歐李組織培養(yǎng)快繁技術(shù)

郭勁鵬

（牡丹江林科所，黑龍江 牡丹江 157009）

歐李（Prunus humilis Bge.）俗稱山櫻桃，屬薔薇科（Rosaceae）櫻亞科（Prunoideae Focke）櫻屬（Prunus Linn）落葉小灌木。歐李是我國一個(gè)古老野生樹種，但長期以來處于野生狀態(tài)。20世紀(jì)80年代興起的第三代水果開發(fā)熱，其潛在價(jià)值才逐漸被人們認(rèn)識。我們以抗寒性、豐產(chǎn)性、口感及果個(gè)為選種目標(biāo)，對主要優(yōu)良栽培品系進(jìn)行了多年的引種栽培試驗(yàn)，由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)的歐李3號和4號，抗寒性強(qiáng)，果色鮮艷、汁液多、味極濃，豐產(chǎn)性好，適合在黑龍江省東南部淺山區(qū)大力推廣。但在實(shí)際生產(chǎn)中，歐李通常采用分株繁殖和扦插繁殖，繁殖系數(shù)低，不能滿足生產(chǎn)的要求。如何提高繁殖速度成為了制約歐李優(yōu)良品系產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的瓶頸問題，因此我們開展了歐李組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究，建立的歐李快繁體系具有繁殖系數(shù)高、操作方便、容易成活，成苗時(shí)間短，幼苗生長勢強(qiáng)等特點(diǎn)，為歐李優(yōu)良品系的栽培推廣提供了較可靠的快繁技術(shù)。

1 外植體的選擇與消毒

培養(yǎng)材料：4月上旬，取1年生休眠枝條在室內(nèi)水培，當(dāng)腋芽萌動時(shí)，剪成帶有1～2個(gè)腋芽的莖段作為培養(yǎng)材料。

滅菌方法：剪好的帶芽莖段在工作臺上75%酒精浸泡20s后，0.1%升汞分2次浸泡8min，每次4min，中間用無菌水沖洗。滅菌后以無菌水沖洗5次，每次2min，解剖刀切除兩端壞死部分后，接入初始培養(yǎng)基。升汞分2次浸泡，在保證滅菌效果的同時(shí)，可有效減弱消毒液對培養(yǎng)材料的毒害，有利于培養(yǎng)材料的生長發(fā)育。

2 無菌材料的試管培養(yǎng)

歐李快繁所采用的基本培養(yǎng)基為改良的MS培養(yǎng)基（大量元素及有機(jī)減半），滅菌后的培養(yǎng)材料接種到附加0.5mg／L 6BA 和0.025mg／L NAA的初始培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基pH值調(diào)至5.8，外植體在24±2℃的控溫培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，16／8h光暗周期，光照強(qiáng)度1000～3000 lx。接種7天后腋芽開始萌發(fā)，萌發(fā)率90%以上。26天后長出4～5cm的單枝，展開6～7片葉，腋芽生長旺盛，葉濃綠，無卷曲現(xiàn)象出現(xiàn)。

將初始培養(yǎng)得到的生長健壯的無菌小苗，在無菌工作臺上截取成0.5cm左右的帶芽莖段，接種到附加濃度為0.5mg／L 6BA 和0.01mg／L NAA的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12天左右腋芽萌發(fā)開始生長，30天后長出5～7cm的單枝。增殖系數(shù)5～7倍，通過多次轉(zhuǎn)瓶后可得到大量無菌小苗。

當(dāng)增殖培養(yǎng)得到的無菌小苗到一定數(shù)量時(shí)，可選擇生長健壯的小苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。在無菌工作臺上將小苗截成2.5cm左右，帶兩輪以上葉的莖段，將葉片剪去一半后接入生根培養(yǎng)基。生根培養(yǎng)基加入0.2mg／L的IBA，接入時(shí)莖段不宜插入過深，莖段能直立即可。培養(yǎng)12天即可誘導(dǎo)出有效根，誘導(dǎo)率90%以上，25天后每株可誘導(dǎo)2～3條根，根長3cm左右，此時(shí)可對無菌小苗進(jìn)行馴化移栽。

3 無菌苗的馴化移栽

對已生根的小苗進(jìn)行馴化鍛煉，在培養(yǎng)室內(nèi)逐步打開瓶口，然后移至高濕、弱光、溫度適宜并略低的環(huán)境2～3天，使其逐步適應(yīng)自然環(huán)境后可進(jìn)行移栽。

移栽基質(zhì)：選用經(jīng)高錳酸鉀消毒后的草炭＋田園土＋粗沙（5∶2∶1）的混合培養(yǎng)基質(zhì)。移栽方法：移栽基質(zhì)做床、整平，用鑷子劃痕后，夾住根部插入至第一輪葉，用手壓緊，保持溫度21～25℃，經(jīng)常澆水保濕。一周后小苗能夠成活，成活率80%以上。

4 總結(jié)

4.1 歐李是黑龍江地區(qū)的鄉(xiāng)土樹種，用途廣泛，果實(shí)營養(yǎng)豐富，具有極高的栽培價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。引種試驗(yàn)表明：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)選育的歐李3號和4號抗寒能力強(qiáng)，在黑龍江省東南部淺山區(qū)適當(dāng)防寒即可越冬；豐產(chǎn)性好，4年生株產(chǎn)1.0～1.5kg，單果平均重5.5g，果色鮮艷、汁液多、味極濃。組培快繁體系的建立能在短時(shí)間內(nèi)繁育大量優(yōu)良苗木，為歐李產(chǎn)業(yè)化發(fā)展奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。在適宜地區(qū)推廣歐李優(yōu)良品系，有利于林區(qū)職工的增收致富和林區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展。

4.2 培養(yǎng)材料的選擇是歐李組培快繁的關(guān)鍵，以葉片為培養(yǎng)材料經(jīng)脫分化出愈傷組織，再誘導(dǎo)出芽和根，周期長且技術(shù)難度大。以芽為培養(yǎng)材料時(shí)，可直接誘導(dǎo)腋芽的生長，其原理與扦插相似，周期短，20天即可轉(zhuǎn)瓶，繁殖系數(shù)高且技術(shù)簡單、操作容易。同時(shí)休眠芽試驗(yàn)效果優(yōu)于生長旺季的嫩枝芽，因此，休眠枝室內(nèi)水培芽萌發(fā)后的莖段是歐李組織培養(yǎng)中較為理想的外植體。

4.3 在歐李組織快繁中，基本培養(yǎng)基、激素組合及濃度對培養(yǎng)材料的誘導(dǎo)及生長影響極大。改良的MS培養(yǎng)基（大量元素及有機(jī)減半）是較適合的基本培養(yǎng)基；改良的 MS＋6BA 0.5mg／L＋ NAA 0.025mg／L是較適合的初始培養(yǎng)基，腋芽萌發(fā)率90%以上；改良的MS＋6BA 0.5mg／L＋NAA0.01mg／L是較適合的增殖培養(yǎng)基，增殖系數(shù)5～7倍；改良的 MS＋I(xiàn)BA 0.2mg／L較適合于誘導(dǎo)生根，誘導(dǎo)率90%以上。無菌小苗經(jīng)馴化后移栽成活率可達(dá)80%。