RH(-)紅細胞洗滌去干甘油的制備過程及體會

宋春紅

北京市通州區中心血站，北京 101100

目的應用ACP215型血液處理儀制備甘油化紅細胞、去甘油化紅細胞，觀察去甘油化紅細胞的質控指標，并對操作方法和制備效果進行評價。方法隨機取10袋紅細胞懸液（2U/袋），于采血后10d應用215型血液儀處理制備甘油化紅細胞，-70℃冰箱保存30d，37℃融化，再應用215型血液處理儀制備去甘油化紅細胞。

解凍紅細胞洗滌前后留取樣本檢測冰凍紅細胞質量。結果紅細胞回收率(84±4)%，游離血紅蛋白濃度(0.31±0.12)g/L，體外溶血試驗(33±15)%，甘油殘余量(6.3±2.4)g/L。細菌培養試驗陰性。結論ACP215型血液處理儀可全程自動化無菌制備冰凍紅細胞，人為操作誤差小，實現了稀有血型紅細胞的長期保存及使用（10年）但是臨床使用前必須解凍去甘油，使洗滌后的紅細胞中甘油殘留量＜10g/L，因此，解凍去甘油的制備過程至關重要。

1 臨床資料

本站2010年和2011年共制備解凍去甘油紅細胞476μ。機器與材料：HaemoneticsACP215型血液處理儀（美國血液技術公司），-70C三洋專用冰箱 （日本SANYO公司），37℃水浴箱 （國產），無菌接駁機（泰爾茂），庫爾特血細胞計數儀（美國產品），721型分光光度計（國產）。REF235一次性血液處理耗材，羥乙基淀粉（130/0.4Nacl）9%的高滲鹽水，0.9%等滲鹽水，電子稱，血液測溫儀。

2 制備過程

將-80℃RH(-)紅細胞解凍，冰凍紅細胞取出后迅速溶于37℃水浴內4～6min，同時不斷搖動使血袋與水充分接觸加速融化，切記不能用手用力擠壓血袋，以免血袋破裂或造成紅細胞的機械性損傷，融化程度以血袋內無冰晶內為準，測試血袋表面溫度為20～24℃，并稱重血液。

ACP215全自動處理儀的安裝，按照標準操作規程選擇去甘油化程序進行正確安裝，同時對管路感知器校準離心杯安裝測試，添加管路是否打開，用無菌接駁機連接紅細胞袋和耗材的紅色條紋管路，確保融化的紅細胞懸液在管路中密閉無滲漏。將紅細胞血袋放置振蕩器上。

將洗滌所需的參數設置好，按STRT鍵開始去甘油過程，首先用高滲鹽水預沖160mL（單份80mL）然后機器進入高滲鹽水平衡靜止時間為150s。

大稀釋步驟一：首先加入稀釋液羥乙基淀粉（羥乙基淀粉有保護紅細胞的作用）340mL（單份170mL），然后機器進入平衡靜止時段，平衡時間為60s，平衡完畢等待洗滌的紅細胞液體回吸到離心杯，此時機器進行高速離心，將上清液逐漸移出杯體，隨后機器有一步無菌測試檢測需等待15s，測試完畢然后進入小沖洗過程，沖洗離心杯中的小紅細胞，沖洗結束后再次進入等待時段(此時等待5s)5s后離心機進行剎車，此時管路自動進入關閉狀態，只有廢液管路開放，排除離心杯中的氣體，機器自動將血液移出到血袋，抽空離心杯，此時需要180s。

大稀釋步驟二：大稀釋步驟1完成后，機器進入2步稀釋過程，首先加入的還是羥乙基淀粉大約160mL，次過程繼續加入稀釋液不足部分換生理鹽水，滴加完畢后平衡靜置60s，將洗滌的懸浮紅細胞再次回吸收到離心杯，進行第二次離心，再次去除上清液，此時血液中的甘油已大部去除，少量剩余部分將在小稀釋步驟再次去除。

小稀釋步驟：小稀釋洗滌溶液均為等滲鹽水，洗滌次數為6次，,過程為將等滲鹽水加入離心杯中，流出液離開離心杯進入制品廢液袋。管路感知器監測游離血紅蛋白水平。離心機停止運轉，離心杯中30mL內容物移到紅細胞袋中，經45s延遲時間，離心機重新啟動，30mL內容物從紅細胞袋返回到離心杯中，再離心60s,如此重復6次。

第 1 次60mL（流速 50mL）；第 2 次 80mL（流速 50mL）；第 3次100mL（流速 75mL）；第 4 次 130mL（流速 75mL）；第 5 次 160mL（流速 100mL）；第 6 次 300mL（流速 100mL）。

小稀釋步驟進入第6次洗滌時，機器會有提示，觀察上次廢液的顏色是否澄清，此時工作人員需觀察廢液管路，如果澄清按YES鍵繼續，成品全部回收到成品袋。如果覺得不澄清按NO鍵,機器將在繼續加鹽水洗滌1次。整個洗滌去甘油過程共用洗滌溶液約1900mL,時間為62min。

3 制備結果

ACP215全自動血液處理儀所制備的RH(-)紅細胞，符合《全血及成分血質量要求》GB18469-2001標準。檢測項目結果如下。

解凍紅細胞洗滌前后留取樣本檢測紅細胞質量。結果紅細胞回收率(84±4)%，游離血紅蛋白濃度(0.31±0.12)g/L，體外溶血試驗(33±15)%，甘油殘余量(6.3±2.4)g/L。細菌培養試驗陰性。ACP215型全自動血液處理儀可全程自動化無菌制備去甘油化紅細胞，人為操作誤差小。實現了稀有血型紅細胞的長期保存及使用（十年）但是臨床使用前必須解凍去甘油，使洗滌后的紅細胞中甘油殘留量＜10g/L，因此，解凍去甘油的制備過程至關重要。

ACP215全自動血液處理儀去甘油的紅細胞質量符合國標要求，每一步控制過程達到全程質控的目的。制備結果顯示紅細胞洗滌機去甘油紅細胞回收率高，污染零風險，制品中各項指標符合國家成分質量標準。

4 結論

ACP215全自動血液處理儀去甘油洗滌方便快捷并能提高冰凍去甘油化紅細胞質量，基本實現冰凍紅細胞的全自動制備（除更換液體），程序化可最大程度減少人為差錯事故的發生，保證產品質量；自動化操作減少了勞動強度，可做到一人多機操作。因為對流速的精確控制，更好地滿足臨床搶救用血需要。

[1] 邱艷.全血成分血質量要求與血液標準化[S].北京：中國標準出版社,2003ISBN7-5066-3285-5.

[2] 《中華人民共和國國標準化法》,1988年12月29日第七屆全國人民代表大會常務委員會第五次會議通過.

[3] 《中華人民共和國產品質量法》,1993年2月22日第七屆全國人民代表大會常務委員會第三十次會議通過；根據2000年7月8日第九屆全國人民代表大會常務委員會第十六次會議通過.