淺談我國結(jié)核分枝桿菌感染人數(shù)及其調(diào)查方法

徐苗 王國治

Mt b感染率是了解一個國家或地區(qū)結(jié)核病疫情的重要指標之一，也是制定結(jié)核病防控策略的重要依據(jù)。據(jù)估計，全球有1／3的人（約20億）感染了Mtb；我國作為世界第二大結(jié)核病高負擔國家，Mtb感染人數(shù)高達5．5億，占全國人口的44．5%。通常認為Mtb感染人群中有5%～10%的人會發(fā)生結(jié)核病，Mt b已感染人群是新發(fā)結(jié)核病的主要來源。但我國及全球Mtb感染的實際人數(shù)是否真的高達總?cè)丝诘?／3甚至更高，值得進一步探討。筆者試圖從目前Mtb感染率調(diào)查方法對其感染人數(shù)作一簡要分析。

我國Mtb感染人數(shù)最新數(shù)據(jù)來源于2000年進行的全國第四次結(jié)核病疫情調(diào)查，2010年進行的全國第五次結(jié)核病疫情調(diào)查中，因皮膚試驗所用試劑缺乏等原因，并未進行全人口的Mt b感染率調(diào)查。2000年進行的全國結(jié)核病疫情調(diào)查中［1］，對Mtb感染率的調(diào)查采用經(jīng)典的PPD皮膚試驗；通過分層整群等比例隨機抽樣確定調(diào)查點，對全國59個調(diào)查點全人口作PPD試驗和感染率調(diào)查，包括調(diào)查點內(nèi)0～14歲無卡痕和卡介苗接種史的兒童、以及15歲及15歲以上的所有人口。本次感染率調(diào)查對象共有66 546名，PPD試驗陽性（≥6 mm）人數(shù)為29 557名，全年齡組Mt b感染率為44．5%，0～14歲兒童感染率為9．0%。全年齡組的Mtb感染率隨年齡的增長而增高，45歲組達到最高峰，以后開始逐漸下降，80歲組為最低。按照Styblo等的方法，推算2000年的年 Mt b感染率為0．72%，年遞降率為4．1%。根據(jù)全人口44．5%的Mtb感染率推測出全國Mt b感染人數(shù)為5．5億。

從以上資料可以看出，我國所謂的5．5億Mtb感染者是指我國有5．5億PPD試驗陽性者（≥6 mm）。PPD陽性是否一定意味著Mtb感染？首先，我們回顧一下流行病學調(diào)查所用的方法。本次調(diào)查與世界其他各國一樣，采用WHO供應(yīng)的PPD（純蛋白衍化物PPD-RT23）進行皮膚試驗。PPD-RT23是20世紀50年代WHO與聯(lián)合國國際兒童基金會（UNICEF）委托丹麥血清研究所生產(chǎn)的一大批PPD（其中1 U相當于1／50 000 mg，當時共生產(chǎn)670 g、330億人份），推薦為各國進行流行病學調(diào)查使用，它是以7株人Mtb所制成［2］。與其他PPD一樣，PPD-RT23含有Mt b、BCG和其他環(huán)境非結(jié)核分枝桿菌共同抗原，PPD皮膚試驗陽性人群理論上應(yīng)包括Mtb感染者、卡介苗接種者和非結(jié)核分枝桿菌感染者。因此，用PPD試驗陽性來推測Mt b感染者人數(shù)，顯然是不正確的。

近期研究顯示，PPD試驗檢測Mtb感染敏感度為77%（95%CI＝71%～82%）［3］；在未接種 BCG的人群中，其診斷特異度達到97%（95%CI＝95%～99%）；但在BCG接種人群中，它的特異度較低且不一致，抽樣特異度為59%（95%CI＝46%～73%）［4］。說明在BCG免疫地區(qū)和人群中，用PPD試驗來篩查Mt b感染者，易受BCG接種的影響。同樣，在非結(jié)核分枝桿菌感染較多的地區(qū)，PPD試驗也不是一個理想方法。考慮到BCG在我國普遍接種，和我國存在一定比例的非結(jié)核分枝桿菌感染，不難推測我國Mt b感染實際人數(shù)應(yīng)遠低于上述流行病學調(diào)查中報道的5．5億。

