冰凍亞型紅細胞在抗血清試劑選擇中的應用

邱玉霞 竇茉莉 李雪英

冰凍亞型紅細胞在抗血清試劑選擇中的應用

邱玉霞①竇茉莉①李雪英①

目的：用冰凍亞型紅細胞選擇適合本單位使用的單克隆抗血清試劑。方法：將日常工作中確認或經上級單位協助確認的ABO亞型紅細胞進行冰凍保存，融化洗滌后分別與6個不同生產廠家(分別以A、B、C、D、E、F表示)的單克隆抗血清試劑反應，觀察試劑對弱抗原的識別敏感性。結果：6家單克隆抗血清對亞型標本的檢出率存在一定差異，充分證明單克隆抗血清試劑可造成亞型漏檢，應引起使用單位及生產廠家的注意并采取必要的措施。結論：本站用冰凍亞型紅細胞選擇6個生產廠家的單克隆抗血清，分別用于體采科初檢和檢驗科復檢，在一定程度上提高了亞型檢出率，值得提倡和推廣。同時，冰凍亞型紅細胞還可作為弱陽性質控品用于檢驗科的血型鑒定；作為實驗標本用于醫院供血庫的血型血清學質控考評以及全市或站內輸血專業技能競賽等，對提高亞型檢出率，進一步保證臨床輸血安全具有一定的促進作用。

亞型紅細胞； 抗血清； 選擇； 應用

ABO血型是人類血型系統中抗原免疫性最強，與輸血安全關系最為密切的血型系統。張旭等[1]在分析355例輸血相關的死亡病例時發現，51%的死亡是因輸入ABO不相容的血液制品所引起，其中ABO血型鑒定錯誤占1/3。因此，準確鑒定無償獻血者的ABO血型，是各級采供血機構最基本的重要工作之一。在影響血型鑒定的諸多因素中，單克隆抗血清試劑的質量是導致ABO血型誤判或漏檢的原因之一，特別是抗原比較弱的ABO亞型[2-7]，給安全輸血帶來極大隱患。因此，筆者所在站嘗試將ABO亞型紅細胞進行冰凍保存，并對6個生產廠家(分別以A、B、C、D、E、F表示)的單克隆抗血清進行檢測和選擇，取得了良好的效果，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 20%葡萄糖注射液(開封制藥集團有限公司)；PVC冷凍管、一次性塑料吸管(浙江拱東醫療科技有限公司)；Eppendorf移液器(上海富眾生物科學有限公司)；HH W21 600型電熱恒溫水浴箱(北京光明醫療儀器廠)；YDS-3亞西牌液氮生物容器(四川亞西橡塑機器有限公司低溫設備廠)。

1.2 制備冰凍紅細胞

1.2.1 標本選擇 選擇日常工作中確認或經上級單位協助確認的ABO亞型標本 7份，分別為A3、B3、Ax、AxB、Bx、ABx、B(A)紅細胞各1份， 其中B(A)表型與人源抗-A的凝集強度為“±”，A3、B3與人源抗血清的凝集強度為“2﹢mf”， Ax、AxB、Bx、ABx的弱抗原與人源抗血清的凝集強度均為“1﹢”，且以上標本保存期﹤6 d，各種傳染性指標檢測均為陰性。

1.2.2 紅細胞冷凍 在選擇好的紅細胞標本中等量加入20%的葡萄糖注射液，混勻。從液氮罐中移出部分液氮，迅速用一次性滴管直接將血液噴散進液氮中，形成的血液小珠分裝于PVC冷凍管，立即置液氮中保存備用[8]。

1.3 對6家單克隆抗血清的選擇

1.3.1 融化紅細胞 試驗前從液氮中取出冰凍紅細胞小珠，直接放入38 ℃預熱的溫鹽水中融化，洗滌3次備用[8]。

1.3.2 操作步驟 于每一種抗-A、抗-B中，分別等量加入2%～5%的A3、B3、Ax、AxB、Bx、ABx及 B(A)紅細胞懸液，于22 ℃反應15 min和1 h，以3400 r/min離心15 s，肉眼觀察凝集情況。

2 結果

6家單克隆抗血清與亞型紅細胞的反應結果，見表1。

表1 6家單克隆抗血清與亞型紅細胞的反應結果

3 討論

實驗結果表明，6家單克隆抗血清對亞型標本的檢出率存在一定差異。其中最出乎意料的是C廠家試劑，因其效價高、親和力強而被許多血站長期使用，但該試劑對7份亞型標本的檢出率卻為0，充分證明單克隆抗體試劑確實可導致亞型漏檢，應引起使用單位及生產廠家的足夠重視并采取相應措施。筆者所在站根據試驗結果，選擇F試劑用于體采科初檢，而檢驗科復檢則選擇試劑D。這樣匹配試劑，可使檢驗科更多發現可疑的亞型標本，除了正反定型不符(包括凝集明顯減弱的標本)的標本外，還較易發現與體采科初檢結果不符的標本，從而有效防止亞型漏檢。筆者所在站自2010年1月采取此項措施后，檢驗科共發現5例初復檢結果不符標本，經血型室確認后均為亞型，其中有2例罕見的B(A)表型。由此可見，選用兩家單克隆試劑用于獻血者血型的初復檢，可在一定程度上提高亞型檢出率，值得提倡和推廣。

另外，筆者還利用甘油作為冷凍劑對亞型紅細胞標本進行冰凍保存，無需特殊的液氮設備，成本低廉，簡單易行，且制備的冰凍紅細胞質量穩定，用MAP保存液于2～6 ℃冰箱儲存可使用30 d。目前，已累積比較典型的ABO亞型標本23例(含家系調查)，在工作實踐中進行了應用并取得良好效果。比如用A2、A2B細胞鑒定抗A1，從而使某些亞型得到確認；對本站每批購進的單克隆抗A、抗B試劑進行進貨驗證；作為弱陽性質控品用于檢驗科的血型鑒定；作為實驗標本用于醫院供血庫的血型血清學質控考評以及全市或站內輸血專業技能競賽等(筆者在另一篇文章中詳述)。從實際使用中筆者體會到，冰凍亞型紅細胞在以上日常工作中的適當應用，對提高本地區ABO亞型檢測的整體水平起到了一定的促進作用，不失為一種既經濟又有效的辦法。

[1] 張旭，李劍平.455例ABO正反定型不符原因分析[J].中國輸血雜志，2010，23(8):623-624.

[2] 劉麗.Am亞型1例[J].中國輸血雜志，2006，19(1):66-67.

[3] 龔裕春，黃晨佳，邱穎婕，等.2組洗滌溶液制備冰凍解凍去甘油紅細胞的效果比較[J].中國輸血雜志，2010，23(9):692-693.

[4] 方建華，劉玉振，溫濤.國產單克隆抗體試劑漏檢AX1例[J].中國輸血雜志，2004，17(2):119.

[5] 徐洪衛.街頭無償獻血漏檢AXB亞型1例[J].臨床輸血與檢驗，2006，8(1):57.

[6] 王宏法，劉玉振.國產血型定型試劑導致BX亞型漏檢1例原因分析[J].中國誤診學雜志，2008，8(25):6152.

[7] 宿蘭，楊世英，廉維，等.罕見的B(A)表型血清學及基因檢測[J].中國輸血雜志，2010，23(3):200-202.

[8] 李勇，楊貴貞.人類紅細胞血型學實用理論與實驗技術[M].北京:中國科學技術出版社，1999:224-233.

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.19.042

①河南省焦作市中心血站 河南 焦作 454000

邱玉霞

2012-04-23) (本文編輯：連勝利)