中藥薄層色譜鑒別的實習帶教探討

黃月純

中藥薄層色譜鑒別的實習帶教探討

黃月純

（廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣州510405）

畢業實習是中藥學或藥學專業教學計劃中的重要組成部分，是學生從學校走入工作實踐的重要橋梁，醫院藥學部（藥劑科）的藥檢室是臨床實習帶教的主要部門之一，對藥檢室中藥檢驗的薄層色譜鑒別的實習帶教進行了探討。

藥檢室；中藥；薄層色譜法；實習帶教

畢業實習是學生從學校走入工作實踐的重要橋梁，通過實習可鞏固所學的基礎知識，培養學生的操作技能，有利于提高分析和解決實際問題的能力。我院藥劑科每年均承擔較重的中藥或藥學專業畢業實習帶教任務，藥檢室是藥劑科實習班組之一，一般安排學生實習時間多為2～4周，時間較短，但涉及的專業知識面較廣。近年國家有關部門對醫院制劑的質量控制要求不斷提高，要求制劑用的中藥盡可能檢驗合格后投料，因此，制劑用中藥的檢驗工作已成了藥檢室的重要工作之一。本文根據學生實習時間及以往帶教中遇到的問題對藥檢室中藥檢驗的薄層色譜鑒別實習帶教模式進行探討。

1 崗前安全培訓、準確度和精密度的學習

中藥薄層色譜鑒別涉及有毒或易燃易爆等危險化學試劑，在實驗前應介紹藥檢室的試劑室管理制度及化學試劑使用管理制度，鞏固學生的安全意識。藥品檢驗的取樣量問題，是一個簡單而容易忽視的問題。因此，在實驗前應讓學生掌握取樣量的準確度和試驗的精密度[1]，能正確“稱重”或“量取”，減少在實驗中可能出現的差錯。

2 薄層色譜技術的介紹

中藥的真偽優劣直接關系到制劑質量的安全和有效。目前中藥真偽鑒別方面通常采用性狀鑒別、顯微鑒別和薄層色譜鑒別等。薄層色譜因具有良好的專屬性，自《中國藥典》1990年版起，被廣泛應用于中藥鑒別中。前些年我國中藥薄層色譜鑒別基本是以手工點樣、實驗室自制薄層板進行試驗，色譜質量往往不高，分離度、重現性均難以達到滿意效果。近年政府對藥檢部門的設備投入明顯加大，為進一步提高中藥薄層色譜鑒別技術提供了良好的條件。自《中國藥典》2005年版開始，逐漸使用商品預制薄層板，進一步細化操作條件。對供試品溶液的制備、薄層板的活化、點樣、展開、顯色、色譜圖像的拍攝和制作等均有新的要求，色譜質量有了明顯提高。

根據對近年到藥檢室的中藥或藥學專業實習生的了解，他們在學校的實驗課中較少涉及薄層色譜鑒別的規范化操作，或大多只是曾經在實驗室進行自制薄層板手工點樣的簡單操作，色譜質量往往很不理想。因此，在實驗前就薄層色譜實驗操作技術方面的一些共性問題對學生進行介紹非常有必要。

3 薄層色譜實驗操作技術的掌握

3.1 樣品的制備 中藥供試品溶液的制備一般用溶劑提取法（加熱回流、超聲提取等）。如樣品含有較多的雜質，如鞣質、葉綠素、糖、粘液質等，多采取適當的預處理，減少雜質的干擾，以便獲得比較清晰的薄層色譜。中藥飲片樣品的預處理相對簡單，容易操作。但應提醒學生注意供試品溶液及對照藥材溶液制備相對量化操作，目的是使樣品的色譜與對照藥材的色譜更有可比性。

3.2 薄層板的準備 學生開始實驗時，最好先用手工自制板進行試驗，但必須注意保證自制板的質量。有條件的情況下最好采用預制薄層板。有學生認為預制薄層板可以直接使用，實際上預制板貯藏時間過長，表面涂布的硅膠吸附劑容易被污染，需要在使用前用甲醇、甲醇－二氯甲烷混合溶劑或異丙醇在不密閉的展開缸中上行展開至最前沿，取出晾干，重新活化[2]。有學生認為預制薄層板一定比手工自制板效果好，其實未必，對某些成分（如黃酮類）采用手工自制板效果往往也較理想。

