2007－2011年寧夏地區沙門氏菌分布特征分析＊

劉 翔，郝 瓊，郭邦成，閆立群，謝明英，梁俊容，景懷琦

沙門氏菌是一種人獸共患的腸道病原菌，至今已有2 523種血清型被發現［1］，廣泛分布于自然界，寄生于人和動物體內，常見于污染的食品和污水等外環境中，是人和動物常見的病原菌，可引起人類傷寒、副傷寒和食物中毒等許多疾病，直接影響工農業和畜牧業發展，使全球遭受巨大的經濟損失。在我國，沙門氏菌食物中毒多年來居細菌性食物中毒的首位［2］。在寧夏地區，侯在文等［3］人曾對1982－1987年腹瀉病人、食品、污水及家禽家畜中分離沙門氏菌進行過菌型分布調查，結果顯示鼠傷寒沙門氏菌是當時寧夏地區的流行菌株，之后再無該地區沙門氏菌流行特征的深入報道。特對2007－2011年寧夏地區分離的沙門氏菌進行血清型研究，并用PFGE基因分型方法對流行菌株進行基因分型，揭示寧夏不同地區沙門氏菌的分布特征與流行菌株之間的同源性，為控制沙門氏菌污染、暴發食物中毒提供依據。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 菌株來源 56株沙門氏菌來源于2007－2011年寧夏食源性致病菌監測及腹瀉病監測工作，菌株的分離操作按照各年度相應的監測方案進行。

1．1．2 培養基及試劑 主要分離培養基購自廣東環凱生物技術有限公司；Api 20E生化鑒定條購自法國梅里埃公司；沙門氏菌屬診斷血清購自寧波天潤藥業技術公司；SDS、Tris Base、EDTA、硼酸購自上海生工生物公司；蛋白酶K和限制性內切酶XbaⅠ購自大連寶生物工程有限公司；SeaKem Glod Agarose購自美國BD公司。

1．2 方法

1．2．1 菌株鑒定及血清學測定 所有沙門氏菌株均經過Api 20E鑒定，再依據沙門氏菌屬Kauffmann－White－Le Minor抗原表用沙門氏菌屬診斷血清確定血清型。

1．2．2 脈沖場凝膠電泳分型（PFGE） 參照中國細菌性傳染病分子分型實驗室監測網絡（PulseNet China）的沙門氏菌PFGE分子分型方法，用SeaKem Glod Agarose將沙門氏菌包埋、XbaI酶切，把得到的限制性DNA片段用Chef Mapper進行脈沖場凝膠電泳分型，最后將成像結果用BioNu－merics（5．1）軟件聚類分析。

2 結 果

2．1 不同地區沙門氏菌血清型分布 56株沙門氏菌分為14種血清型，以腸炎沙門氏菌為主，占所有菌株數的58．93%（33／56）；其次為德爾比沙門氏菌、沙門氏菌Ⅱ和鼠傷寒沙門氏菌，均占總菌株數的5．36%（3／56）；其余為奧利翁沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌等10個血清型，在寧夏地區均不常見，共占總菌株數的25%（14／56）。

5城市中，銀川市檢出沙門氏菌最多，占所有菌株數的73．21%（41／56），依次為吳忠市、中衛市、石嘴山市和固原市。銀川市沙門氏菌呈多樣性，檢出11種血清型；中衛市和吳忠市，各檢出3種血清型；石嘴山市和固原市各檢出1種血清型。除固原市之外的4市均以腸炎沙門氏菌為主，占到各自菌株數的40%以上，見表1。

表1 寧夏不同地區不同來源沙門氏菌血清型分布Tab．1 The serotype of Salmonellafrom different regions of Ningxia

2．2 不同分離來源沙門氏菌分布 食品中沙門氏菌共檢出9種血清型，以腸炎沙門氏菌（64．5%）、奧里翁沙門氏菌（6．5%）、斯坦利沙門氏菌（6．5%）、豬霍亂沙門氏菌（6．5%）為主，其余5種血清型各檢出1株；病人中沙門氏菌共檢出6種血清型，以腸炎沙門氏菌（59．1%）、鼠傷寒沙門氏菌（13．6%）、沙門氏菌Ⅱ（13．6%）為主，其余3種血清型各檢出1株；環境中僅檢出德爾比沙門氏菌和鴨沙門氏菌各1株。

