抑癌基因PTEN與凋亡抑制因子Livin在乳腺癌中的表達(dá)及相關(guān)性

陳亮 戴殿祿 崔國(guó)忠 李杰 楊猛

乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展過程復(fù)雜，其中一個(gè)重要因素是相關(guān)癌基因的激活和抑癌基因的失活。繼p53基因之后，新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因PTEN是在人類腫瘤細(xì)胞中缺失和突變率最高的抑癌基因，它的缺失和突變與人類惡性腫瘤的發(fā)生普遍相關(guān)。而組織細(xì)胞凋亡失衡，細(xì)胞凋亡被抑制是腫瘤發(fā)生的另一重要機(jī)制。Livin蛋白是近些年發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞內(nèi)凋亡抑制蛋白，而PTEN則能起到誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用［1］。本課題通過檢測(cè)PTEN與Livin在乳腺癌中的表達(dá)及兩者的相關(guān)性，以探討乳腺癌的發(fā)生規(guī)律，闡述這些指標(biāo)對(duì)乳腺癌診斷及預(yù)后的重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2000年8月至2001年5月我院經(jīng)手術(shù)治療及病理材料齊全的50例乳腺癌患者的蠟塊，患者均為女性;年齡28～78歲，平均年齡54.6歲;組織學(xué)分級(jí):Ⅰ級(jí)15例，Ⅱ級(jí)26例，Ⅲ級(jí)9例;臨床分期:Ⅰ期12例，Ⅱ期13例，Ⅲ期15例，Ⅳ期10例;腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者35例。并將收集到的20例癌旁非癌乳腺組織及10例正常乳腺組織作為對(duì)照組。

1.2 方法 免疫組化SP法，蘇木精-伊紅染色。以SP免疫組化試劑盒說明書為依據(jù)進(jìn)行操作。PTEN及Livin單克隆抗體均為來源于美國(guó)UCL公司。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用已知PTEN、Livin陽性結(jié)腸癌組織作為陽性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 PTEN、Livin蛋白為陽性以細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為特征。采取以每一切片中隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野及每個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞的方法判定。染色強(qiáng)度分為三等級(jí):淺黃染1分，中度黃染2分，強(qiáng)度黃染3分;陽性細(xì)胞的百分率:陽性細(xì)胞≤5%0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分;將兩者的結(jié)果綜合分析:0分為陰性(－)，1～2為弱陽性(+)，3～4為中度陽性(++)，5～6為強(qiáng)陽性(+++);將PTEN和Livin蛋白的(－)、(+)組計(jì)為低表達(dá)組，將PTEN和Livin蛋白的(++)、(+++)組計(jì)為高表達(dá)組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)和Fisher’s檢驗(yàn)，采用spearman等級(jí)相關(guān)分析進(jìn)行兩者相關(guān)性檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN與Livin蛋白在正常乳腺組織、癌旁組織及癌組織中的表達(dá) PTEN在正常乳腺組織及癌旁組織中的陽性高表達(dá)率與在乳腺癌組織中的陽性高表達(dá)率僅為40.0%，前兩者與后者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Livin在正常乳腺組織及癌旁組織中陽性高表達(dá)率與在乳腺癌組織中陽性高表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表 1、2，圖 1、2。

表1 PTEN蛋白在乳腺不同組織類型中的表達(dá) 例

表2 Livin蛋白在乳腺不同組織類型中的表達(dá) 例

圖1 乳腺癌中Livin的陽性表達(dá)(SP×200)

圖2 乳腺癌中PTEN的陰性表達(dá)(SP×200)

2.2 PTEN和Livin蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系 PTEN和Livin的表達(dá)均與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P＜0.05)，PTEN和Livin的表達(dá)均與年齡、性別、腫瘤大小及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)。表3、4。

表3 PTEN蛋白在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 例

表4 Livin蛋白在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 例

2.3 PTEN與Livin在乳腺癌中表達(dá)的關(guān)系 PTEN低表達(dá)組中Livin高表達(dá)率為70.0%，而PTEN高表達(dá)組中Livin的高表達(dá)率僅僅為40.0%，兩者呈負(fù)相關(guān)性(r=－0.298)。當(dāng)PTEN表達(dá)率高時(shí)，Livin的表達(dá)程度低;而當(dāng)PTEN表達(dá)率低時(shí)，Livin的表達(dá)程度升高。見表5。

表5 PTEN與Livin蛋白在乳腺癌中表達(dá)的關(guān)系 例

3 討論

新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因PTEN是繼P53基因之后在人類腫瘤細(xì)胞中缺失和突變率最高的抑癌基因。乳腺癌中存在抑癌基因PTEN突變或缺失［2］，PTEN不但可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，而且能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。