3.3 點樣 樣品的點樣是影響色譜效果的主要因素之一，為了保證色譜的圖譜質量，藥檢部門多采用半自動或自動的條帶式噴霧點樣，少數品種是點狀點樣。實際應用中如無相應的儀器，也可手工接觸式點狀點樣或條帶點樣，但操作需要細致小心，原點盡量減少溶劑擴散現象，特別是點樣量較大時更要注意。學生開始點樣操作時技術不好，往往損傷薄層板板面，斑點過大；同時，當活化后的硅膠薄層板從干燥器中取出，從準備點樣到展開前，薄層板是暴露在實驗室的大氣中，薄層板的活性就取決于實驗環境的相對濕度，暴露時間過長，容易影響薄層板的活性。因此，可讓學生先在自制薄層板訓練，掌握點樣技巧后方能在預制薄層板操作。此外，應指導學生控制供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液盡可能定量制備，定量點樣，則樣品色譜不僅可以鑒別“真偽”，還可以粗略地進行量化評價，在一定程度上提供“優劣”的信息[2]。

3.4 展開 樣品的展開也是影響色譜效果的主要因素之一，也是學生容易疏忽的部分，在帶教時應提醒學生注意一些容易疏忽的問題。薄層展開用薄層色譜專用展開箱最多的是直立式展開箱，雙槽展開箱具有節省溶劑、便于預平衡、可控制展開箱內相對濕度等優點，應用最多。但學生在操作時常對飽和狀態控制不好，如展開箱在通風柜中飽和后，在加薄層板過程時間過長，使飽和狀態的溶劑蒸氣揮發，達不到飽和狀態，因此，應迅速加入薄層板，同時展開注意展開箱的密閉。大多數中藥樣品適宜用直立式不飽合或部分飽和。展開劑用的溶劑需使用分析純級別，臨用前配制，不可多次反復使用，這點也需提醒學生注意。展開劑如需分層，則放置分層后按要求分取上層或下層，備用。此外，由不同極性有機溶媒組成的展開劑常有少量不易察覺的分層現象，會嚴重影響展開效果，因此，展開劑配好后可先放置片刻，再將上清液倒入展開箱中。多數品種展距為70～90mm，取出，晾干。

3.5 顯色 色譜斑點本身有顏色者可直接在日光下觀察，斑點在紫外光激發下可發射熒光者，可直接在紫外光燈下觀察熒光色譜。中藥大多需要用顯色劑使斑點顯色，常用噴霧法，但需將試劑均勻噴灑于薄層板面，直接觀察或加熱顯色后觀察。加熱顯色須注意加熱時間和溫度，如用含羧甲基纖維素鈉的手工自制薄層板代替預制板，注意加熱溫度過高或加熱時間過長，容易引起板面的焦化，如用硫酸等顯色劑，更易造成板面的炭化而影響顯色效果，需要特別留意。但有些方法只是說加熱至斑點顯色清晰，未注明加熱溫度，學生往往把握不好，無法達到色譜要求，如白芍中芍藥苷的鑒別[3]，方法為噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，如溫度控制在60℃左右，斑點為清晰的藍紫色，如溫度超過100℃，則對照品斑點都有可能消失。有的品種需熏以試劑或試液的蒸氣顯色，如延胡索熏以碘蒸氣后檢視[3]，但應揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈（365nm）下檢視，否則斑點顏色明顯較暗。

4 選擇有代表性的中藥 讓學生參與檢驗全過程

大黃是常用中藥，《中國藥典》大黃項下薄層色譜鑒別方法[3]涉及薄層色譜的多個方面，具有代表性，可作為學生帶教的典型實例。供試品溶液的制備是先采用甲醇加熱回流提取，濾液蒸干后加水溶解，加鹽酸水解，然后用乙醚提取游離蒽醌，制備方法涉及回流提取、水解、液液萃取方法等。采用大黃對照藥材及大黃酸對照品進行對照，大黃對照藥材可采用掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃，因為這三種大黃均具有大黃的五個游離蒽醌斑點。采用以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板，可為手工鋪板，但應注意手工板質量。展開劑采用石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上層溶液，因為石油醚（30～60℃）沸點較低，在室溫較高條件下展開，石油醚容易揮發，造成展開劑系統極性增大，斑點展距偏低，分離度不佳，因此，應指導學生在適宜的實驗溫度下操作。展開晾干后先置紫外光燈（365nm）下檢視游離蒽醌的橙黃色熒光斑點，然后置氨蒸氣中熏后，游離蒽醌斑點變為紅色。通過大黃等典型實例的帶教，讓學生參與檢驗全過程，能加強學生對薄層色譜技術的掌握。

根據學生的實習時間及學習要求，本文對藥檢室中藥檢驗的薄層色譜鑒別實習帶教模式進行了探討，以期有效地提高學生的實驗操作技能，提高實習質量。

[1] 黃月純.藥檢室制劑檢驗的實習帶教模式探討[J].現代醫院,2011,11(5): 126-127.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典中藥材薄層色譜彩色圖集(第一冊)[S].北京:人民衛生出版社,2009:6.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010,96 (130):22.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.18.047

1672-2779（2012）-18-0065-02

2012-07-14）