頂空氣相色譜法測定丁溴東莨菪堿中溶劑殘留量

李 華 ，羅超華 ，龍亞秋 ，楊 芳

(1.南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院，廣東 廣州 510515;2.南方醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，廣東 廣州 510515;3.廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510120)

丁溴東莨菪堿為M膽堿受體阻滯藥，在其生產過程中引入的溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷等有機溶劑，為了保證藥品的質量和用藥安全，對該原料藥的殘留溶劑的控制顯得尤為重要。本試驗將生產工藝中涉及的規(guī)定(國際協(xié)調會，ICH)應控制的有機溶劑及產品中實際殘留的有機溶劑作為檢測對象，遵循2010年版《中國藥典(二部)》附錄“殘留溶劑測定法冶的指導原則[1]，采用頂空氣相色譜法，同時測定幾種有機溶劑，方法簡便，結果準確可靠，重現性好，適用于對丁溴東莨菪堿原料藥中5種殘留溶劑的同時檢測與分析，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津GCAF－2010型氣相色譜儀，配置FID檢測器，頂空進樣器:DANIHSS 86.50，配置20 mL頂空瓶。無水甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷、乙腈、二甲基甲酰胺(DMF)均為分析純，購于廣州化學試劑廠。丁溴東莨菪堿(成都第一制藥原料藥有限公司，批號分別為 010119，010219，010319，010419)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent DB－624 柱(0.53 mm ×30 m，3 μm);柱溫:初始溫度60℃，保溫10 min;以40℃ /min升至180℃，保溫5 min;進樣口溫度:140℃;檢測器溫度:260℃;載氣:N2;載氣流速:6 mL/min;分流比:1∶5;頂空條件:平衡溫度80℃;平衡時間30 min，進樣針溫度85℃，加壓時間0.5 min，進樣體積1 mL。

2.2 溶液配制

空白溶液:精密吸取純化水5.0 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，備用;標準貯備溶液 A:稱取丙酮約 0.6 g，甲醇約 0.4 g，乙醇約 0.6 g，乙腈 0.06 g，精密稱定，加入裝有 2 mL DMF 的 25 mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，混合均勻;標準貯備溶液B:稱取三氯甲烷0.05 g，精密稱定，加入裝有2 mL DMF的100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混合均勻;標準貯備溶液C:精密吸取2.0 mL標準貯備溶液A，1.0 mL標準貯備溶液B，置100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混合均勻;標準溶液:取標準貯備溶液B 5.0 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，混合均勻，平行制備6份;供試液:精密稱取樣品0.5 g，置20 mL頂空瓶中，加入5.0 mL水，密封，使溶解混合均勻。

2.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗:將標準溶液6份，按2.1的檢測條件，連續(xù)進樣6針，記錄色譜圖，見表1和圖1 A。結果表明，系統(tǒng)適用性良好。

表1 系統(tǒng)適用性試驗數據

專屬性試驗:取空白溶液進樣，作為溶劑空白，記錄色譜圖。溶劑DMF及水對待測溶劑的測定無明顯干擾。見圖1 B。取標準溶液進樣，記錄色譜圖(圖1 A)，結果甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷相鄰兩相溶劑之間分離度 R 分別為 10.6，4.8，3.6，19.2，均大于3.0。可見，本試驗的專屬性良好。見圖1 B。

重復性試驗:取標準溶液6份，連續(xù)進樣，計算各溶劑峰面積，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷的峰面積的 RSD分別為4.5% ，3.2% ，1.2% ，2.5% ，2.6% ，均小于 10.0% ，表明方法的重復性良好。

線性關系考察:分別取2.2項下的標準貯備溶液A 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，置 100 mL 容量瓶中，另取標準貯備液B 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL 加入上述對應容量瓶中，加水稀釋至刻度，即得編號1～7標準溶液。由低濃度至高濃度，分別精密吸取編號1～7標準溶液5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，同法制備3份。設定頂空條件，在80℃平衡30 min，分別進樣，記錄色譜圖。以標準溶液中甲醇、丙酮、乙醇、三氯甲烷的峰面積對其質量濃度(以μg/mL計)，進行線性回歸，峰面積對其質量濃度呈現良好的線性關系，相關系數均大于0.995，表明該方法的線性關系良好。結果見表2。

