-172.

[3]王瑞,孔保華,夏秀芳,等.不同多糖對冷卻牛肉涂膜保鮮效果研究[J].東北農業大學學報,2011,42(8):13-18.

[4]崔英俊,李慶章.滑菇多糖對衰老模型鼠不同時期免疫功能的影響[J].東北農業大學學報,2004,35(2):159-161.

[5]趙婷婷,張全斌,李智恩,等.壇紫菜多糖及其降解產品對免疫細胞增殖的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2009(1):30-32.

[6]Miyazawa T,Ohtsu S,Funazukuri T.Hydrothermal degradation of polysaccharides in a semi-batch reactor:Product distribution as a function of severity parameter[J].Journal of Materials Science,2007(7):2447-2451.

[7]Yao L,Wang Z Y,Zhao H T,et al.Protective effects of polysaccharides from soybean meal against X-ray radiation induced damage in mouse spleen lymphocytes int[J].International Journal of Molecular Sciences,2011(12):8096-8104.

[8]鄧強.香蕉稈纖維素降解菌篩選及酒精制備研究[D].廣州:廣東工業大學,2008:7-9.

[9]張迪,丁長河,李里特,等.玉米秸稈生產燃料乙醇技術[J].釀酒,2006(5):56-58.

[10]Rinaldi R,Schüth F.Acid hydrolysis of cellulose as the entry point into biorefinery schemes[J].Chemistry&Sustainability,Energy&Materials,2009,2(12):1096-1107

[11]熊杰,楊玥熹,華欲飛.大豆渣水溶性大豆多糖提取工藝研究[J].糧食與油脂,2009(8):38-40.

[12]Arnous A,Meyer A S.Quantitative prediction of cell wall polysaccharide composition in grape(Vitis vinifera L.)and apple(Malus domestica)skins from acid hydrolysis monosaccharide profiles[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2009,57(9):3611-3619.

[13]Kuang H X,Xia Y G,Liang J.Fast classification and compositional analysis of polysaccharides from TCMs by ultra-performance liquid chromatography coupled with multivariate analysis[J].Carbohydrate Polymers,2011,84(4):1258-1266.

[14]Hoebler C,Barry J L,David A,et al.Rapid acid hydrolysis of plant cell wall polysaccharides and simplified quantitative determination of their neutral monosaccharides by gas-liquid chromatography[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1989,37(2):360-367.

[15]李想.發酵法制備豆渣可溶性膳食纖維[D].哈爾濱:東北農業大學,2008:11-13.

[16]馬殿君,張永泰.水溶性大豆多糖的制備及其在酸性乳飲料中的應用[J].飲料工業,2007,10(7):19-21.

[17]孟岳成,邱蓉,張學兵.堿法提取可溶性大豆多糖的工藝[J].食品研究與開發,2009,30(11):83-86.

[18]楊釗,張真慶,管華詩.一種新的褐藻膠寡糖制備方法—氧化降解法[J].海洋科學,2004(7):19-22.

[19]韓玉紅,呂志華,王遠紅,等.海洋硫酸多糖916氧化降解條件的正交實驗法優化[J].海洋湖沼通報,2007(4):116-119.

[20]王靜,曹維強,楊鑫,等.水溶性殼寡糖的制備及其對雙歧桿菌的增殖作用[J].食品科技,2007(12):83-85.

[21]李堅斌,李琳,李冰,等.超聲降解多糖研究進展[J].食品工業科技,2006,27(9):181-184.

[22]陳紅,張波,劉秀奇,等.超聲波輔助提取水溶性大豆多糖及純化工藝[J].食品科學,2011,32(6):139-142.

[23]李宏睿,袁利兵,張文波,等.大豆多糖提取工藝優化[J].江西農業大學學報,2009,31(6):1146-1151.

[24]Shin S J,Sung Y J.Improving enzymatic hydrolysis of industrial hemp(Cannabis sativa L.)by electron beam irradiation[J].Radiation Physics and Chemistry,2008(77):1034-1038.

[25]Yang C P,Shen Z Q,Yu G C,et al.Effect and after effect of gamma radiation pretreatment on enzymatic hydrolysis of wheat straw[J].Bioresource Technology,2008(99):6240-6245.

[26]李治,劉曉非,徐懷玉,等.殼聚糖的γ射線輻射降解研究[J].應用化學,2001(2):104-107.

[27]韓育宏,陸彬,李慶,等.高壓脈沖放電等離子體水處理技術研究進展[J].河北大學學報:自然科學版,2007(S1):190-194.

[28]呂丹.氣液混和放電反應器特性及甲基橙脫色的研究[D].大連:大連海事大學,2009:6-13.

