口炎清中酚酸類成分研究

張慧曄，魏孝義，黃琳

（1.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515；2.中國科學院華南植物園，廣東 廣州 510615）

口炎清顆粒是廣州白云山和記黃埔中藥有限公司獨家生產的中藥保護品種，由山銀花、天冬、麥冬、玄參、甘草5味中藥組成，具有滋陰清熱，解毒消腫的功能。用于陰虛火旺所致的口腔炎癥[1]。本文報道從口炎清流膏中分離得到4個有機酸成分：咖啡酸（1）、綠原酸（2）、3，5-二咖啡?？鼘幩幔?）和3，4-二咖啡?？鼘幩幔?），為君藥山銀花的主要成分。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200色譜儀，日本SHIMADZU公司LC-6AD／RID-10A，色譜柱為YMC-Pack ODS（250 mm×4.6 mm，250 mm×20 mm）。柱色譜用硅膠（100～200目，青島海洋化工有限公司）；柱色譜反相硅膠[十八烷基硅醚，Develosil ODS，50μm，日本野村（Nomura）化學株式會社]；大孔吸附樹脂（Diaion HP-20，日本三菱化學株式會社）；薄層色譜板（煙臺江友硅膠開發有限公司）；反相（RP-18）TLC板[德國默克（Merck）公司]。核磁共振波譜用Bruker DRX-400核磁共振儀測定，以TMS為內標。電噴霧質譜（ESIMS）用 MDS SCIEX API 2000 LC／MS／MS儀，以甲醇為溶劑，直接進樣測定。

1.2 試藥

甲醇、丙酮、三氯甲烷和石油醚（60～90℃）：均為分析純，廣州化學試劑二廠；乙酸乙酯、正丁醇（天津市大茂化學試劑廠）為分析純；乙腈為色譜純（美國天地公司，批號811900），水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

口炎清流膏（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供）。

2 提取和分離

取口炎清流膏12 g，加入甲醇500 mL，超聲處理（功率360 W，頻率35 kHz）30 min，放冷，搖勻，濾過，濾液減壓回收溶劑，得8 g干膏；經大孔吸附樹脂柱（120 g），6 L的蒸餾水淋洗，淋洗液棄去，再用甲醇6 L洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后得甲醇洗脫物；甲醇洗脫物（2.4 g）經反相硅膠柱色譜（C18，50μm，25 g），得到10%甲醇水溶液洗脫部分360 mg、20%甲醇水溶液洗脫部分65 mg、30%甲醇水溶液洗脫部分95 mg、40%甲醇水溶液洗脫部分197 mg和50%甲醇水溶液洗脫部分30 mg。10%甲醇水溶液洗脫部分經 HPLC分析 [乙腈-0.4%磷酸水溶液（13∶87），檢測波長 327nm][1]，與綠原酸對照品對照顯示10%甲醇水溶液洗脫部分的主要成分為綠原酸，含量為31%；20%甲醇水溶液洗脫部分，將其與咖啡酸對照品同時經3種薄層系統展開、顯色[2]，3種展開系統下均顯示20%甲醇水溶液洗脫部分中的主要成分與咖啡酸對照品的Rf值一致，再經HPLC分析 [0.1%甲酸水溶液-乙腈（90∶10）]，與咖啡酸對照品對照，顯示20%甲醇洗脫部分的主要成分為咖啡酸，含量為13%；40%甲醇水溶液洗脫部分經HPLC制備，乙腈-0.1%甲酸水溶液（20∶80）洗脫，得到化合物3（10 mg）和化合物4（10 mg）。

3 結構鑒定

3.1 化合物3

黃色固體；分子式為C25H24O12；負離子ESIMSm／z515[M-H]-，353[M-C9H6O3-H]-，191[M-2C9H6O3-H]-，179，135；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ7.61（1H，d，J＝16.2Hz，H-7，caffeoyl），7.57（1H，d，J＝15.6Hz，H-7′，caffeoyl），7.06（2H， s， H-2， H-2′， caffeoyl），6.96（2H，dd，J＝8.0 Hz，1.8 Hz，H-6，H-6′，caffeoyl），6.77（2H，d，J＝7.8 Hz，H-5，H-5′，caffeoyl），6.35（1H， d，J＝ 15.6 Hz， H-8，caffeoyl），6.26（1H， d，J＝ 15.6 Hz， H-8′，caffeoyl），5.43（1H，m，H-3，quinic），5.40（1H，m，H-5，quinic），3.97（1H，dd，J＝7.8 Hz，3.0 Hz，H-4，quinic），2.31～2.16（4H，H-2×2，H-6×2，quinic）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ177.6， 168.9， 168.4， 149.69， 149.5， 147.3，147.1，146.8 ×2，128.0，127.8，123.1，123.0，116.5×2，115.6，115.3，115.1×2，74.8，37.7，72.1，70.7，72.6，36.1。數據與文獻報道的3，5-二咖啡?？鼘幩幔?，5-dicaffeoylquinic acid）一致[3-4]。

3.2 化合物4

黃色固體；分子式為C25H24O12；負離子ESIMSm／z515[M-H]-，353[M-C9H6O3-H]-，191[M-2C9H6O3-H]-，179，135；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）：δ 7.47（1H，d，J＝16.0Hz，H-7，caffeoyl），7.41（1H，d，J＝16.0Hz，H-7′， caffeoyl）， 7.01 （2H， s， H-2， H-2′，caffeoyl），6.96（2H，d，J＝7.6 Hz，H-6，H-6′，caffeoyl）， 6.78（1H， d，J＝ 8.0 Hz， H-5，caffeoyl）， 6.73（1H， d，J＝ 8.0 Hz， H-5′，caffeoyl），6.24（1H， d，J＝ 16.0 Hz， H-8，caffeoyl），6.13（1H， d，J＝ 16.0 Hz， H-8′，caffeoyl），5.34（1H，m，H-3，quinic），4.94（1H，d，J＝5.6 Hz，H-4，quinic），4.16（1H，m，H-5，quinic），2.14（2H，J＝12.8 Hz，H-2×2，quinic），2.01（1H，m，H-6，quinic），1.87（1H，m，H-6，quinic）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ177.7，168.6，168.3，149.6×2，147.7，147.5，146.7×2，127.7，127.6，123.1×2，116.5×2，115.2×2， 114.8， 114.7， 76.1， 75.8， 69.7， 69.1，39.7，38.5。數據與文獻報道的3，4-二咖啡?？鼘幩幔?，4-dicaffeoylquinic acid）一致[3-4]。

4 結果和討論

在對中藥現代化的研究中，張禮和[5]認為直接對中藥復方進行拆方研究，通過對各藥材的化學基礎研究來篩選活性化合物，有學者[6-7]認為藥物同煎后，其成分不是簡單的加和，而是發生了一定的化學變化，所以表現出藥效的變化，黃成剛[8]則認為復方的多種功效主要是多成分、多系統、多靶點相互作用的結果。本實驗通過對口炎清復方的分離，得到4個酚酸類成分：綠原酸、咖啡酸、3，4-二咖啡?？鼘幩岷?，5-二咖啡酰奎寧酸；根據已有文獻報道，這4種酚酸類成分是山銀花抗菌消炎的主要活性成分[9-12]，從而證明口炎清的抗菌消炎作用與君藥山銀花直接相關，并為口炎清復方的質量標準研究工作提供了依據。