炒王不留行配方顆粒的提取工藝研究

陳 琳 胡昌江* 李文兵 周一帆 張 彤 高 源 馮 健

（1 成都中醫藥大學，成都 611130；2 四川新綠色科技發展股份有限公司，成都 611930）

炒王不留行配方顆粒的提取工藝研究

陳 琳1胡昌江1* 李文兵1周一帆1張 彤1高 源1馮 健2

（1 成都中醫藥大學，成都 611130；2 四川新綠色科技發展股份有限公司，成都 611930）

目的 確定炒王不留行配方顆粒最佳提取工藝。方法 以加水量、提取時間、提取次數為因素，采用正交設計L9（34），以王不留行黃酮苷轉移率、出膏率為指標，進行提取工藝的優選。結果 最佳提取工藝條件為加25倍量水，提取3次，每次1h。結論 優選得到的工藝穩定、合理、可行。

炒王不留行；配方顆粒；提取工藝；正交設計

中藥配方顆粒是用符合炮制規范的優質中藥飲片為原料，經現代制藥技術提取濃縮而成的單味顆粒。其性味、功效與原生藥一致，供中醫臨床配方使用，具有質量穩定、療效可靠、不需煎煮、直接沖服、服用量少、衛生安全、攜帶和儲存方便等優點。近年來，中藥配方顆粒作為對傳統中藥飲片應用形式的突破越來越受到認可。

王不留行為石竹科植物麥藍菜Vaccaria segetalis（ Neck.）Garcke的干燥成熟種子。味苦，性平。歸肝、胃經。活血通經，下乳消腫，利尿通淋。用于經閉，痛經，乳汁不下，乳癰腫痛，淋證澀痛。炒王不留行的方法是取凈王不留行，照清炒法炒至大多數爆開白花。炒王不留行呈類球形爆花狀，表面白色，質松脆[1]。其資源豐富，主產于河北、山東、遼寧、黑龍江等地，以河北產量最大。據文獻報道王不留行中含有黃酮苷、三萜皂苷、環肽、脂肪酸類等多種物質[2-4]。本實驗采用正交試驗設計對炒王不留行的水提取工藝進行研究，為炒王不留行配方顆粒的生產工藝提供實驗依據。

1 儀器、試藥和藥材

1.1 儀器

安捷倫1200型高效液相色譜儀（G1312B型二元泵，G1315C型DAD檢測器），KUUDOS SK250HP型超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司），BP211D AG電子天平（十萬分之一，德國Sartorius），ZDHW調溫電熱套（北京中興偉業儀器有限公司）。

1.2 試藥

王不留行黃酮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：111853-201001），甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

1.3 藥材

王不留行藥材購于成都市荷花池藥材市場，經成都中醫藥大學盧先明教授鑒定為石竹科植物麥藍菜Vaccaria segetalis（ Neck.）Garcke的干燥成熟種子。根據文獻和生產的需要，本實驗采用清炒法中火炮制王不留行[5]，經過高效液相色譜法測炒王不留行含量為0.34%，符合《中國藥典》2010年版一部要求。

2 實驗方法

2.1 提取條件選擇依據

王不留行黃酮苷為黃酮類成分，有良好的水溶性。預實驗取炒王不留行飲片10g加20倍量水微沸回流1h，濾渣再次微沸回流1h，共回流2次，合并濾液，用高效液相色譜法測定提取液中和原飲片中王不留行黃酮苷含量，計算出王不留行黃酮苷提取率約78%，測得出膏率約25%。試驗證明在此基礎上設計正交試驗可達到預期效果。

2.2 試驗因素水平

根據炒王不留行中主要有效成分王不留行黃酮苷的水溶性及預試驗結果，確定以王不留行黃酮苷的提取率和出膏率為指標，以加水量、提取時間、提取次數進行正交試驗，選擇L9（34）正交表，對水提工藝的各參數進行考察，因素水平見表1。

