患兒副流感病毒Ⅲ型的檢測(cè)及其對(duì)免疫細(xì)胞的影響

劉 偉

(河南省新蔡縣人民醫(yī)院兒科 河南 駐馬店 463500)

副流感病毒(PIV)屬副粘病毒科［1，2］，在新生兒和 小嬰兒 PIVⅢ的感染率僅次于呼吸道合胞病毒(RSV)。本研究采用2005年6月至2010年12月入住新蔡縣人民醫(yī)院的急性呼吸道感染患兒為研究對(duì)象，檢測(cè)其鼻咽分泌物副流感病毒3型抗原及共外周血免癌細(xì)胞的變化，以期為臨床治療提供參考。

1 臨床資料和方法

1.1 一般資料 自2005年6月至2010年12月，收集因急性呼吸道感染而住我科治療的患兒鼻咽分泌物4 538例，男2 367例，女2 171例。年齡1～13歲，其中≤1歲2 579例，1～3歲939例，＞3～13歲1 020例。肺炎診斷參照有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［3］。

1.2 上呼吸道感染的病原檢測(cè)方法 由專職護(hù)士在患兒入院當(dāng)日或次日采集其鼻咽分泌物，送實(shí)驗(yàn)室待檢。采用直接熒光法檢測(cè)呼吸道分泌物中的PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型抗原。試劑盒為美國(guó)Chemicon公司產(chǎn)品。按試劑說(shuō)明書(shū)操作。結(jié)果判斷:如果一孔涂片中含有細(xì)胞數(shù)大于200個(gè)，且2%(或5個(gè))以上的細(xì)胞顯示有細(xì)胞內(nèi)染色為陽(yáng)性。其中PIV顯示為細(xì)胞漿內(nèi)染色。

1.3 上呼吸道感染的體液免疫檢測(cè)方法 IgM抗體檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法，檢測(cè)試劑盒由德國(guó)IBL生產(chǎn)。于PIV患兒入院第2～5天取血樣，檢測(cè)血清中PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型的IgM抗體，酶標(biāo)儀檢測(cè)出PN值(標(biāo)本測(cè)定值/陽(yáng)性對(duì)照測(cè)定值)≥2.1判為陽(yáng)性。其中病毒IgM抗體陽(yáng)性者的血清并用免疫投射比濁法進(jìn)行免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的檢測(cè)。試劑盒由上海玉蘭生物技術(shù)研究所生產(chǎn)。

1.4 淋巴細(xì)胞亞群 花青藻紅素25(PE2CY5)標(biāo)記抗CD3+抗體、CD19+抗體，異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗CD4+抗體，藻紅朊(PE)標(biāo)記抗 CD8+抗體、CD16+CD56+抗體。取外周血，肝素抗凝，每管100μl全血中加入不同熒光素標(biāo)記的抗體，輕輕混勻后暗室下孵育，然后加入溶血素(OptiL-yse)裂解紅細(xì)胞，輕輕混勻后再次暗室下孵育，經(jīng)離心、洗滌后在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.5軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)比較頻率，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 分布情況 檢出感染PIV標(biāo)本218例中PIVⅠ陽(yáng)性23 例(10.6%)，PIVⅡ陽(yáng)性1 例(0.45%)，PIVⅢ陽(yáng)性194例(90.0%)。PIVⅢ感染與年齡的關(guān)系:≤1歲PIVⅢ陽(yáng)性151/194例(77.8%)，＞1歲PIVⅢ陽(yáng)性43/194 例(22.2%)。見(jiàn)表1。

表1 急性呼吸道感染中PIV檢測(cè)結(jié)果［n，(%)］

2.2 患兒體液免疫功能 218例PIV標(biāo)本中IgM抗體陽(yáng)性者(1～13歲)血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的檢測(cè)結(jié)果(表2)。≤1歲的患兒的IgG低于參考范圍，1～13歲的患兒IgM均高于正常水平。

表2 PIVⅢ感染患兒血清IgG、IgA、IgM檢測(cè)結(jié)果()

