重氮法與釩酸鹽氧化法測定新生兒血清膽紅素的比較分析

李勝學 趙琴玲 嚴明 李含瑞 李愛平

膽紅素是血紅素代謝的產物，臨床上多用于黃疸的診斷和性質鑒別，亦是重要的肝功能試驗指標，準確測定具有重要的意義。目前，我國臨床實驗室測定血清總膽紅素（total TB）的方法主要有3種：重氮法、膽紅素氧化酶法和化學氧化法（如釩酸鹽氧化法）[1]。酶法測定膽紅素具有準確性高、穩定性好等優勢，但由于試劑昂貴，僅為少數臨床實驗室所接受。重氮法和釩酸鹽氧化法是多數臨床實驗室首選的檢測方法。目前仍廣泛使用的方法是重氮法，而釩酸鹽氧化法因其穩定性、精密度、準確度均能滿足實驗室要求，且試劑簡單，能在全自動生化分析儀上面使用，被越來越多的實驗室所采用，在使用過程中，本實驗室發現重氮法膽紅素測定結果稍高于釩酸鹽氧化法測定結果，但兩者的系統誤差均屬臨床可接受水平[2]，與大量的文獻報道一致，但新生兒直接膽紅素兩種方法的測定結果差異較大。

1 資料與方法

1.1 試劑和儀器 重氮法和釩酸鹽氧化法測定結果的相關回歸方程為Y=1.092X+4.815，相關系數r為0.9958，T.bil試劑盒（批號：Z109218）、D.bil試劑盒（批號：Z109218）均為美國貝克曼公司提供的配套試劑；釩酸鹽氧化法T.bil試劑盒、D.bil試劑盒均為北京利德曼公司提供，總膽紅素試劑盒批號為111011J，直接膽紅素試劑批號為111011J。采用貝克曼DXC800型全自動生化分析儀。

1.2 方法 用兩種方法同時測定從患者臨床標本中挑選出來的若干血清標本，成人組隨機挑選不同濃度的膽紅素標本進行測定，新生兒均使用兩種方法測定，然后對數據進行比較分析，部分實驗依據美國國家臨床實驗室標準委員會（NCCLS）EP9-A文件，對兩種方法進行比較。

1.3 統計學處理 使用SPSS 19.0統計軟件進行統計分析，計量資料以（±s）表示，采取配對t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 精密度實驗 取兩份標本，一份高值，一份為低值，分別用兩種方法對總膽紅素及直接膽紅素進行20次重復測定，計算其CV。重氮法：TBIL（高值）：X=235.6 μmol/L，CV=1.53%；TBIL（低值）：X=17.2 μmol/L，CV=1.98%；DBIL（高值）：X=168.1 μmol/L，CV=1.78%；DBIL（低值）：X=9.4 μmol/L，CV=2.23%；釩酸鹽氧化法：TBIL（高值）：X=232.7 μmol/L，CV=1.52%；TBIL（低值）：X=9.8 μmol/L，CV=1.79%；DBIL（高值）：X=102.8 μmol/L，CV=1.35%；DBIL（低值）：X=9.7 μmol/L，CV=1.77%。兩法精密度良好。

2.2 回收實驗 隨機抽取新鮮血清標本0.9 ml，加入原裝進口標準品1 ml，及時上機測定T.bil和D.bilL。標本濃度分別為：T.bil：22.5 μmol/L，D.bil：8.2 μmol/L。標準品濃度為：T.bil：236 μmol/L、52 μmol/L，D.bil：153 μmol/L、28 μmol/L。重氮法回收率分別為T.bil：101.2%、101.8%，平均101.5%；DBIL：102.1%、100.9%，平均101.5%；釩酸鹽氧化法回收率分別為T.bil：98.9%、99.5%，平均99.3%；D.bil：98.4%、100.4%，平均99.4%。

