高危型HPV負載量與宮頸癌前病變發展的相關性

楊 娟 肖 蘭 楊繼洲

宮頸癌的發病率日趨上升并有年輕化的趨勢，早期發現癌前病變是防治宮頸癌的關鍵。國際癌癥中心于2004年提出HPV感染是宮頸鱗狀細胞癌及宮頸鱗狀上皮內瘤變的必要因素，沒有持續的HPV感染，女性發生宮頸鱗狀細胞癌的可能性幾乎為零[1,2]。我們利用表面等離子諧振技術(surface plasmon resonance，SPR)檢測多種HPV的類型及負載量，旨在研究高危型HPV負載量與子宮頸鱗狀上皮內瘤變及子宮頸鱗癌的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2011年1月至2012年1月對在孝感市中心醫院經TCT診斷為低級別上皮內瘤變(low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)、高級別上皮內瘤變(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)、不能明確意義的非典型鱗狀上皮細胞，不能除外高級別上皮內瘤變(atypical squamous cells cannot exclude HSIL ，ASC-H)的221例患者同時進行HPV檢測，其中HPV高危陽性的患者196例，將這196例患者作為觀察對象。HPV高危陽性的196例患者年齡22～56歲，平均年齡37歲，均進行了陰道鏡活檢，其中子宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ級87例，子宮頸上皮內瘤變Ⅱ/Ⅲ級(CINⅡ/Ⅲ)級69例，鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)40例。

1.2 方法

1.2.1 TCT檢測 用薄層液基細胞學宮頸刷插入宮頸口，在宮頸外口鱗柱狀上皮交界處，均勻旋轉3～5周，取出宮頸刷，將宮頸刷置于保存液瓶中(保存液由孝感宏翔生物技術有限公司提供)，細胞學分類根據 TBS 2001年陰道 /宮頸細胞學診斷系統進行細胞學診斷。

1.2.2 HPV檢測 DNA提?。孩賹⒓毎４嬉夯靹颍? ml細胞懸液，加入到1.5 ml離心管中，12 000離心5 min，用移液器去上清。②向細胞沉淀中加1 ml Cell Washing Solution，搖動或渦旋，充分懸浮細胞沉淀，12 000離心5 min，用移液器去上清。③加入200 μl FastExtract Solution，搖動或渦旋，充分懸浮細胞沉淀。④95℃水浴15 min，每5 min混勻一次。⑤12 000離心3 min，上清可直接用于PCR擴增。

PCR擴增:①配體系95 μl擴增混合液+5 μl樣本。每4支樣本配1支陽性對照管。②配好的體系充分混勻離心后于PCR儀內特定程序擴增。③擴增完成后如不立即檢測，可置于-20℃保存，于1周內完成檢測。

分型檢測:①擴增好的樣本每管加入60 μl雜交緩沖液和20 μl陽性對照，充分混勻后離心。②將混勻后的樣本于PCR儀內95℃變性5 min。③變性后的樣本即可放入W2600基因分型檢測儀內檢測。檢測完成后儀器自動分析結果，整組檢測結束后，應對儀器做簡單維護。

1.2.3 陰道鏡活檢 于非月經期窺器暴露宮頸，依次經過涂生理鹽水，5%醋酸溶液，碘染，鏡下觀察，取異常和可疑部位活檢。

1.3 統計學處理

所有數據采用SPSS13.0統計軟件包進行統計學處理，采用χ2檢驗，t檢驗及直線相關分析。

2 結果

經統計學處理：高危型HPV陽性率CINⅠ分別與CINⅡ/Ⅲ及SCC比較，差異均有顯著統計學意義(P<0.01)，CINⅡ/Ⅲ與SCC比較，差異無統計學意義(P>0.05)。HPV平均負載量CINⅠ分別與CINⅡ/Ⅲ及SCC比較差異有顯著統計學意義(P<0.01)，CINⅡ/Ⅲ與SCC無統計學差異(P>0.05)。CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及SCC和HPV負載量呈正相關(γ=0.521,P<0.05)，CINⅡ/Ⅲ、SCC和HPV負載量無明顯相關(γ=0.065,P>0.05)，見表1。

表1 高危型HPV感染與宮頸病變的情況

3 討論

HPV是乳多空病毒科中一組病毒的總稱，分布廣泛。HPV可引起人類良性腫瘤和疣，如尖銳濕疣等，以及惡性腫瘤如宮頸癌等。依據不同型別的HPV與腫瘤發生的危險性的高低分為低危型及高危型。尖銳濕疣、扁平濕疣等良性病變中以低危型感染為主,而CINⅡ、Ⅲ及宮頸癌則以高危型感染為主，蔣艷萍等[3]的研究也表明CIN 程度的增加， 高危型HPV感染比例會增加。

我們通過對196例宮頸癌前病變患者情況進行分析，結果顯示：CINⅡ/Ⅲ及SCC的高危型HPV陽性率明顯高于CINⅠ，差異有統計學意義，提示高危型HPV感染與宮頸癌前病變進展有相關性；高危型HPV負載量和CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及SCC呈正相關，提示高危型HPV負載量能預測CINⅠ級的進展，而高危型HPV負載量和CINⅡ/Ⅲ及SCC無相關性，提示高危型HPV負載量不能預測宮頸高級別上皮內病變的進展。我們認為：確診CIN后有必要進行HPV DNA 分型，若為高危型，應積極治療，尤其是組織學診斷為CINⅠ，檢測為高危型HPV感染的。有學者認為，CIN患者行 LEEP或宮頸冷刀錐切 (CKC)，術前高危型HPV負載量與病灶殘留和復發密切相關。 Park等[4]分析了 77例因CINⅡ/Ⅲ級或微小浸潤癌行CKC后 6個月內再行全子宮切除術的患者,發現術前高危型HPV負荷量>300(HC2法)的患者 67.5%術后有殘留,而術前高危型HPV負荷量<300，殘留率只有37.8%，差異有統計學意義。Song等[5]研究了67例高危型HPV陽性的CINⅡ/Ⅲ患者,所有患者均行CKC,且切緣均為陰性。術后 6個月再次行HPV DNA檢測(HC2法)，發現術前高危型HPV DNA>500的患者 43.8%存在 HPV持續感染,而高危型HPV DNA<500的患者僅 9.8%術后存在 H PV持續感染，提示術前高病毒負荷是術后切緣陰性患者持續病毒感染的獨立影響因素。行 LEEP、 CKC術均能顯著降低 HPV負荷量，但仍有部分CIN患者手術治療后HPV仍未轉陰，原因可能是： ①術前患者感染 HPV 負荷量高,病毒拷貝數多；②術后HPV再感染；③可能與復查時間有關。Bar -Am等[6]認為 CIN患者治療后即使細胞學正常,若 HPV 病毒負荷量較高,則存在CINⅡ/Ⅲ的可能性達 80%。手術治療后仍持續感染 HPV的患者，應密切隨訪,因為這些患者是術后病灶殘留或復發的高危人群。

綜上，高危型HPV感染與宮頸癌前病變的發展密切相關，并且高危型HPV負載量與子宮頸癌前病變的發展呈正相關，高危型HPV負載量能預測低級別宮頸病變的風險，能預測宮頸病變治療后有無殘留病灶,并能評估治療效果及判斷預后。對于患者的臨床診治具有重要指導作用。

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[4] Park JY， Lee SM，Yoo CW，et al .Risk factors predicting residual disease in subsequent hysterectomy following conization for cervical intraepithelial neoplasia (CIN) Ⅲ and micro invasive cervical cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2007，107(1):39.

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