表2 PIVⅢ感染患兒血清IgG、IgA、IgM檢測(cè)結(jié)果()

IgG IgA IgM≤1歲組別 n 14 10.23 ±1.46 1.59 ±0.42 1.89 ±0.48 151 6.23 ±1.96 1.01 ±0.52 1.59 ±0.48 1～3 歲 29 8.40±2.15 1.19 ±0.29 2.05 ±0.78 3～13歲

2.3 淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 副流感病毒Ⅲ型感染肺炎患兒外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD19+CD21+B細(xì)胞百分比和對(duì)照組相仿;CD16+CD56+T細(xì)胞百分比較對(duì)照組減少(P＜0.05);CD4+/CD8+比值較對(duì)照組升高(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 PIVⅢ感染患兒細(xì)胞免疫各指標(biāo)比較()

表3 PIVⅢ感染患兒細(xì)胞免疫各指標(biāo)比較()

組別 CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD4+/CD8+CD19+CD16+CD56+感染組 62.2 ±10.8 37.5 ±8.42 22.4 ±5.85 1.77 ±0.72 28.5 ±11.1 6.60±3.66對(duì)照組 60.2 ±5.05 33.8 ±4.86 23.0±4.81 1.57 ±0.41 25.6 ±5.40 10.3 ±2.63 P 0.816 0.146 0.153 0.041 0.314 0.021

3 討論

副流感病毒(PIV)屬副粘病毒科，為單鏈RNA病毒［4］。到3歲時(shí)，多數(shù)兒童感染過(guò)PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ，近年的國(guó)內(nèi)外研究顯示，PIV是小兒呼吸道病毒感染的重要病原，亦是導(dǎo)致小兒呼吸道感染住院的重要原因，此外，PIVⅢ經(jīng)常導(dǎo)致肺炎和細(xì)支氣管炎。健康兒童很少能從鼻咽部分離到PIV，因此患兒鼻咽分泌物中檢測(cè)到這些病毒即可確定為致病原［5］。本院通過(guò)對(duì)因急性呼吸道感染而住院治療的患兒進(jìn)行PIV的統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)PIV的檢出率為4.8%，而PIVⅢ在PIV感染中所占比例最高，為89.4%。同時(shí)，結(jié)果表明小嬰兒尤其易感PIVⅢ。

因此，及時(shí)準(zhǔn)確的了解PIVⅢ肺炎患兒的各項(xiàng)免疫指標(biāo)變化，對(duì)于臨床治療有重要意義。本研究表明，PIVⅢ肺炎患兒外周血 CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD19+CD21+B細(xì)胞百分比和對(duì)照組相仿;但CD16+CD56+T細(xì)胞百分比較對(duì)照組減少(P＜0.05);而 CD4+/CD8+比值較對(duì)照組升高(P＜0.05)。

CD16，CD56是人NK細(xì)胞的表面標(biāo)志。NK細(xì)胞表面的CD16是低親和力的IgG Fc受體，當(dāng)IgG抗體與靶細(xì)胞表面相應(yīng)表位特異性結(jié)合后，可通過(guò)其Fc段與NK細(xì)胞表面的FcγRⅢ結(jié)合，促使NK細(xì)胞脫顆粒，釋放穿孔素和顆粒酶，發(fā)揮對(duì)靶細(xì)胞的定向非特異性殺傷作用［6］。CD16+CD56+T細(xì)胞百分比較對(duì)照組減少(P＜0.05)表示NK細(xì)胞不能發(fā)揮正常的免疫功能，導(dǎo)致其清除病原的能力下降。

CD4+分子表達(dá)在Th細(xì)胞表面，CD8+分子主要表達(dá)在Ts細(xì)胞和Tc細(xì)胞表面。T淋巴細(xì)胞在免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。CD4+/CD8+比值較對(duì)照組升高(P＜0.05)，表明T細(xì)胞功能紊亂，不能維持機(jī)體正常的免疫功能［7］。

因此，PIVⅢ患兒免疫功能的調(diào)節(jié)是臨床治療的重要突破口之一。

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