2.3 線性比較 用T.bil化學品配制成不同濃度梯度：0、200、400、600、800、1000 μmol/L。分別用重氮法和釩酸鹽氧化法進行測定，然后計算兩種方法的回歸方程。重氮法為：Y=1.053X-3.85，r=0.9998，TBIL在340 μmol/L內線性良好；釩酸鹽氧化法：Y=1.2184X-35.82，r=0.9963，TBIL在650 μmol/L線性。重氮法線性范圍較釩酸鹽氧化法窄。

2.4 分組比較 選取筆者所在醫院住院患者根據年齡分新生兒組、兒童組、成人組，選取各種濃度的血清進行同步測定，各組血清總膽紅素重氮法和釩酸法測定結果差異不大，相關回歸方程為Y=1.092X+4.815，相關系數r為0.9958。新生兒的直接膽紅素測定差異較大，重氮法和釩酸法測定結果的相關回歸方程為Y=0.1372X+1.8，相關系數r為0.5831，成年人及大于30 d的兒童的直接膽紅素測定結果的相關回歸方程為Y=1.1368X-3.818，相關系數r為0.9997。見表1。

2.5 相關性比較 取隨機標本40份，分別用重氮法和釩酸鹽氧化法對TBIL及DBIL進行測定，對兩種方法進行相關性比較。TBIL：Y=1.27X-0.78，r=0.996 8；DBIL：Y=1.42X-1.83，r=0.9968，兩法在TBIL及DBIL測定中相關系數均達到0.99以上，說明及兩法相關性良好。

2.6 干擾試驗 分別對重氮法和釩酸鹽氧化法進行溶血標本及脂血標本進行抗干擾試驗，試驗證明重氮法在Hb<5.5 g/L、TG<6.2 mmol/L時基本無干擾，釩酸鹽氧化法在Hb<3.5 g/L、TG<4.6 mmol/L時基本無干擾，當甘油三酯濃度為8.0 mmol/L以下時用釩酸氧化法測定TBIL和DBIL均無顯著性干擾（P>0.05）。

3 討論

兩種方法均為檢測總膽紅素和直接膽紅素的常用方法，釩酸氧化法檢測直接膽紅素的線性范圍略窄于重氮法，但是它的精密度和準確度略優于重氮法，而且抗血紅蛋白和甘油三酯干擾的能力明顯強于重氮法[1]。新生兒標本常伴有溶血，故對兩種方法做了相關干擾試驗。

兩種方法檢測結果有良好的相關性，均符合r≥0.975[2]，比較差異有統計學意義（P<0.01），釩酸氧化法檢測直接膽紅素的線性范圍略窄于重氮法，但是它的精密度和準確度略優于重氮法，而且抗血紅蛋白和三酰甘油干擾的能力明顯強于重氮法。

在臨床工作中發現小于30 d的新生兒的直接膽紅素測定，兩法差異較大，造成差異較大的原因尚待研究，重氮法測定結果更可靠，臨床認為新生兒直接膽紅素>26 umol/L為病理性黃疸[3]，因為大量新生兒黃疸患者測定的直接膽紅素如果依據重氮法測定結果進行光療，都能治愈，如果依據釩酸鹽氧化法測定的結果，臨床會認為患者為病理性黃疸，即為肝細胞損傷引起的黃疸，治療方法將與生理性黃疸有巨大區別，必定耽誤患者的治療，所以重氮法測定的新生兒直接膽紅素更符合臨床。因此建議新生兒的直接膽紅素測定不可用釩酸鹽氧化法。

[1] 陳宗平.釩酸氧化法測定血清總膽紅素的方法學評價[J].國際檢驗醫學雜志，2006，27（11）：997-998.

[2] 楊昌國.精密度評價和方法比較中NCCL評價方案的應用[J].臨床檢驗雜志，1997，17（1）：47-48.

[3] 王慕逖.兒科學[M].第5版.北京：人民衛生出版社，2000：73.