鹽酸帕洛諾司瓊在健康人體的藥動學研究

孫 軍，李 珍＊，張逸凡，楊武云，唐世新，胡晉紅＊

（1.第二軍醫大學長海醫院藥學部，上海200433；2.中國科學院上海生命科學研究院藥物科學研究所藥物代謝研究中心，上海201203）

鹽酸帕洛諾司瓊（palonosetron hydrochloride）是高效、高選擇性的第二代5－羥色胺3（5－HT3）受體拮抗劑，其與5－HT3受體的親和力是其他5－HT3受體拮抗劑的100倍，半衰期也相對較長。臨床上用于預防癌癥化療藥物所致急性惡心、嘔吐和延遲性惡心、嘔吐［1］。重慶醫藥工業研究院有限責任公司研制的鹽酸帕洛諾司瓊注射液，經國家食品藥品監督管理局批準同意進行臨床研究。本研究采用HPLC－MS／MS法測定帕洛諾司瓊的血漿藥物濃度，研究健康志愿者靜脈注射不同劑量鹽酸帕洛諾司瓊注射液后的代謝過程，評價其在健康人體的藥動學特征，為進一步的臨床研究提供依據。

1 材 料

Agilent 1100液相色譜系統（包括G1311A四元泵、G1322A真空脫氣機、G1367A自動進樣器和G1316A柱溫箱，美國Agilent公司）；TSQ QuantumUltra型三重四級桿串聯質譜儀，配有電噴霧電離源（ESI源）（美國Thermo Finnigan公司）；鹽酸帕洛諾司瓊對照品（含量99.6%，批號：041205－R）和鹽酸帕洛諾司瓊注射液（規格：5ml∶0.25mg）購自重慶醫藥工業研究院；苦參堿對照品（含量100.2%，批號：81041125，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司）；甲醇、甲酸均為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 受試者的選擇 選擇健康受試者24名，性別不限，年齡18～40歲；體重指數19～24kg／m2；實驗室檢查（血常規、尿常規、血生化、胸片等）正常；無心、肝、腎、消化道和血液系統等疾病史；無煙酒嗜好。受試者試驗前簽署書面知情同意書。試驗方案經第二軍醫大學長海醫院醫學倫理委員會審核批準。

2.2 試驗設計 采用無對照開放平行試驗設計，24名健康受試者按隨機數字表法分配到低、中、高3個劑量組（0.25、0.50、0.75mg），每組各8例，進行單次靜脈注射鹽酸帕洛諾司瓊注射液的藥動學研究。

2.3 給藥及樣品采集 采用單劑量靜脈注射給藥。受試者試驗前1d進食清淡晚餐后禁食12h。試驗當日清晨，參考藥品說明書，分別靜脈注射鹽酸帕洛諾司瓊注射液0.25、0.50、0.75mg，2min內完成。于給藥前（0h）及給藥完成即刻和給藥后5、15、30min，1、2、4、6、8、12、24、48、72、120、168h從前臂靜脈取血3ml，置肝素化離心管中，2.0×102×g離心5min，取上清血漿，－20℃凍存，待測。

2.4 色譜和質譜條件 色譜條件 Agilent Zorbax Extend C18色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫：室溫；流動相：甲醇－水－甲酸（60∶40∶0.2），流速：0.50ml／min，進樣量：20μl。質譜條件 離子源為電噴霧電離源（ESI源），源噴射電壓為4 000V，加熱毛細管溫度為320℃，鞘氣（N2）流速10.5L／min，輔助氣（N2）流速1.5L／min，正離子方式檢測；掃描方式為選擇反應監測（SRM）；碰撞氣（Ar）壓力0.16Pa。碰撞誘導解離（CID）電壓分別為30eV（帕洛諾司瓊）和40eV（內標苦參堿）；用于定量分析的離子反應分別為m／z 297→110，188（帕洛諾司瓊），m／z249→148（內標苦參堿）。

2.5 標準溶液的配制 （1）精密稱取鹽酸帕洛諾司瓊對照品11.22mg（相當于帕洛諾司瓊10.0mg），置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成400mg／L的帕洛諾司瓊儲備液，以甲醇－水（50∶50）稀釋至所需濃度，得帕洛諾司瓊對照品溶液。（2）精密稱取10.0mg苦參堿，置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，配制成400mg／L的儲備液，以甲醇－水（50∶50）稀釋得500μg／L的內標溶液。

2.6 血漿樣品的處理 取血漿0.50ml加入40μl苦參堿內標溶液，100μl甲醇－水（50∶50）和200μl pH7.8的磷酸鹽緩沖液，混勻，加入4ml的提取溶劑：乙醚－二氯甲烷（3∶2），渦旋混合1min后往復振蕩15min，1.08×103×g離心5min；分取上清液于另一10ml具塞試管中，40℃空氣流吹干，200μl流動相復溶殘渣，渦旋混勻，20μl進樣分析。

