2種不同試劑檢測血清免疫球蛋白結果的可比性及偏倚評估

李海煒,李 山,秦 雪△,張紹峰,賴戰峰

(1.廣西醫科大學研究生學院 530021;2.廣西醫科大學第一附屬醫院檢驗科 530021)

2種不同試劑檢測血清免疫球蛋白結果的可比性及偏倚評估

李海煒1,李 山2,秦 雪2△,張紹峰2,賴戰峰2

(1.廣西醫科大學研究生學院 530021;2.廣西醫科大學第一附屬醫院檢驗科 530021)

目的進行2種不同免疫球蛋白診斷試劑對血清免疫球蛋白測定結果的可比性及偏倚評估研究,為血清免疫球蛋白測定的標準化和臨床實驗室認可提供實驗數據?方法 參考美國臨床和實驗室標準協會(CLSI)的EP9A2文件,分別用執誠試劑和優利特試劑在HITACHI7600-010全自動生化分析儀上測定免疫球蛋白IgG?IgA和IgM,以執誠試劑為對照組,優利特試劑為實驗組?用線性回歸統計法分析對照組(Y)和實驗組(X)測定結果決定水平處的方法間誤差,以美國臨床實驗室修正法規(CLIA′88)規定的室間質量評價允許誤差范圍的1/2為標準,判斷不同試劑的臨床可接受性?結果兩種試劑對患者血清免疫球蛋白測定結果顯示,方法內重復性良好,無離群點,除IgA在決定水平處的系統誤差不能被接受外,其余項目測定結果的偏差臨床可以接受?結論當同一實驗室同一檢驗項目存在2個或以上的試劑時,應進行方法比對和偏差評估,判斷其臨床可接受性,以保證檢驗結果的可比性?

免疫球蛋白類;血清;試劑盒,診斷

血清免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)水平測定由于對疾病診療和療效觀察具有重要的臨床意義而愈來愈受到重視,成為臨床實驗室的常規項目[1-4],其測定結果的準確性也受到廣泛重視?中國生物醫學經過多年的發展,已有多家試劑廠家生產免疫球蛋白測定的試劑?不同廠家的試劑在測定免疫球蛋白時是否存在差異以及測定結果的可比性是廣受關注的問題?本文按照美國臨床和實驗室標準協會(CLSI)指南文件EP9-A[5]的要求對兩種不同試劑檢測免疫球蛋白結果進行比對及偏倚的評估,現報道如下?

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集廣西醫科大學門診及住院患者當日進行免疫球蛋白檢測的血清,要求新鮮?無溶血?無黃疸?

1.2 儀器與試劑 采用日本日立公司生產的HITACHI7600-010全自動生化分析儀?執誠免疫球蛋白診斷試劑來自上海執誠生物技術有限公司,均采用免疫比濁法進行測定,試劑批號分別為:IgG,JANK021;IgA,MAYK035;IgM,JANK012?優利特免疫球蛋白診斷試劑來自桂林優利特集團有限公司,均采用免疫比濁法測定,IgG?IgA?IgM 試劑批號分別為:20110224?20110224?20110224?

1.3 方法 各選取8個患者血清分別在各濃度范圍內不同濃度值的標本,首先用2種試劑標準液各自進行校準,再使用RANDOX特殊蛋白質控品(試劑1?2?3批號分別為196LPC?212LPC?198LPC)進行檢測,在控后將每例樣本隨機與常規標本在同樣條件下測定,具體操作如下:每個樣本分裝成兩份,分別在日立7600自動生化分析儀上使用兩種不同的檢測試劑對IgG?IgA?IgM各測定2次?上海執誠試劑長期運用于本科室7600生化分析儀,室內質控日間CV均小于1/3CLIA′88室間質評允許誤差,故以執誠試劑作為比較方法(X),優利特試劑為實驗方法(Y),進行方法間的比對試驗?實驗前對儀器進行常規維護與保養,按常規方法進行校準和質控,室內質控在控時進行樣本測定?每個項目的檢測嚴格按廠商試劑盒的說明書進行?2h內測定完畢,每份樣本測定2次?其中第2次測定次序與第1次相反,中間間隔不少于2h,雙份測定取均值為比對數據,連續測定5d?

表1 2種試劑檢測結果各統計量的計算

1.4 統計學處理 2種診斷試劑對免疫球蛋白測定結果的統計分析按照CLSI EP9-A2指南要求進行分析,不采用已明確有人為誤差的結果?主要內容包括(1)兩種試劑均值結果;(2)方法內重復性檢查;(3)離群點檢查;(4)計算線性回歸;(5)標準誤差的計算;(6)計算系統誤差的估計值及評價不同試劑間的偏倚?數據錄入和統計分析均采用Excel 2003和SPSS13.0進行?

2 結 果

2.1 2種試劑均值結果 采用上海執誠免疫球蛋白診斷試劑對IgG?IgA?IgM 3個免疫球蛋白進行測定,結果的均值分別為12.649?2.512?1.592g/L?采用桂林優利特免疫球蛋白試劑對上述3個免疫球蛋白進行測定,結果的均值分別為13.154?2.801?1.481g/L,見表1?2.2 方法內重復性檢查 計算方法X和Y各2次測定值之差;Y2次測定值之差與X2次測定值之差的平均值;Y2次測定值之差的平均值;X2次測定值的標準化值;Y2次測定值的標準化值?算出X2次測定值的標準化值的均值,=,同時算出Y2次測定值的標準化值的均值,=,所得值詳見表1?以4和4作為控制限,方法X和Y測定值的標準化值均在控制限內,說明兩方法均重復性好,符合相關性實驗要求?