圖1 高效液相色譜圖

表2 線性方程及相關系數

準確度試驗:取丁溴東莨菪堿樣品，研細，充分干燥，將其中殘留溶劑降至較低水平，作為樣品空白。

分別取標準貯備溶液 A 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL 至 100 mL容量瓶中，另取標準貯備液 B 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL 加入上述對應容量瓶中，加水稀釋至刻度，即得編號為1～5的標準溶液。取20 mL頂空瓶15個，分為5組，每組3個，各精密稱取丁溴東莨菪堿樣品空白 0.50 g，另取編號 1，2，3，4，5 標準溶液各5 mL，分別加入到每組頂空瓶中，使溶解，密封，混合均勻。得到相當于三氯甲烷、乙腈最大允許殘留限度的167%，133%，100%，67%和33%，相當于丙酮、乙醇、甲醇限度的125%，100%，75%，50%和25%的測試溶液。精密吸取4 mL標準貯備溶液A，1.5 mL標準貯備溶液B至100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混合均勻作為標準溶液，共制備6份。取標準溶液和測試溶液進樣，記錄色譜圖，計算每個溶劑每個質量濃度的回收率。結果甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷的平均回收率分別為 98.6%，100.8%，99.9% ，98.9% ，98.6% ，均在 90.0% ～110.0% 范圍內，表明方法的準確度高。

檢測限確定:取線性關系考察項下標準溶液，逐步用溶劑稀釋，得到適當質量濃度的溶液。在2.1項下色譜系統(tǒng)下分別進樣，記錄色譜圖。當待測組分的信噪比為2～3倍時，對應的質量濃度為該組分的最小檢測質量濃度，見表3。

表3 丁溴東莨菪堿殘留溶劑的檢測限數據表

2.4 樣品含量測定

取4批丁溴東莨菪堿樣品，按上述色譜方法測定，按外標法以峰面積計算各樣品中有機溶劑殘留量。結果表明，4批樣品中甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷的殘留量均低于設定認可的限度規(guī)定。見表4。

表4 4批溶劑的殘留結果

3 討論

本試驗選擇了Agilent DB－624毛細管色譜柱，采用程序升溫，使5種有機溶劑達到了完全分離，且在10 min內已全部出峰，大大縮短了分析時間，提高了分析效率;選擇DMF作為溶劑，與被測的5種溶劑能互溶，不干擾被測組分的測定。

本試驗中三氯甲烷不溶于水，可先加入一定量的DMF助溶后再加水。因為水是頂空進樣系統(tǒng)的首選溶劑，水中不含有機溶劑，干擾較少，且在FID檢測器上、以水為溶劑時，各殘留溶劑的靈敏度最高。專屬性方法學驗證結果表明，DMF未造成干擾。

頂空時間要確保供試品溶液的氣－液相達到平衡，可通過測定頂空時間與頂空氣體濃度－時間曲線來確定，頂空時間不宜過長，一般為30～45 min。如果過長，可能引起頂空氣瓶的氣密性變差，導致定量的準確性降低，如果時間不夠，那么就不能保證氣－液兩相達到平衡。經試驗摸索，本試驗選擇了30 min。

藥品中有機溶劑殘留量檢測盡管有很多報道，但不同的藥品測定的種類各異[2]。甲醇等5種溶劑均為合成過程中使用而且在2010年版《中國藥典(二部)》中要求檢查的對人體有害的有機溶劑。因此，檢測丁溴東莨菪堿原料藥中這5種溶劑的殘留，對于丁溴東莨菪堿的質量控制和安全使用有著十分重要的意義。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄ⅧP.

[2]韓學靜，袁志芳，杜玉民，等.毛細管氣相色譜法測定間尼索地平有機溶劑殘留量[J].藥物分析雜志，2009，29(9):1 193－1 195.