2.7 數據處理 采用DAS 2.0軟件進行藥動學數據處理。采用梯形法計算AUC0～t值，AUC0～∞＝AUC0～t＋ct／Ke（ct為最后一個可測時間點的血藥濃度）；tmax和cmax采用實測值；以血藥濃度對時間作半對數曲線，取消除相時間點進行線性擬合，求算消除速率常數Ke，t1／2β＝0.693／Ke；CL＝D／AUC0～∞（D為給藥劑量），Vd＝CL／Ke；平均駐留時間（mean retention time，MRT）＝一階矩曲線下面積（AUMC）／AUC。對不同劑量的主要藥動學參數與劑量進行相關性分析。

2.8 分析方法驗證

2.8.1 方法的特異性 帕洛諾司瓊和內標苦參堿在（＋）ESI電離方式下，主要生成［M＋H］＋峰，分別為m／z297和249。選擇性對［M＋H］＋峰進行產物離子全掃描質譜分析，帕洛諾司瓊生成的主要碎片離子有m／z 110和188，苦參堿生成的主要碎片離子為m／z148。

取6名受試者的空白血漿0.50ml，除不加內標外，其他按2.6項下操作，進樣20μl，得色譜圖（見圖1A）；將一定濃度的帕洛諾司瓊對照品溶液和內標溶液加入空白血漿中，同法操作，得色譜圖（見圖1B）；帕洛諾司瓊和內標苦參堿的保留時間分別為3.33和2.47min。取受試者給藥后的血漿樣品，按2.6項下操作，進樣20μl，得色譜圖（見圖1C）。結果表明，空白血漿中的內源性物質不干擾帕洛諾司瓊和內標苦參堿的測定。

2.8.2 標準曲線和定量下限 取空白血漿0.50ml，加系列對照品溶液100μl，配制成相當于帕洛諾司瓊血漿濃度0.01、0.03、0.08、0.20、0.80、2.0、8.0、20.0、50.0μg／L的樣品，按2.6項下操作，進樣20μl。以待測物濃度為橫坐標（X），待測物與內標物的峰面積比值為縱坐標（Y），采用加權（W＝1／X2）最小二乘法進行回歸，得回歸方程：Y＝0.100 9 X＋0.001 0（r＝0.996 8）。結果表明，帕洛諾司瓊血藥濃度在0.01～50μg／L范圍內線性關系良好。定量下限為0.01μg／L，RSD＝6.9%，RE＝5.3%（n＝6）。

2.8.3 方法的回收率和精密度 取空白血漿0.50ml，加系列對照品溶液100μl，配制成相當于帕洛諾司瓊血漿濃度0.025、0.500和40.0μg／L的質控樣品。取上述3個濃度的血漿質控樣品，按2.6項下操作，于1d內測定6次，計算日內RSD；連續測定3d，計算日間RSD，結果見表1。另取空白血漿0.50ml，除不加內標外，按2.6項下操作，向獲得的全部上清液中加入相應濃度的對照品溶液100μl和內標溶液40μl，渦旋混合，40℃空氣流吹干，200μl流動相復溶殘渣，渦旋混勻，20μl進樣分析，得相應峰面積。以每一濃度兩種處理方法的峰面積比值計算回收率，結果見表1。

圖1 血漿中帕洛諾司瓊和內標苦參堿的HPLC－MS／MS譜圖Figure 1 HPLC－MS／MS photograms of palonosetron and internal standard matrine in human plasma

表1 帕洛諾司瓊的回收率和精密度實驗結果Table 1 Recovery rate and precision test of palonosetron（n＝6，±s，%）

表1 帕洛諾司瓊的回收率和精密度實驗結果Table 1 Recovery rate and precision test of palonosetron（n＝6，±s，%）

（ρB／μg·L－1） 方法回收率濃度 提取回收率日內RSD日間RSD 0.025 103.3±4.7 86.4±6.8 6.9 2.2 0.500 97.7±4.2 84.4±8.5 4.8 8.5 40.0 105.1±6.5 88.5±5.3 6.4 9.4

2.8.4 樣品的穩定性考察 本研究考察了帕洛諾司瓊血漿樣品（0.025和40.00μg／L）于室溫放置2h、－20℃放置6個月、3次凍融循環，以及萃取后室溫放置24h的穩定性。結果表明，帕洛諾司瓊血漿樣品放置2h（RE 0.9%～4.1%）、萃取后室溫放置24h（RE－8.0%～9.4%）、－20℃放置6個月（RE 5.7%～6.7%）、血漿樣品經過3次凍融循環（RE－3.8%～－1.3%）均穩定。

2.9 藥動學研究 24名健康受試者單次靜脈注射鹽酸帕洛諾司瓊后平均血藥濃度－時間曲線見圖2。帕洛諾司瓊的血漿濃度呈雙指數下降，開始為迅速的分布相，隨后為較慢的消除相。經過模型擬合，帕洛諾司瓊在受試者體內的藥動學過程符合二室開放模型，主要藥動學參數見表2。帕洛諾司瓊在體內的暴露量（cmax和AUC）隨著劑量的增加（0.25～ 0.75mg）而增加，AUC與劑量的增加呈線性關系，t1／2、CL和Vd無劑量依賴性。

