急性白血病患者血清VEGF水平及臨床意義的研究

牟曉梅，蔡尚霞，馬 靖

（1.北華大學(xué)附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科，吉林 吉林 132011；2.吉化集團(tuán)總醫(yī)院）

急性白血病是一類(lèi)造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，與其他實(shí)體瘤一樣存在著顯著的新生血管。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是促進(jìn)血管生成的關(guān)鍵因子，也是白血病生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和存活的重要因子。本課題應(yīng)用酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，分別檢測(cè)初診未治組、復(fù)發(fā)組、完全緩解組和正常對(duì)照組VEGF的血清水平，探討此類(lèi)與腫瘤相關(guān)因子在不同階段急性白血病患者體內(nèi)的變化規(guī)律，以進(jìn)一步闡明其與急性白血病發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)組 病例選自2007年1月至2010年10月在北華大學(xué)附屬醫(yī)院血液科及血液內(nèi)科住院的急性白血病患者30人，所有病例均由外周血象、骨髓象、細(xì)胞化學(xué)染色及流式細(xì)胞學(xué)檢查確診。（1）初診未治組14例：包括急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）11例，急性髓系白血病（AML）3例；男8例，女6例，中位年齡20.5歲。（2）復(fù)發(fā)組5例：其中ALL 2例，AML 3例；男3例，女2例，中位年齡21.3歲。（3）完全緩解組11例：其中ALL 8例，AML3例：男5例，女6例，中位年齡18.9歲。各診斷標(biāo)準(zhǔn)參閱內(nèi)科學(xué)第7版。

1.1.2 正常對(duì)照組 健康者12名，均為我院預(yù)防保健科經(jīng)健康體檢合格的兒童，男6名，女6名，中位年齡為22.6歲，其納入均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：（1）無(wú)心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，肝、腎功能試驗(yàn)正常。（2）無(wú)血液病史。（3）無(wú)活動(dòng)性感染，采血前24小時(shí)內(nèi)體溫正常。（4）無(wú)免疫性疾病及其他腫瘤性伴發(fā)病史。

1.2 方法

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）雙抗夾心法，試劑盒選用上海信然生物技術(shù)有限公司進(jìn)口自美國(guó)的VEGF定量ELISA試劑盒，具體試驗(yàn)步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 11.5版軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s±s）表示，兩均數(shù)之間的差別用t檢驗(yàn)，如果方差不齊用t′檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有顯著性差異，P＞0.05認(rèn)為無(wú)顯著性差異。

2 結(jié)果

初診未治組和復(fù)發(fā)組的VEGF血清濃度明顯高于正常對(duì)照組（P均＜0.05），完全緩解組的VEGF血清濃度與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異（P＞0.05），但仍高于正常對(duì)照組（表1）。初診未治組、復(fù)發(fā)組與完全緩解組之間有顯著性差異（P＜0.05）（表2）。

表1 各組VEGF水平與對(duì)照組比較

表2 初診未治組、復(fù)發(fā)組VEGF水平與完全緩解組比較

3 討論

很多生理和病理過(guò)程中都存在血管的生成，而血管生成受眾多刺激性和抑制性的血管生成因子調(diào)節(jié)聯(lián)系，VEGF是最重要的促血管生成因子，且有促腫瘤轉(zhuǎn)移、傷口修復(fù)等多種功能，在惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖中扮演重要角色。急性白血病與其他實(shí)體瘤一樣存在顯著的血管生成，且大部分腫瘤細(xì)胞有 VEGF的高表達(dá)［1］。

本實(shí)驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）雙抗夾心法檢測(cè)了30例急性白血病患者和12例健康體檢者的血清VEGF水平。結(jié)果顯示，初診未治組和復(fù)發(fā)組患者的VEGF水平明顯于正常對(duì)照組，說(shuō)明了急性白血病患者血清中VEGF存在異常高表達(dá)，而VEGF對(duì)白血病發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸過(guò)程起到重要的調(diào)節(jié)作用，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［2］。目前認(rèn)為，這是由于腫瘤細(xì)胞的大量增殖、代謝，導(dǎo)致局部相對(duì)缺氧，誘導(dǎo)VEGF表達(dá)上調(diào)所致［3］，并通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡和宿主抗腫瘤免疫，進(jìn)而增加了白血病細(xì)胞的生存能力［4］，同時(shí)也與某些原癌基因的激活、抑癌基因的失活和某些細(xì)胞因子的改變有關(guān)［5］。大量增生的新生血管能夠在化療中存活下來(lái)，作為不同的細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的來(lái)源，通過(guò)自分泌和或旁分泌作用，支持殘留白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)。

在本實(shí)驗(yàn)中，完全緩解組患者的血清VEGF水平與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異，但總體水平仍高于正常對(duì)照組，這可能是因?yàn)榧毙园籽』颊唠m然骨髓獲得骨髓緩解，但體內(nèi)仍存在微量殘留白血病病灶。此外，化療后患者持續(xù)的貧血狀態(tài)導(dǎo)致的機(jī)體缺氧，誘導(dǎo)了機(jī)體組織細(xì)胞分泌VEGF，化療損害或化療后骨髓抑制期并發(fā)的感染性炎癥刺激也可導(dǎo)致血清VEGF繼發(fā)性升高，使患者存在骨髓微血管增生，這往往成為日后復(fù)發(fā)的根源，因而需要不斷強(qiáng)化治療。

通過(guò)對(duì)初診未治組、復(fù)發(fā)組與完全緩解組的分別統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，兩組均有顯著性差異，提示目前采用的化療藥物有可能影響白血病細(xì)胞VEGF的分泌途徑、阻斷其信號(hào)傳導(dǎo)，減輕骨髓中新生血管的形成。Beigore［6］通過(guò)對(duì)VEGF在惡性血液腫瘤、實(shí)體瘤和正常對(duì)照組中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，血液腫瘤的血清VEGF表達(dá)明顯高于對(duì)照組，同時(shí)也高于實(shí)體瘤組。而在應(yīng)用了抑制血管生成藥物后，腫瘤細(xì)胞負(fù)荷明顯降低。而Kiser等［7］將抗血管新生藥物用于白血病的模型鼠，經(jīng)過(guò)4周持續(xù)性藥物治療后，白血病細(xì)胞團(tuán)減少90%。說(shuō)明，VEGF能推進(jìn)急性白血病病情發(fā)展，使用VEGF拮抗劑是一種十分有研究?jī)r(jià)值的急性白血病治療方案。這些研究結(jié)果與本課題的初診未治組和復(fù)發(fā)組的VEGF血清濃度明顯高于完全緩解組和正常對(duì)照組。由此可推測(cè)血清VEGF水平是一個(gè)有獨(dú)立意義的預(yù)后指標(biāo)，可用來(lái)監(jiān)測(cè)小兒急性白血病的發(fā)展，為急性白血病的治療提供更有價(jià)值的依據(jù)。

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