利眠寧在急性中毒大鼠體內(nèi)的分布1）

張曉飛，孫紅濤，尉志文，贠克明

利眠寧（chlordiazepoxide）又稱氯氮卓、甲氨二氮卓，屬于長效苯二氮卓類安眠鎮(zhèn)靜藥，常用于抗焦慮、催眠和酒精戒斷癥狀的治療。利眠寧在臨床上已應(yīng)用多年，服用過量中毒、投毒案例報道較多［1－3］。目前國內(nèi)外關(guān)于利眠寧的研究主要集中在利眠寧的藥效學及藥動學，作用機制，毒理作用，與其他藥物的相互作用及機體內(nèi)利眠寧的含量測定［4－8］，與利眠寧中毒和死因判定有關(guān)的法醫(yī)毒物動力學研究僅有案例報道［9，10］。本實驗建立利眠寧大鼠的急性中毒動物模型，并對不同劑量利眠寧在大鼠體內(nèi)的分布進行研究，為利眠寧中毒案例的臨床治療和司法鑒定提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 實驗動物與試劑 大鼠24只，雌性，體重250g±20g，山西醫(yī)科大學動物中心提供，實驗前隔夜禁食。利眠寧標準品和丙基解痙素（SKF525A，內(nèi)標）對照品購于國家藥品和生物制品控制研究所；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1．2 動物分組、染毒與樣品的采取 24只大鼠隨機分為實驗組（0．5倍LD50劑量組、2倍LD50劑量組、4倍LD50劑量組）和對照組，各6只。實驗組大鼠分別以0．3g／kg，1．2g／kg和2．4g／kg（根據(jù)人與大鼠體表面積系數(shù)推斷）灌胃，給藥后3h處死，解剖后取心、肝、脾、肺、腎、腦、心血、肌肉和睪丸，氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法和氣相色譜法檢測其中利眠寧含量。

1．3 樣品處理 取組織樣品1g勻漿，血樣1mL，加入內(nèi)標物SKF525A12μg，加10%NaOH至pH10，混勻后加乙醚5mL，混勻、離心、提取，把上清液轉(zhuǎn)移至置另一試管里，重復(fù)萃取一次，合并萃取液，40℃水浴中揮干。殘渣以20μL乙醇定容，1 μL進樣。

1．4 儀器分析條件 氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀（Finnigan）條件：DB－5MS毛細管柱（30m×0．25mm×0．25μm），EI源70ev；質(zhì)量范圍：50～650，柱溫：初始溫度200℃保持1min，以20℃／min升溫至280℃保持6min；離子源溫度：250℃，傳輸線溫度：250℃，載氣：He 1．0mL／min。

氣相色譜（GC2010，日本島津）條件：載氣為氮氣，流速1．0 mL／min；色譜柱：DB－5（30m×0．25mm×0．25μm）毛細管柱；柱溫：初始溫度200℃保持1min，以20℃／min升溫至280℃保持6min；進樣口溫度300℃，不分流方式進樣；檢測器NPD，溫度300℃。

1．5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17．0分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示。

2 結(jié) 果

2．1 利眠寧及內(nèi)標SKF525A的氣相色譜和氣相色譜－質(zhì)譜圖（見圖1～圖4）

圖1 染毒犬血中利眠寧和SKF525A氣相色譜圖（NPD）

圖2 染毒犬血中利眠寧和SKF525A氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用選擇性離子質(zhì)量色譜圖（SIM）

圖3 利眠寧的全掃描質(zhì)譜圖

圖4 利眠寧標準全掃描質(zhì)譜圖

2．2 工作曲線 分別在空白血和空白肝中添加利眠寧及內(nèi)標SKF 5 2 5A各適量，配制成含有利眠寧0．0 5μg／mL、0．1 μg／mL、0．5μg／mL、1μg／mL、5μg／mL、10μg／mL、16μg／mL、32μg／mL（或 μg／g），SKF525A12μg／mL（或 μg／g）的系列樣品，按組織樣品處理方法處理并檢測。回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)（r）及檢出限（LOD）見表1。

表1 組織器官中利眠寧檢測的工作曲線

2．3 動物表現(xiàn) 實驗組大鼠經(jīng)口灌胃利眠寧之后，表現(xiàn)為倦睡，但不引起深度睡眠，易被喚醒，大劑量時可導致昏迷，呼吸、心跳停止等中毒癥狀。

2．4 死后分布（見表2） 0．5倍LD50實驗組大鼠體內(nèi)利眠寧的平均含量從高到低依次為：胃、肝、腦、脾、睪丸、腎、肺、肌肉、心血和心臟。2倍LD50實驗組大鼠體內(nèi)利眠寧的平均含量從高到低依次為：胃、肝、肺、脾、心臟、心血、腦、腎、睪丸和肌肉。4倍LD50實驗組大鼠體內(nèi)利眠寧的平均含量從高到低依次為：胃、肝、腦、肺、腎、睪丸、肌肉、脾、心臟和心血。

表2 不同劑量中毒大鼠體內(nèi)的利眠寧含量（±s）μg／g

表2 不同劑量中毒大鼠體內(nèi)的利眠寧含量（±s）μg／g

樣品 0．5LD50 2LD50 4LD50心血32．1±10．7 230．7±20．7 17．3±6．7心臟 28．3±13．3 267．1±59．3 20．9±5．5肝臟 78．7±14．4 446．8±69．9 360．7±60．9脾臟 60．7±12．3 300．7±78．9 40．3±12．9肺臟 44．9±10．8 425．0±62．2 214．5±36．6腎臟 49．2±10．7 143．0±24．0 174．5±43．1大腦 68．9±18．9 150．3±68．4 242．5±54．8肌肉 33．8±7．8 57．8±12．9 44．9±15．9睪丸 53．0±18．3 134．8±52．2 50．7±12．5胃 254．1±34．2 815．3±91．0 899．9±82．3

3 討 論

懷疑利眠寧中毒或死亡相關(guān)者體內(nèi)利眠寧死后分布規(guī)律有可能成為判定利眠寧中毒或死亡的依據(jù)之一。本實驗結(jié)果顯示，死后分布結(jié)果顯示不同劑量灌胃后，大鼠體內(nèi)利眠寧含量胃、肝和腦的含量較高，這與入體途徑，利眠寧在體內(nèi)的轉(zhuǎn)化途徑以及主要作用于腦組織有關(guān)；心血中濃度較低，表明利眠寧隨血液循環(huán)到達各組織臟器后，更容易與組織蛋白結(jié)合，廣泛分布與各組織和體液中。3個劑量組大鼠分布特征基本相同，利眠寧在大鼠體內(nèi)的分布規(guī)律不存在劑量依賴性。

在利眠寧中毒或致死的法醫(yī)學鑒定中應(yīng)注意以下事項：全面解剖，仔細觀察胃內(nèi)容中有無殘留藥片，若有殘留未消化藥物，可以迅速判斷是否利眠寧；全面取材，進行定性定量分析。可取胃內(nèi)容、肝臟、腦和血液等為檢材進行毒物分析；結(jié)果判定時，應(yīng)注意不同臟器中利眠寧的含量關(guān)系，肺中有無吸入的藥物及其含量。并應(yīng)同時注意血藥濃度是否達中毒濃度。

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