中藥體外抗菌作用實驗方法初探

陸繼梅 孟建華 安 立 安紅梅

中藥體外抗菌作用實驗方法初探

陸繼梅 孟建華 安 立 安紅梅

中醫外科學；體外抗菌；藥敏檢驗學實驗

為了揭示中醫外科外用中藥的體外抗菌譜及抗菌力，以進一步指導臨床應用及組方藥物的篩選。筆者對我院應用40年歷史的9種傳統制劑，以及檢索到的傳統方、經驗方和各醫院的協議方共52首方劑中出現的59味中藥，運用現代臨床藥敏學檢驗學方法，對其抗菌作用進行定性、定量的細菌學研究。經過三年的努力，初步完成了中藥體外抗菌作用的研究，現就實驗方法中的心得體會分享如下，以期剖磚引玉，望各位同道借鑒。

1 實驗設計中的問題

實驗設計造成數據誤差。早期的中藥抑菌作用實驗是將菌株植入不同濃度的中藥藥液中，或用挖溝法來觀測中藥體外抗菌作用。如此的實驗設計，改變了細菌的正常生存條件，所測定結果是一定濃度的中藥液對處于異常生存條件下菌種的抑菌作用值。故見文獻及中藥專著中許多中藥體外抗菌作用好，抗菌譜廣。在嚴格按照現代臨床藥敏學檢驗學方法對中藥進行體外抗菌作用進行細菌學研究時發現，絕大多數中藥抗菌譜窄、抗菌力低。汞、鉛等化合物形成的丹類藥物（如紅粉、輕粉）抗菌譜廣、抗菌力強，與教科書及中藥專著中所述差異極大。

單味、單方面研究多，綜合研究少。中醫外科外用藥的臨床作用是多因素的，中藥外用于局部組織后可產生吸附、凝血、鎮痛、形成保護層（或膜）、抑菌殺菌、改善局部血液循環、促進纖維細胞的增長、激活趨化巨噬細胞等綜合作用，對創面的愈合有顯著促進作用。在實驗設計中為了追求特異性指標，往往多是單一因素研究。例如筆者的實驗設計就忽略了上述因素，只觀察了實驗室條件下中藥體外抗菌作用的一個方面，所得結果是一種相對值，缺乏對整體作用的評估。

研究藥物或組方時傳統／經典方劑少，經驗方或自擬方多。在檢索資料中發現，對傳統／經典藥物的研究比較，例如生肌散、九一丹等系統研究比較罕見，比較多見的是自擬方劑及單味藥的研究與觀察，缺乏廣泛應用的基礎，難以反應出普遍規律。

劑型作用比較研究缺乏。中醫外科治療瘡瘍的外用藥在臨床上有散劑、膏劑、水劑等劑型，但在檢索資料時未見到中藥的體外抗菌／抑菌作用研究在不同劑型以及不同劑型之間的比較研究。

2 實驗操作中的問題

2.1工作量估計不足由于實驗涉及藥劑科、檢驗科、制劑室等多科室、多人的合作，需要對環節進行控制以保證實驗的質量，這需要提前做好充足的準備協調工作，必要時制定操作手冊。盡管進行了許多準備工作，但由于對臨床藥敏檢驗學方法的認知有限，還是低估了其工作，尤其是進行液體稀釋法時，工作中需要對有抑菌作用的每一味中藥從1毫克開始進行倍倍稀釋操作，試管應用量達數千支／次之多，致使實驗觀察期限一拖再拖，未能按期完成。體會到如果是涉及多學科時，充分準備必須是對專業細節的掌握。

2.2溶解度的影響擬實驗觀察的中藥大致有礦物質、植物類、脂性類。為了符合藥敏檢驗學的操作規程，在實驗中分為了兩大類：易溶性藥物、非易溶性藥物。易溶性的藥物進行了水提取，非易溶性藥物進行了研粉加工。

此種操作方法，對非易溶性藥物的觀察基本上是與臨床應用情況符合。但對植物類藥物忽略了其溶解度與溶劑的問題，可致使有效成分不能充分析出，因此實驗的觀察值應該只是水溶狀態值，這將與使用不同制劑時的作用出現偏差。所得出的實驗數據應該是在一定條件下的數值，不具備普遍性。

2.3酸堿度的影響在理論上環境的酸堿度對細菌生長會產生影響，在實驗之初曾經進行過部分藥液的測定，但隨著工作量的增加不得不放棄。對于外用中藥環境酸堿度對細菌生長的影響，筆者認為需要進一步的觀察，這對日后中藥外用制劑的備置有指導性的意義。

2.4藥物的協同作用目前的多數藥物觀察是單味藥物或是復方的研究，對藥物協同性的研究比較少。筆者的實驗中均是采用的單味藥物觀察。在非易溶性藥物抗菌作用觀察中輕粉、紅粉、硼砂三種中藥在兩實驗藥片之間出現抑菌范圍連片，形成不對稱抑菌環，出現明顯的協同作用，遺憾的是未做聯合用藥的抑菌作用實驗。此現象對日后的組方用藥和藥物實驗也提出一個方向，輕粉、紅粉在組方時很少同時應用，進一步的研究可對其用量和組方提供定量定性的指導作用。

2.5非易溶性藥物的制備與操作問題此類多是礦物質類藥物，在臨床應用時多為散劑。在制備的時候使用了小型研磨機，過200目篩備用，這比一般臨床應用的粉劑顆粒要細。在用于瓊脂法的時候，為了保證將藥粉制成均勻的圓片狀，我們特制了環與栓。將直徑為5mm圓環放在滅菌的載玻片上，而后放入已稱重2mg藥粉攤均，用與圓環吻合的栓將藥粉壓成圓片狀。在操作過程中各環節保證無菌操作，防止交叉污染。如此的操作使藥片的形狀得以統一控制，保證了抑菌環測量的準確性。

2.6高壓滅菌是否對中藥有效成分造成破壞為了保證實驗數據的準確性，防止交叉污染，在實驗中對所有的藥物均進行了高壓滅菌。在理論上對中藥有效成分會產生一定的破壞，但為了與臨床使用相符合和醫療安全需要也只能如此了?，F在許多醫院的中藥外用散劑都進行高壓滅菌。曾有報道特殊菌種（破傷風桿菌）隨中藥外用換藥造成感染。其次，在臨床上除了去腐生肌散劑外，多數外用中藥散劑均制備成油紗條使用。

[1]林滔,黃寧.中草藥體外抗真菌活性實驗方法分析[J].中國藥師,2006,3:55.

[2]陶慶春.中藥對細菌抑菌作用的體外實驗方法學研究[J].實用檢驗醫師雜志,2011,03(01):22-23.

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