水產品中微生物的快速檢測方法探討

趙會生

水產品中微生物的快速檢測方法探討

趙會生

本文主要闡述了幾種水產品中一些可能致病的微生物快速檢測的方法，這些水產品的檢測方法為水產品的檢測提供更加安全有力的保障。通過對幾種比較有效快速檢測方法的介紹以期可以更好的應用在水產品微生物中，更好的保障人們的健康。

水產品；微生物；檢測方法

一般水產品的致病生物包含了以下幾種，第一種是水產品本身就有的一些細菌，廣泛分布在水中，比較常見的如李斯特菌（Listeria monocytosens）和冷源性細菌肉毒桿菌（Clostridium Botulinum）。第二種是人為因素所造成的一些細菌，一般存在動物以及人的腸道，后因為人或者動物對水環境的污染而產生的一些細菌，比較常見的有大腸桿菌（Escherichia coli）和沙門氏菌（Salmonellussp）。第三種以雙殼軟體動物作為載體的病毒，如諾伏克病毒（Norwalk Vivus）和甲型肝炎病毒（HepatitistypeAHAV）。上述微生物一般是通過水產品來對人體造成影響，患者一般表現為嘔吐以及胃腸炎和痢疾等癥狀。目前對于水產品的檢驗主要是針對水產品和水產品成品中的致病菌以及污染所進行的檢驗。但常規檢驗一般需要 6～7d，通常也有特異性的缺點。這與水產品的儲存時間比較短，在實踐中需要進行快速的檢驗的要求不符合。生物技術有著其他技術在水產品檢驗中無法比擬的優勢，在水產品微生物的檢測方面發揮出了越來越重要的作用。本文主要論述了以免疫學和 DNA作為基礎的快速檢測水產品致病微生物的幾種有效的方法。

1 實時定量PCR技術

所謂實時定量PCR技術，是采用探針和熒光技術來確保擴增的相關特異性，同時所采取的熒光信號的強弱程度和擴增產物之間成正比例關系，這使得精確的定量成為了可能。實時熒光逆轉錄PCR方法是一種在常規逆轉錄PCR的檢測中使用1條熒光探針。這種技術不需要使用任何電池，對檢測和研究人員的自身更加的健康。

伴隨著PCR技術的成熟，使用逆轉錄PCR檢測諾伏克病毒的技術成熟。另一方面，采用多種嵌套式PCR的擴增，從濾食性軟體動物中提取的DNA的片段，通過研究PCR的一些擴增后的限制性的片段可以對人體糞便中的隱孢子蟲和賈第蟲進行鑒定以及檢測，結果表明使用這種方法比較適合貝類中的賈第蟲以及隱孢子蟲的相關檢測。

2 酶聯免疫吸附技術

酶聯免疫吸附技術（ELISA）開始于1971年，伴隨著單克隆技術的不斷發展和免疫試劑盒的市場化發展。ELISA在食品分析、臨床醫藥以及生物學等各個領域都得到了很好的應用。ELISA是采取將抗體和抗原的特異性進行結合而作為基礎，使用酶和輔酶來作為標記物，使用酶來促使反應的放大作用。ELISA在進行水產品中的檢驗報道比較多，水產品中比較常見的一些致病菌都可以用 ELISA來進行相關的檢測。比較常見的如大腸桿菌、李斯特菌以及沙門氏菌都可通過這種方法來進行檢測。采取這種方法進行檢測更為簡單和快捷，一般可以在23h左右出具相關的報告，比一般常規的方法要快出5d。同時這種方法比較穩定，不會和親水氣單孢菌等13種雜菌發生交叉反應。

通過應用酶聯免疫技術所制造出來的全自動的免疫分析儀，是使用了熒光分析技術，采用固相吸附器，使用已知的來進行目標生物體的撲捉。采用這種方法的優勢是靈敏度高并且速度很快，能夠對單核李斯特菌和沙門氏菌做出快速的鑒定。

3 基因芯片技術

基因芯片技術以通過各種基因寡核苷酸點樣在芯片的表面，微生物的樣品DNA經過PCR擴增之后制備銀光標記的探針。再和基因芯片上的寡核苷酸點進行雜交，最終通過掃描儀進行定量并且分析熒光分布的模式來確定檢測的樣品中是否存在著某種特定的微生物。這種技術能夠對水產品的致病微生物進行高通量的并行檢測。從理論上分析，基因芯片技術具有再一次實驗中對多種潛在致病菌檢驗的能力，同時能夠使用芯片對某一種病源的多種潛在的遺傳學的指標進行檢測。

這種技術具有特異、靈敏以及快速便捷的特點，因此在水產品致病菌的檢測過程中有著很好的應用價值。雖然基因芯片技術已經取得了很好的進展，但是要想將這種技術廣泛的應用在食品微生物的檢測上，還有很多問題需要解決，比如降低檢測的費用、建立標準化的檢測程序等。所以說，基因芯片技術在水產品致病微生物的檢測中還需要進一步的加強和提升。

4 免疫磁珠分離法

免疫磁珠分離法是通過將特異性抗體進行偶聯在磁性顆粒的表面，和樣品被檢測的致病微生物發生特異性的結合。載有致病微生物的磁性微球在外加磁場的作用之下向著磁極的方向進行聚集。所以能夠特異性的將目標微生物從樣品中很好的分離出來。

與常規水產品的檢驗進行比較，使用免疫磁珠分離方法具有比較明顯的優勢。這是因為采取免疫磁珠分離法可從大量的水產品中將目標微生物進行分離，及時和其他一些比較快速的檢測方法來比較，這種技術仍然能夠較為快速的提升水產品中致病菌的檢測效率。采取這種方法比較靈敏、特異。靈敏度程度相當于是逆轉錄PCR方法結合打點雜交。將視頻中的單核細胞增多性李斯特菌進行免疫磁珠分離和 PCR方法一起進行結合使用的檢測方法是建立了檢測視頻中單核細胞增多性的李斯特菌的IMS-PCR方法，實踐表明，這種方法可有效的培養基成分、雜菌以及水產品的基質等對PCR檢測的干擾，且檢測所耗費的時間比較短，敏感度很高，檢測的結果非常準確。

5 總結

基于特異遺傳因子和免疫特性的指標來進行測定微生物的數量的PCR法，基因芯片和免疫法等技術在現實中具有很好的應用價值，PCR技術能夠使得微量特定的 DNA片段在很短的時間內擴增到百萬倍，這極大的提升了檢測的速度和靈敏度。另外，在實驗條件不當時會引起特異性和靈敏度的下降。相對而言，基因芯片技術具有更好的現實應用性，避免了PCR技術的一些缺陷，但基因芯片的費用比較高，如果想要進行大規模的投入使用，則需要大量的時間以及資金進行投入。隨著生物學技術的不斷向前發展，使用多種技術來進行綜合的使用，能夠使得水產品致病微生物的檢測發揮出越來越積極地作用。

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