圖2 靜脈注射3個劑量的鹽酸帕洛諾司瓊注射液后的血藥濃度－時間曲線Table 2 Concentration－time curves of palonosetron after administration of three doses of palonosetron hydrochloride injection by intravenous infusion

2.10 安全性評價 在試驗過程中，醫護人員對受試者的不良反應進行了嚴密觀察。19名受試者在試驗過程中出現輕度腹痛、腹脹、大便干燥、大便次數減少等消化道癥狀；6例次出現輕度乏力、惡心、頭暈、頭痛等癥狀；以上所有癥狀均未處理，自行緩解。這些癥狀的出現可能與帕洛諾司瓊作用于胃腸道和中樞5－HT3受體有關。

3 討 論

化療引起的惡心、嘔吐是腫瘤病人在化療過程中最常見的不良反應，預防化療所致的惡心、嘔吐對改善病人生活質量并保證化療的順利進行具有重要意義。鹽酸帕洛諾司瓊是第二代5－HT3受體拮抗劑，其化學結構與第一代同類產品不同，它由一個融合的三環結構與喹核堿相連。這種結構基礎決定了帕洛諾司瓊與第一代5－HT3受體拮抗劑相比，與受體的結合力強30～100倍，t1／2β也較現有5－HT3受體拮抗劑明顯延長。

表2 靜脈注射3個劑量的鹽酸帕洛諾司瓊注射液后的藥動學參數Table 2 Pharmacokinetic parameters of palonosetron after administered three doses of palonosetron hydrochloride injection by intravenous infusion（n＝8，±s）

表2 靜脈注射3個劑量的鹽酸帕洛諾司瓊注射液后的藥動學參數Table 2 Pharmacokinetic parameters of palonosetron after administered three doses of palonosetron hydrochloride injection by intravenous infusion（n＝8，±s）

Ke：消除速率常數；MRT：平均駐留時間

組別 cmax（ρВ／μg·L－1） tmax（t／h） AUC0～t（A／μg·h·L－1）AUC0～∞（A／μg·h·L－1） t1／2β（t／h） Ke（1／h） CL（L／h） Vd（V／L） MRT（t／h）0.25mg組5.57±2.97 0.03±0.00 24.3±7.6 25.0±8.0 31.0±5.6 0.023±0.004 11.0±3.6 495±208 41.7±6.2 0.50mg組6.84±5.48 0.03±0.00 48.3±14.6 50.2±16.1 33.5±5.6 0.021±0.003 11.0±4.1 513±138 45.5±9.0 0.75mg組9.75±5.78 0.07±0.08 74.7±25.4 76.8±27.2 31.1±5.0 0.023±0.003 10.7±3.1 463±91 42.4±7.9

與以往研究方法的強堿性流動相（pH 9.5）相比，本研究采用的流動相為甲醇－水－甲酸（60∶40∶2），色譜柱的適用性相對會更好一些。

文獻［2］報道帕洛諾司瓊在0.3～90μg／kg劑量下，在美國和日本的健康受試者中，帕洛諾司瓊暴露量隨著劑量增加而增加，t1／2β、CL和Vd無劑量依賴性。本研究結論與以上報道相似。靜脈注射3種劑量鹽酸帕洛諾司瓊注射液后，其在健康人體內的消除半衰期相近，說明在0.25～0.75mg劑量范圍內鹽酸帕洛諾司瓊呈線性藥動學特征。國內外研究［3－5］表明，靜脈注射鹽酸帕洛諾司瓊后，Vd值較大，而CL相對較低，提示帕洛諾司瓊在人體內分布廣泛，消除卻相對緩慢，因此半衰期較長。帕洛諾司瓊的長效特征除與其代謝、消除緩慢有關外，與該藥與5－HT3受體結合的特點也有關［6］。鑒于以上原因，對該藥短期內的頻繁給藥（每日連續或隔日交替）需謹慎考慮。

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［3］ 陳 艷，丁莉坤，孟玲燕，等.鹽酸帕洛諾司瓊注射液人體藥動學研究［J］.中國新藥雜志，2007，16（10）：806－809.

Chen Yan，Ding LiKun，Meng LingYan，et al.Pharmacokinetics of intravenous infusion of palonosetron hydrochloride in healthy volunteers［J］.Clin J New Drugs，2007，16（10）：806－809.In Chinese with English abstract.

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Dai YuanYuan，Liu Peng，Chen Zhe，et al.Pharmacokinetics properties of palonosetron，a 5－hydroxytryptamine－3receptor antagonist，in Chinese healthy subjects［J］.Chin J New Drugs，2009，18（10）：910－913.In Chinese with English abstract.

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