腎細(xì)胞癌中RECK和MMP-9蛋白表達(dá)的相關(guān)性

傅全勝 蘇澤軒 梁蔚波 卓育敏 徐誼朝 李 紅 康舉齡

(暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科，廣東 廣州 510632)

腎細(xì)胞癌中RECK和MMP-9蛋白表達(dá)的相關(guān)性

傅全勝 蘇澤軒 梁蔚波 卓育敏 徐誼朝 李 紅 康舉齡

(暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科，廣東 廣州 510632)

目的觀察RECK和MMP-9蛋白在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，探討兩者在腎細(xì)胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的關(guān)系。方法采用免疫組化SP法檢測(cè)57例腎細(xì)胞癌手術(shù)切除標(biāo)本中RECK、MMP-9蛋白表達(dá)情況。結(jié)果RECK在腎細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為47.4%，明顯低于癌旁正常組織(P＜0.01);而MMP-9在腎細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.7%，明顯高于癌旁正常組織(P＜0.01)。RECK和MMP-9蛋白表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)、臨床病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。兩者表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=－0.614，P＜0.05)。結(jié)論RECK和MMP-9蛋白表達(dá)與腎細(xì)胞癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為評(píng)價(jià)腎細(xì)胞癌預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。

腎細(xì)胞癌;RECK;MMP-9;侵襲;轉(zhuǎn)移

近年研究發(fā)現(xiàn)新的腫瘤抑制基因 RECK可在轉(zhuǎn)錄后水平抑制多種與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的表達(dá)，并且其高表達(dá)可抑制腫瘤新生血管的形成，從而抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移〔1〕。RECK基因與腫瘤轉(zhuǎn)移的研究成為當(dāng)今腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)研究的熱點(diǎn)。但仍缺乏與腎細(xì)胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的臨床研究。因此，本研究旨在探討RECK、MMP-9蛋白表達(dá)與腎細(xì)胞癌侵襲、轉(zhuǎn)移之間的相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取2005年1月至2010年7月我院泌尿外科所行腎癌根治性切除病例，經(jīng)病理檢查確診為腎細(xì)胞癌，收集其石蠟標(biāo)本包括腎細(xì)胞癌組織及相應(yīng)癌旁正常腎組織(距離腫瘤2 cm以上)共57例。所選病例臨床資料和病理資料均完整，術(shù)前均未進(jìn)行化療、放療及生物治療。其中男35例，女22例，平均年齡57(45～79)歲。按WHO最新組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)分為腎透明細(xì)胞癌37例，乳頭狀腎細(xì)胞癌9例，嫌色細(xì)胞癌4例，未分類腎細(xì)胞癌7例;按組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為高分化31例，中分化9例，低分化或未分化17例。采用2002年AJCC的臨床分期(cTNM):Ⅰ期10例，Ⅱ期21例，Ⅲ期15例，Ⅳ期11例。無(wú)轉(zhuǎn)移者44例，有轉(zhuǎn)移者13例。

1.2 方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)腎細(xì)胞癌組織、相應(yīng)癌旁腎組織及正常腎組織中 RECK、MMP-9蛋白的表達(dá)水平。RECK、MMP-9單克隆抗體稀釋，稀釋倍數(shù)分別為1∶100和1∶50，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。操作嚴(yán)格按試劑盒流程進(jìn)行。以0.01 mol/L PBS液(pH7.4)代替一抗作陰性對(duì)照，用已知RECK、MMP-9陽(yáng)性的乳腺癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷 RECK與MMP-9蛋白陽(yáng)性細(xì)胞均表現(xiàn)為在細(xì)胞膜或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒樣物質(zhì)。每例切片隨機(jī)在玻片的四角與中央取5個(gè)高倍(200倍)視野進(jìn)行觀察，按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行染色強(qiáng)弱判定RECK與MMP-9蛋白表達(dá)水平:①按切片中細(xì)胞著色深淺評(píng)分:細(xì)胞無(wú)顯色0分;淺黃色1分;棕黃色2分;棕褐色3分。②按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞數(shù)的百分比:＜30%為1分;30% ～70%為2分;＞70%為3分。取①，②兩項(xiàng)評(píng)分的乘積作為總積分，0～1分為陰性(－);2～3分為弱陽(yáng)性(+);≥4分為陽(yáng)性(■)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 腎細(xì)胞癌組織中RECK蛋白的表達(dá)及其與臨床生物學(xué)行為的關(guān)系 RECK蛋白陽(yáng)性表達(dá)在腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)中呈淺黃色(圖1)。腎細(xì)胞癌組織中RECK蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于相應(yīng)癌旁正常腎組織(P＜0.01)。RECK表達(dá)水平與患者的年齡、性別無(wú)關(guān)(P＞0.05)，但與腎細(xì)胞癌的組織學(xué)分級(jí)、臨床病理分期的進(jìn)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系(均P＜0.05)(表1)。