本研究結(jié)果顯示:10例正常乳腺組織PTEN陽性率為100%，說明PTEN基因可能對(duì)于乳腺細(xì)胞正常功能的維持產(chǎn)生影響，并對(duì)乳腺細(xì)胞的正常新陳代謝、細(xì)胞分裂和增殖進(jìn)行調(diào)控;癌旁乳腺組織PTEN陽性高表達(dá)率為90.0%，開始存在PTEN基因的少量缺失，乳腺細(xì)胞的正常功能因此受到影響，其潛在癌變的可能性增大;而乳腺癌中PTEN陽性高表達(dá)率為40.0%，提示PTEN蛋白表達(dá)在乳腺癌組織中呈現(xiàn)進(jìn)一步的下降和減弱，可能是由于抑癌基因PTEN出現(xiàn)了進(jìn)一步缺失和突變，從而引起癌變。據(jù)Vitolo等［3］研究報(bào)道，約在50%至75%的乳腺癌患者中出現(xiàn)了PTEN的表達(dá)缺失或PI3K的激活，說明PTEN的表達(dá)缺失在乳腺癌發(fā)生中具有重要作用。本研究結(jié)果還顯示:PTEN蛋白表達(dá)水平與患者年齡和腫瘤大小無關(guān)，但與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)及腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，提示隨著PTEN蛋白丟失程度的增加，相應(yīng)乳腺癌的惡性程度及侵襲能力也加強(qiáng)，浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的傾向更大。可能是隨著PTEN基因的逐漸缺失，PTEN抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的能力進(jìn)一步減弱，并逐漸失去了調(diào)控能力。這與Ressel等［4］在研究動(dòng)物乳腺癌時(shí)發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白的丟失隨腫瘤分級(jí)及分期增加而增加相一致。由此可以得出，PTEN的低表達(dá)可能參與了是乳腺癌惡性演變過程。

Livin是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子之一，其為IAPs家族的新成員，目前已是國(guó)際研究的熱點(diǎn)。據(jù)Nedelcu等［5］報(bào)道，Livin蛋白的過度激活及表達(dá)存在于眾多的惡性腫瘤之中，如膀胱癌、惡性黑色素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤及卵巢癌等。而王亞利等［6］報(bào)道，在乳腺良性組織、乳腺不典型增生、乳腺導(dǎo)管內(nèi)原位癌和乳腺浸潤(rùn)性癌4組病例中Livin表達(dá)分別為1.0%，28.5%，57.1%，71.1%。本組結(jié)果也顯示，Livin 蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率58.0%，顯著高于乳腺癌旁組織(40.0%)及正常組織(0.0%)，說明乳腺癌組織中不僅存在Livin的異常表達(dá)，而且隨著病理類型惡性度的逐漸加重，其表達(dá)逐漸升高，提示Livin可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本組還顯示:Livin蛋白表達(dá)與乳腺癌的臨床分期、組織學(xué)分級(jí)及腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，而與腫瘤大小和年齡無關(guān)。說明Livin的表達(dá)在乳腺癌的不同發(fā)展階段差異明顯，乳腺癌的進(jìn)展越嚴(yán)重，病情越晚，其表達(dá)越高，提示隨著Livin表達(dá)增加，其凋亡抑制作用越強(qiáng)，可能對(duì)乳腺癌細(xì)胞的凋亡產(chǎn)生了巨大的抑制作用，從而促進(jìn)了乳腺癌的進(jìn)一步發(fā)展，因此Livin可能是乳腺癌惡性演變的另一重要標(biāo)志。

在本研究中還顯示PTEN和Livin的表達(dá)均與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)，同時(shí)又提示遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者較未遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者比較，PTEN的缺失更加嚴(yán)重，而遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者Livin的異常表達(dá)又明顯高于未遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，盡管差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但并不能說明PTEN和Livin的表達(dá)一定與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)，這可能與研究的樣本數(shù)太少有一定關(guān)系，造成結(jié)果產(chǎn)生偏差，如果增加樣本量，有可能獲得存在差異的結(jié)果。

50例乳腺癌中PTEN與Livin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，這與倪建華等［7］在研究腎細(xì)胞癌時(shí)發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白的表達(dá)與Livin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)相一致。PTEN低表達(dá)的乳腺癌患者中Livin呈現(xiàn)高表達(dá)，PTEN高表達(dá)的乳腺癌患者中Livin呈現(xiàn)低表達(dá)，說明PTEN蛋白丟失及Livin的異常高表達(dá)共同參與了乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程，提示預(yù)后不良。但兩者是獨(dú)立的不相關(guān)聯(lián)的通路還是存在著基因調(diào)控關(guān)系，目前尚不明確。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)PTEN與Livin這兩項(xiàng)指標(biāo)對(duì)判斷乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后可能具有重要的臨床意義。

1 劉紅霞，王蕾，李蘭梅.PTEN蛋白與雌激素受體α亞型在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義.河北醫(yī)藥，2010，32:42-43.

2 Liu JL，Mao Z，La Fortune A，et al.Cell cycle-dependent nuclear export of phosphatase and tensin homologue tumor suppressor is regulated by the phosphoinositide－3-kinase signaling cascade.Cancer Res，2007，67:11054-11063.

3 Vitolo MI，Weiss MB，Szmacinski M，et al.Deletion of PTEN Promotes Tumorigenic Signaling，Resistance to Anoikis，and Altered Response to Chemotherapeutic Agents in Human Mammary Epithelial Cells.Cancer Res，2009，69:8275-8283.

4 Ressel L，Millanta F，Caleri E，et al.Reduced PTEN Protein Expression and Its Prognostic Implications in Canine and Feline Mammary Tumors.Veterinary Pathology，2009，46:860-868.

5 Nedelcu T，Kubista B，Koller A，et al.Livin and Bcl-2 expression in highgrade osteosarcoma.Cancer Res Clin Oncol，2008，134:237-244.

6 王亞利，王中衛(wèi)，王西京.Livin、survivin在乳腺癌中的表達(dá)及其與caspase-3和臨床病理的相關(guān)性.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30:466-469.

7 倪建華，辛軍，伍伯聰.Livin和PTEN在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義.實(shí)用癌癥雜志，2011，26:42-44.