腸炎沙門氏菌在食品和病人中檢出，且構成比較高；德爾比沙門氏菌在病人和環境中檢出；鴨沙門氏菌在食品和環境中檢出；鼠傷寒沙門氏菌、沙門氏菌Ⅱ、羅森沙門氏菌和傷寒沙門氏菌僅在病人中檢出；奧利翁沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、阿貢納沙門氏菌、巴雷利沙門氏菌、山夫登堡沙門氏菌僅在食品中檢出，見表1。

2．3 主要沙門氏菌流行菌株基因特征 在56株沙門氏菌中腸炎沙門氏菌占到了58．93%（33／56），共分為11個PFGE帶型，各菌株基因同源性在60%～100%，依次命名為SALX01001到SALX01011，其中優勢帶型SALX01004有21株，占63．64%（21／33）；其次 SALX01008、SALX01009型各有2株，分 別 各 占6．06% （2／33）；其 余 SALX01001、SALX01002、SALX01003、SALX01005、SALX01006、SALX01007、SALX01010、SALX01011型各1株，分別各 占 3．03% （1／33）。 帶 型 SALX01001 到SALX01009聚類相似性在90%以上，涵蓋了該實驗菌株數的93．94%（31／33），按照 Tenover等［4］提出的菌株同源性判別標準，認為屬于同一克隆系。帶型SALX01010和SALX01011各有1株，與上一克隆系親緣關系較遠，僅占實驗菌株數的6．06%（2／33），見圖1。

圖1 33株腸炎沙門氏菌PFGE帶型聚類圖Fig．1 Clustering map for PFGE patterns onf33strains of Salmonella

3 討 論

分析表明，寧夏地區病人和食品中的流行沙門氏菌血清型已由侯在文等［3］1990年報道的鼠傷寒沙門氏菌轉變為腸炎沙門氏菌。而張毅等［5］研究2010上海市食源性沙門菌的血清型主要為鼠傷寒沙門氏菌，這表明沙門氏菌的血清型分布有明顯的年代變遷和區域差異。銀川市沙門氏菌檢出最多，具有多樣性；固原市檢出最少，無多樣性，是寧夏地區唯一腸炎沙門氏菌沒有流行的地區。這可能與銀川市是寧夏首府城市，人口密集，對外交流合作較多，而固原市地處偏遠，經濟較為落后，且交通欠發達有一定的關系。

鼠傷寒沙門氏菌、沙門氏菌Ⅱ、羅森沙門氏菌和傷寒沙門氏菌僅在病人中檢出；奧利翁沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、阿貢納沙門氏菌、巴雷利沙門氏菌、山夫登堡沙門氏菌僅在食品中檢出，說明不同時間、不同地區、不同來源的沙門氏菌血清型的構成有較大差異。

PFGE分型分辨力高、重復性好，為確定菌株之間的親緣關系提供了可靠的技術手段，被認為是細菌基因分型的“黃金標準”［1］。對病人和食品中分離的33株腸炎沙門氏菌進行PFGE分型，得到同源性在60%～100%的11個帶型，其PFGE優勢帶型SALX01004有21株，同源性為100%，分別來自我區4個市不同年份的病人和食品，推斷病人和食品中長期存在共同的沙門氏菌污染來源，而我區不同地區多次發生的腸炎沙門氏菌引起的食物中毒也側面印證了這一點。提醒大家在日常生活中要養成良好的衛生習慣，食物要洗凈、煮熟煮透再食用，同時也提醒有關政府部門加強對食品從源頭到餐桌的過程監管，從源頭上防止病人糞便對食品的污染。

［1］楊保偉，張秀麗，曲東，等．2007—2008年陜西部分零售畜禽肉沙門氏菌血清型和基因型［J］．微生物學報，2010，50（5）：654－660．

［2］朱超，許學斌．沙門氏菌屬血清型診斷［M］．上海：同濟大學出版社，2009：1－2．

［3］侯在文，董塞明．寧夏地區沙門氏菌菌型分布及藥敏試驗［J］．寧夏醫學雜志，1990，12（4）：236－238．

［4］Tenover FC，Arbeit RD，Goering RV，et al．Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed－field gel electrophoresis：criteria for bacterial strain typing［J］．J Clin Microbiol，1995，33（9）：2233－2239．

［5］張毅，陳欣欽．2010年上海市食源性沙門菌菌型分布和藥敏分析以及快速檢測方法的建立［J］．現代生物醫學進展，2011，（20）：3938－3941．