表1 因素水平

2.3 王不留行黃酮苷轉移率的考察

2.3.1 樣品溶液的制備

按正交實驗設計安排實驗（見表1），分別稱取9份炒王不留行飲片，各10g分別加入相應倍數的自來水，微沸回流提取，過濾，合并濾液，加水定容至1000mL，搖勻。吸取5mL，0.22μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備

另取炒王不留行飲片適量，粉碎，取粉末（過三號篩）約1.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL.稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3.3 對照品溶液的制備

取王不留行黃酮苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1mL含0.154mg王不留行黃酮苷的溶液，即得。

2.4 色譜條件

Scienhome公司kromasil C18色譜柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動相甲醇-0.3%磷酸溶液按表2進行梯度洗脫；檢測波長280nm；流速：1.0mL/min；柱溫30℃。

表2 梯度洗脫

線性關系的考察：精密量取王不留行黃酮苷對照品溶液2、5、10、15、20μl進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積值（Y）對進樣量（X）進行回歸，得標準曲線方程Y= 335.93-3.3716，r2=1。結果表明，在0.308μg～3.080μg范圍內，線性關系良好。

2.5 出膏率的考察

精密吸取9次正交試驗所得提取液各20mL，分別置于已經經過干燥恒重的蒸發皿中，蒸發水分至恒重得到干浸膏，計算出膏率。

2.6 實驗結果分析

采用加權評分法，按照王不留行黃酮苷轉移率和出膏率的權重比（7∶3）計算綜合評分，并對實驗結果進行分析，結果見表3，方差分析見表4。

表3 正交試驗結果

表4 方差分析

2.7 最佳提取工藝的確定

從上述結果分析可以看出，3個因素的影響大小依次為C＞A＞B，且A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，且因素A和因素C有顯著性差異，因素B無顯著性差異。從節約能耗和降低成本考慮，在保證提取充分的前提下，綜合分析各因素對王不留行黃酮苷轉移率和出膏率的影響，確定提取工藝為加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。

2.8 三批驗證試驗

以上實驗證明最佳提取工藝為加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。為了驗證所選條件的正確性與合理性，按照最佳提取工藝條件進行了3批驗證實驗，結果如表5。

表5 三批驗證實驗

3 討 論

3.1 經過研究確定王不留行配方顆粒提取的最佳工藝為：A3B1C3，即加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。實驗證明該炒王不留行提取工藝穩定合理，能有效地提取王不留行黃酮苷，且能適用于大生產，可作為炒王不留行配方顆粒的提取工藝。

3.2 王不留行黃酮苷是炒王不留行飲片中的重要成分，黃酮類化合物具有降脂、抗心律失常、抗炎、抗菌及抗病毒、瀉下等多種藥理活性[6]，且《中國藥典》2010年版一部將測定王不留行黃酮苷作為評價王不留行質量優劣的指標，因此，將王不留行黃酮苷轉移率作為本實驗的指標是可行的。

3.3 中藥配方顆粒作為飲片的發展，大多以水作為其提取溶劑，炒王不留行中的王不留行黃酮苷易溶于水，故以水作為溶媒將其制成中藥配方顆粒，既保證了傳統中藥以水煎煮的特點，又為生產節約了成本，值得推廣和應用。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:49.

[2] 桑圣民,勞愛娜,王洪誠,等.中藥王不留行化學成分的研究[J].天然產物研究與開發,1998,l0(4):1-4.

[3] 桑圣民,夏增華,毛士龍,等.中藥王不留行中黃酮甙類成分的研究[J].中國中藥雜志,2000,25(4):221-222.

[4] 李帆,梁敬鈺.王不留行的研究進展[J].海峽藥學,2007,19(3):1.

[5] 黃柏良,旺明愛,劉桂煥,等.王不留行炮制工藝的比較研究[J].湖南中醫雜志,1994,10(3):46-47.

[6] 姚新生,吳立軍,吳繼洲.天然藥物化學[M].北京:人民衛生出版社,2004:177-180.

R927.2

B

1671-8194（2012）16-0081-03

10.15912/j.cnki.gocm.2012.16.030

*通訊作者