盡管如此，根據(jù)我國居高不下的結(jié)核病發(fā)病率和病死率等數(shù)據(jù)，我國存在龐大的Mt b感染人群是毋庸置疑的，其中具有較高結(jié)核病發(fā)病風險的Mt b潛伏感染者正是新發(fā)結(jié)核病的主要來源。如能通過有效方法篩查出Mtb潛伏感染者，并對其實施有效預(yù)防，將可有效地降低結(jié)核病高負擔國家的結(jié)核病發(fā)病率。實現(xiàn)該目標的重要條件是尋求新的特異度高的篩查方法。基因組學技術(shù)的成功運用，為尋找Mtb特異性抗原提供了充分的科學基礎(chǔ)。現(xiàn)已明確，與Mtb比較，BCG基因組和大部分非結(jié)核分枝桿菌基因組中缺失一些特異性片段（RD區(qū)），其中RD1區(qū)基因在所有BCG中缺失，這為BCG接種者和Mtb感染者的鑒別提供了理想的抗原選擇。如esat6、cf p10等為RD1區(qū)的重要基因，也是世界各國開發(fā)Mtb特異性診斷性抗原的重要選擇。近年來國際上以Mt b特異性抗原為基礎(chǔ)，開發(fā)出一系列基于檢測T細胞釋放γ-干擾素反應(yīng)（IFN-γrelease assays，IGRAs）的免疫方法，即用Mt b特異性抗原（肽）刺激結(jié)核病患者或潛伏感染者T細胞，通過檢測所釋放的IFN-γ來診斷結(jié)核病或篩查Mt b感染。目前已商品化的試劑盒包括QuantiFERON?-TB Gold（Cellestis，Car negie，Australia）和 T-SPOT．TB（Oxf or d Immunotee，Oxf or d，United Kingdo m）。兩種試劑盒使用同樣的抗原（肽），不同的是前者采用ELISA技術(shù)，檢測受試者全血（包含T細胞）受Mtb特異性抗原（肽）刺激后的IFN-γ水平，后者采用ELISPOT技術(shù)檢測外周血分離出的單個核淋巴細胞經(jīng)Mt b特異性抗原（肽）刺激后能分泌IFN-γ的T細胞克隆數(shù)。兩個方法原理相同、實際診斷效果差異不大。有研究顯示，在活動性結(jié)核診斷中，Quanti FERON?-TB Gold的敏感度為70%～78%，T-SPOT．TB的敏感度為90%（95%CI＝86%～93%）［4］，對比研究顯示IGRAs診斷活動性結(jié)核的敏感度要優(yōu)于傳統(tǒng)的PPD試驗法［5］。在BCG接種人群中，IGRAs的特異度為93%～99%，遠高于經(jīng)典的 PPD 試驗法［6-7］。

鑒于PPD皮膚試驗所用抗原成分復(fù)雜且與卡介苗有交叉，導(dǎo)致其診斷特異度差；而IGRAs方法技術(shù)操作繁瑣，并且價格昂貴，對試驗場地和儀器也有較高要求，同時還需要新鮮血液在短時間內(nèi)完成檢測。以上諸多要求均限制了該方法在并不富裕的結(jié)核病高負擔國家進行推廣，尤其作為流行病學普查方法將很難進行大規(guī)模使用。如能以Mt b RD1區(qū)特異性抗原（肽）作為皮膚試驗的超敏反應(yīng)原，則有可能克服PPD皮膚試驗和IGRAs方法存在的缺陷，有望成為簡便、易行、特異的Mtb感染人群篩選的新方法。目前對Mtb RD1區(qū)特異性超敏反應(yīng)原研究的初步結(jié)果表明，該類超敏反應(yīng)原可有效鑒別Mtb活菌感染和卡介苗接種、Mt b死菌致敏以及其他非結(jié)核分枝桿菌的感染。新皮膚試驗方法利于在結(jié)核病高負擔國家推廣使用，能為Mt b感染者的篩選和流行病學普查提供技術(shù)手段，并能為進一步制定結(jié)核病防控策略提供依據(jù)［8］。

［1］全國結(jié)核病流行病學抽樣調(diào)查技術(shù)指導(dǎo)組．第四次全國結(jié)核病流行病學抽樣調(diào)查報告．中華結(jié)核和呼吸雜志，2002，25（1）：3-7．

［2］World Health Organization．Standard tuberculin test．WHO／TB／Technical Guide No．3．Geneva：World Health Organization，1963．

［3］Mack U，Migliori GB，Sester M，et al．LTBI：latent t uberculosis infection or lasting i mmune responses to M．t uberculosis A TBNET consensus statement．Eur Respir J，2009，33（5）：956-973．

［4］Abebe F，Hol m-Hansen C，Wiker HG，et al．Progress in serodiagnosis of Mycobacteriu m t uberculosis infection．Scand J Immunol，2007，66（2／3）：176-191．

［5］Mori T，Sakatani M，Ya magishi F，et al．Specific detection of t uberculosis infection：an interferon-ga mma-based assay using new antigens．Am J Respir Crit Care Med ，2004，170（1）：59-64．

［6］Rolinck-Werninghaus C，Magdorf K，Stark K，et al．The potential of recombinant antigens ESAT-6，MPT63 and mig f or specific discri mination of Mycobacterium tuberculosis and M．a(chǎn)vium infection．Eur J Pediatr，2003；162（7／8）：534-536．

［7］Sch lvinck E，Wil kinson KA，Whelan AO，et al．Ga mma interferon-based i mmunodiagnosis of t uberculosis：co mparison bet ween whole-blood and enzy me-linked i mmunospot met hods．J Clin Micr obiol，2004，42（2）：829-831．

［8］徐苗，羅永艾，黎友倫，等．重組結(jié)核分枝桿菌11 000蛋白對結(jié)核分枝桿菌感染的鑒別作用．中華結(jié)核和呼吸雜志，2006，29（11）：762-765．