2.3 離群值檢查 計算X和Y之間的絕對偏差?相對偏差,

2.4 線性回歸及散點圖分析 通過將數據導入SPSS13.0進行線性回歸與散點圖分析,結果見圖1～3?由散點圖可知兩試劑免疫球蛋白測定值線性關系良好?通過線性回歸得到直線回歸方程和相關系數,IgG:Y=0.21+1.024X,r=0.992;IgA:Y=0.19+1.039X,r=0.986;IgM:Y= -0.018+0.941X,r=0.981?

圖2 2種試劑IgA測定結果散點圖

圖3 2種試劑IgM測定結果散點圖

2.5 標準誤差的計算和可接受性能的評價?兩種試劑間測定結果的相關系數大于0.975,回歸統計的斜率和截距均可靠,可用回歸統計的方法計算系統誤差及進行臨床可接受性偏倚分析?根據IgG?IgA和IgM的直線回歸方程,計算兩種試劑在決定水平Xc處測定結果的相對偏差[6],評估試劑的臨床可按受性能?結果見表2?

表2 2種試劑免疫球蛋白測定結果的臨床可接受性偏倚分析

3 討 論

檢驗醫學的飛速發展加速了生物試劑產業的發展?不同診斷試劑對同一項目檢測結果的可比性檢驗和偏倚評估是申請臨床醫學實驗室認可必不可少的內容,檢測結果的可比性為不同種試劑間檢測結果的互認提供了保障[7,8]?檢驗技術的不斷分支,檢測項目的不斷增多,檢驗質量的控制變得越來越重要,IS015189文件指出:"當同樣的檢驗應用不同程序或設備,或在不同地點進行,或以上各項均不同時,應有確切機制以驗證在整個臨床適用區間內檢驗結果的可比性?"[9]由于中國檢驗試劑的生產和臨床實驗室參考系統并不十分完善,多數實驗室按照自己的意愿和實際情況,選擇需要的儀器?試劑?質控和操作程序等隨意組合而成的檢測系統?怎樣尋找這些檢測結果溯源性和可比性,是一個極大的現實問題[10-12]?方法學比對實驗通過自建實驗方法(試劑)與具有溯源性的比較方法(試劑)進行方法學比對,找出兩種檢測結果間的總偏差是否可以被接受,間接保證了自建方法(試劑)檢測結果的準確

性[13-15]?

本研究通過用CLSI的標準化文件 EP9A2[1]對IgG?IgA和IgM 2種試劑進行方法比對和偏倚評估?由于CLIA′88中對IgG的可接受偏倚為25%,而對IgA和IgM的可接受偏倚標準為3S,并未給出確切數值,故分別采用兩種試劑對RANDOX特殊蛋白質控品進行檢測累計40d所得的標準差SD均值作為判斷標準S,其中IgA的SD為0.034,IgM的SD為0.051,1/2CLIA′88即為0.051和0.076,換算成百分比,為5.1%和7.6%?筆者發現除IgA外,其余項目測定結果的偏差均在可接受的范圍,即2種試劑的檢測結果基本一致?IgG在兩個不同的決定水平時兩試劑的相關性均較好?

免疫比濁測定法(immunoturbidimetry)因同時具備生化檢測的快速性和免疫反應的特異性,可進行血清Ig的快速?準確定量,臨床實驗中應用較廣泛[16-17]?雖然本文研究的2種試劑均使用免疫比濁法對免疫球蛋白進行測定,但由于制作工藝?適用儀器等方面的細微差別,檢測結果不可能完全一致?同時隨著生物制劑產業的高速發展,實驗室可選用的生化診斷試劑也越來越多?本研究根據CLSI EP9-A相關文件,并結合臨床實際工作情況選擇新鮮病人血清樣品,使用執誠免疫球蛋白診斷試劑和優利特免疫球蛋白診斷試劑,對3個免疫球蛋白的檢測結果進行比對及偏倚評估研究的結果,為不同免疫球蛋白診斷試劑的臨床應用及可靠性提供了科學依據?

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Comparability and bias evaluation of serum immunoglobulin levels determined by two different regents

,, ,,
(1.530021,;2.,530021,)

ObjectiveTo evaluate the comparability and the bias of serum immunoglobulinResultsdetermined by two different diagnostic regents,whether the outcome of the immunoglobulin comparable to the standardization of serum immunoglobulins and clinical laboratory authorized to provide the experimental data.MethodsAccording to the NCCLS EP9-A2document,the immunoglobulin concentrations determination were carried out by HITACHI7600-010automatic biochemical analyzer with zhicheng regent and youlite regent respectively,the control group was zhicheng reagent,the experimental group was youlite reagent.By linear regression analysis method(Y)and comparison(X)determined the relative mean Office deviation or medicine department decided to approach the level of inter-error in order to amend legislation in the U.S.clinical laboratory(CLIA′88)provides quality assessment of the permissible error range of 1/2as the standard,a different detection regent to determine the clinical acceptability.Results

Two types of immunoglobulin diagnostic regents showed that,there were not existence outlier.Detection regents in addition to the IgAResultsand comparison between the error or the mean relative deviation of the department can not be accepted,the remaining items of the deviation of clinical measurements is acceptable.ConclusionWhen the same laboratory the same tests over the existence of two detection regents,should be carried out and bias than on assessment,to determine its clinical acceptability,in order to ensure comparability of testResults.

immunoglobulins;serum;reagent kits,diagnostic

10.3969/j.issn.1671-8348.2012.18.014

A

1671-8348(2012)18-1827-03

△通訊作者,Tel:13977163919;E-mail:qinxue919@163.com?

2011-12-09

2012-02-22)

?論 著?