[29]趙海洋,劉克富.脈沖放電等離子體污水處理可行性實驗研究[C]//上海市照明學會成立30周年慶典暨四直轄市照明科技論壇,長三角照明科技論壇,上海市照明學會2008年年會論文集,2008:36-41.

[30]劉芳,黃海濤.高壓脈沖放電等離子體水處理中的放電方式及其應用[J].工業安全與環保,2006(7):1-4.

[31]馬鳳鳴,王振宇,趙海田,等.脈沖放電等離子體技術提取黑木耳多糖[J].農業工程學報,2010,26(1):363-368.

[32]Vries R P,Visser J.Aspergillus enzymes involved in degradation of plant cell wall polysaccharides[J].Microbiology and Molecular Biology Reviews,2001,65(4):497-522.

[33]Huisman M M H,Schols H A,Voragen A G J.Enzymatic degradation of cell wall polysaccharides from soybean meal[J].Carbohydrate Polymers,1999,38(4):299-307.

[34]劉靖,夏文水.纖維素酶水解殼聚糖的特性研究[J].食品工業科技,2005(12):157-160.

[35]Gan Q,Allen S J,Taylor G.Kinetic dynamics in heterogeneous enzymatic hydrolysis of cellulose:An overview,an experimental study and mathematical modelling[J].Process Biochemistry,2003,38:1003-1018.

[36]賈翠英,歐行奇,王永輝.一株產纖維素酶絲狀真菌兼性厭氧液體發酵動力學的研究[J].東北農業大學學報,2011,42(6):123-129.

[37]遲慶國.纖維素酶水解農田纖維素廢棄物生產還原糖的研究[J].化學與生物工程,2009(6):88-90.

[38]張迪,丁長河,李里特,等.玉米秸稈生產燃料乙醇技術[J].釀酒,2006(5):56-58.

[39]羿慶燕,崔福順,華晶忠,等.纖維素酶法提取大豆多糖的工藝研究[J].延邊大學農學學報,2010,32(2):119-124.

[40]王立峰,鞠興榮,何榮,等.水溶性大豆多糖的提取工藝研究[J].食品科學,2010,31(24):111-114.

[41]黃琴,賀稚非,纖維素類物質生產乙醇研究進展[J].糧食與油脂,2008(5):8-10.

[42]胡慧東,許贛榮.黑曲霉固態發酵及酶解玉米皮[J].生物加工過程,2011(2):39-43.

[43]Badela S,Larochea C,Gardarina C.A new method to screen polysaccharide cleavage enzymes[J].Enzyme and Microbial Technology,2011,48:248-252.

[44]劉保平,王宏燕,房紅巖,等.降解秸稈的細菌和放線菌的分離與篩選[J].東北農業大學學報,2010,41(2):49-54.

[45]Murashima K,Nishimura T,Nakamura Y,et al.Purification and characterization of new endo-1,4-β-d-glucanases from Rhizopus oryzae[J].Enzyme and Microbial Technology,2002,30(3):319-326.

[46]Jorgensen H,Morkeberg A,Krogh K B R,et al.Production of cellulases and hemicellulases by three Penicillium species:Effect of substrate and evaluation of cellulase adsorption by capillary electrophoresis[J].Enzyme and Microbial Technology,2005,36(1):42-48.

[47]Castellanos O F,Sinitsyn A P,Vlasenko E Y.Comparative evaluation of hydrolytic efficiency toward microcrystalline cellulose of Penicillium and Trichoderma cellulases[J].Bioresource Technology,1995,52(2):119-124.

[48]黃寧珍,付傳明,何金祥,等.纖維素降解真菌分離篩選、產酶特性及高效水解菌系的初步構建[J].西南農業學報,2010,23(5):1489-1496.

[49]王洪媛,范丙全.三株高效秸稈纖維素降解真菌的篩選及其降解效果[J].微生物學報,2010,50(7):870-875.

[50]馬懷良,郭文學,柴軍紅.常溫高效纖維素分解菌的篩選[J].東北農業大學學報,2010,41(1):52-55.

[51]劉晶,李紅玲,王妍,等.微生物發酵法生產納豆工藝條件的優化研究[J].東北農業大學學報,2011,42(8):25-29.

[52]劉占英,侯先志,劉玉承,等.一株瘤胃纖維素降解菌的分離鑒定及其纖維素降解特性[J].微生物學通報,2009,36(3):459-464.

[53]Salinas A,Vega M,Lienqueo M E,et al.Cloning of novel cellulases from cellulolytic fungi:Heterologous expression of a family 5 glycoside hydrolase from Trametes versicolor in Pichia pastoris[J].Enzyme and Microbial Technology,2011,49(6-7):485-491.

[54]丁新麗,汪天虹,張光濤,等.瑞氏木霉纖維素酶基因在釀酒酵母中的表達研究[J].釀酒科技,2005(9):28-30,35.