2.2 腎細(xì)胞癌組織中MMP-9蛋白的表達(dá)及其與臨床生物學(xué)行為的關(guān)系 MMP-9蛋白陽(yáng)性表達(dá)在腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)中呈深黃色(圖1)。腎細(xì)胞癌組織中MMP-9蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于相應(yīng)癌旁正常腎組織(P＜0.01)。MMP-9表達(dá)水平與患者的年齡、性別無(wú)關(guān)(P＞0.05);其表達(dá)水平隨腎細(xì)胞癌的組織學(xué)分級(jí)和臨床病理分期的進(jìn)展而逐漸升高(均P＜0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者M(jìn)MP-9蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P＜0.05)(表1)。

2.3 腎細(xì)胞癌組織中RECK、MMP-9蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析RECK蛋白的表達(dá)水平與MMP-9蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)

(r= －0.614，P ＜0.05)。

表1 RECK和MMP-9蛋白陽(yáng)性表達(dá)與腎細(xì)胞癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系〔n(%)〕

圖1 RECK、MM P-9在腎細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)(×200)

3 討論

RECK為編碼971個(gè)氨基酸的膜錨定糖蛋白，在人體內(nèi)多種正常組織細(xì)胞中均有較高水平的表達(dá)，而在各種腫瘤來(lái)源的細(xì)胞系及轉(zhuǎn)染了Ras等癌基因的細(xì)胞中不表達(dá)。RECK具有獨(dú)特的抑制MMPs表達(dá)與活性的功能，與許多癌基因信號(hào)及細(xì)胞外基質(zhì)重建密切相關(guān)，可以通過抑制MMPs活性和腫瘤血管新生兩方面影響腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移，進(jìn)而影響患者預(yù)后〔2〕。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、胃癌和乳腺癌等侵襲性較強(qiáng)的腫瘤中RECK基因在蛋白、mRNA水平的表達(dá)明顯下降，甚至無(wú)表達(dá)，與這些腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)，腫瘤組織中RECK表達(dá)陽(yáng)性的患者預(yù)后好于表達(dá)陰性的患者，提高RECK的表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移〔3〕。

本研究表明RECK基因的表達(dá)缺失在腎細(xì)胞癌的發(fā)展過程中可能起著重要作用，RECK低表達(dá)的腫瘤具有較強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力。這與Takemoto等〔4〕報(bào)道的一致。提示RECK基因的表達(dá)與腎細(xì)胞癌的預(yù)后相關(guān)。從臨床角度證實(shí)RECK蛋白是抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控蛋白，其低水平的表達(dá)趨向利于腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移涉及腫瘤細(xì)胞穿破細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)屏障、血管壁基膜及進(jìn)入宿主微環(huán)境等復(fù)雜病理過程。MMP-9不僅使腫瘤細(xì)胞通過缺損基底膜向周圍組織浸潤(rùn)，有促進(jìn)腫瘤侵襲作用;還通過影響腫瘤新生血管生成，而與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，從多方面影響腫瘤的生物學(xué)行為。

MMP-9在淋巴轉(zhuǎn)移的患者活性增高、表達(dá)過度，免疫組化表現(xiàn)為陽(yáng)性增強(qiáng)，并且與腎細(xì)胞癌的侵襲性、轉(zhuǎn)移特性呈正相關(guān)〔5〕。本研究提示可能由于腎細(xì)胞癌組織中RECK的表達(dá)水平降低，減弱了對(duì)MMP-9表達(dá)的抑制作用，從而使RECK蛋白低表達(dá)的癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。這與國(guó)外有關(guān)結(jié)直腸癌和前列腺癌的研究結(jié)果相一致〔6〕。故可以通過對(duì)RECK和MMP-9蛋白的共同檢測(cè)，來(lái)預(yù)測(cè)腎細(xì)胞癌的惡性潛能及作為預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1 Joaquim Bellmunt.Current treatment in advanced renal cell carcinoma(RCC):impactof targeted therapies in themanagement of RCC〔J〕.Eur Urol Suppl，2007;6(7):484-91.

2 Clark JC，Thomas DM，Chong PF，et al.RECK-a newly discovered inhibitor ofmetastasis with prognostic significance in multiple forms of cancer〔J〕.Cancer Metastasis Rev，2007;26(3-4):675-83.

3 Song SY，Son HJ，Nam E，et al.Expression of reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazalmotifs(RECK)as a prognostic indicator in gastric cancer〔J〕.Eur JCancer，2006;42(1):101-8.

4 Takemoto N，Tada M，Hida Y，et al.Low expression of reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazalmotifs(RECK)indicates a shorter survival after resection in patientswith adenocarcinoma of the lung〔J〕.Lung Cancer，2007;58(3):376-83.

5 林 浩，吳碧蓮，鄭清水.MMP-9在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素相關(guān)性研究〔J〕.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2010;23(3):260-1.

6 Rabien A，Burkhardt M，Jung M，et al.Decreased RECK expression indicating proteolytic imbalance in prostate cancer is associated with higher tumor aggressiveness and risk of prostate-specific antigen relapse after radical prostatectomy〔J〕.Eur Urol，2007;51(5):1259-66.

R737.11

A

1005-9202(2012)12-2480-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.015

廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金(WSTJJ 20081117440102196901074030)

傅全勝(1969-)，男，主治醫(yī)師，在職醫(yī)學(xué)博士，主要從事泌尿系腫瘤的診斷及微創(chuàng)治療研究。

〔2012-01-09收稿 2012-02-10修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)