多腫瘤蛋白芯片中NSE檢測的臨床意義

鄒 華 王 東 彭 韜 謝家印 楊雪琴 單錦露

腫瘤標志物(tumor markers,TM)是指腫瘤細胞分泌或脫落到體液、組織中的物質，或是在宿主對體內寄生物反應產生并進入到體液、組織中的物質。1種腫瘤可以有多種不同的腫瘤標志物，不同腫瘤也可以表達相同的腫瘤標志物。C-12型多腫瘤芯片常用于腫瘤的臨床診斷，具有檢測快速、易于操作，以及高通量、聯合指標分析等優點，同時對腫瘤高危人群的篩查也具有顯著的臨床意義[1]。本文對資料完整的25 076例多腫瘤蛋白芯片檢測結果進行回顧性分析，重點分析不同人群和常見腫瘤中NSE(神經元特異性烯醇化酶)陽性檢測率，探討NSE單項及聯合其他腫瘤標志物與不同人群及常見腫瘤的相關性，為深入了解C-12型多腫瘤芯片中NSE陽性檢測在腫瘤篩查和診斷中的重要價值，提供臨床依據。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

我院自2003年12月至2011年7月，應用浙江湖州數康生物科技有限公司生產的C12型腫瘤診斷用蛋白芯片試劑盒(簡稱C12)，采用化學免疫法完成多腫瘤蛋白芯片檢測38 600例次，其中診斷不明確者4 229例，同一患者多次檢測達11 106例次，可供分析的病例共25 076例，其中男性15 993例，女性9 083例；年齡12～94歲，平均55.82歲。惡性腫瘤患者均經細胞學或組織學檢查確診。

25 076例可供分析的病例中，惡性腫瘤組(腫瘤組)11 485例，包括肺癌4 004例、腸癌1 178例、肝癌1 069例、食管癌785例、乳腺癌477例、胃癌375例、胰腺癌266例、卵巢癌208例、子宮內膜癌78例、前列腺癌63例及其它腫瘤2 982例，男性7 226例，女性4 259例，平均年齡55.86歲；良性病變組(良性組)3 803例，男性2 248例，女性1 555例，平均年齡55.91歲；正常體檢組(正常組)9 788例，男性6 519例，女性3 269例，平均年齡55.73歲。3組患者性別、年齡差異無統計學意義(P>0．05)。

1.2 檢測方法

抽取空腹靜脈血2 ml，分離血清，-20℃保存待測。72 h內應用HD2001A 生物芯片檢測儀進行檢測，試劑盒為浙江湖州數康生物科技有限公司生產的C12型腫瘤診斷用蛋白芯片試劑盒(簡稱C12)。12 種腫瘤標志物包括：糖類抗原199(CA19-9)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原242 (CA242)、糖類抗原125(CA125)、糖類抗原153 (CA153)、甲胎蛋白(AFP)、鐵蛋白( Ferritin)、游離型前列腺特異性抗原(fPSA)、前列腺特異性抗原( PSA)、生長激素( HGH)及絨毛膜促性腺激素β(β-HCG)。嚴格按說明書進行操作。正常參考值范圍為:CA125<35 U/mL，CA19-9<35 U/mL，CA153<35 U/mL，CA242<20 U/mL，CEA<5 ng/mL，AFP<20 ng/mL，NSE<13 ng/mL，PSA<5 ng/mL，fPSA<1 ng/mL，HGH<7.5 ng/mL，Ferritin<219 ng/mL(女)、322 ng/mL(男)，β-HCG<3 ng/mL，高于正常參考值判定為升高或陽性。

1.3 統計學分析

應用SPSS 18.0統計軟件分析處理數據，年齡采用t檢驗，其它資料采用卡方檢驗。

2 結果

2.1 不同人群NSE陽性檢測率

由表1可見，11485例惡性腫瘤患者中，NSE檢測陽性者103例(0.90%)；3 803例良性病變中，NSE檢測陽性者14例(0.37%)；正常體檢9 788例中，NSE檢測陽性者3例(0.03%)。腫瘤組NSE檢測陽性率顯著高于良性疾病組及正常組 (P<0.05)；良性疾病組NSE檢測陽性率顯著高于正常組(P<0.05)。

表1 各組中NSE檢測陽性率情況(例，%)

2.2 各種腫瘤患者中NSE檢測陽性率情況

由表2可見， NSE檢測陽性率前列腺癌最高(3.20%)，其次為卵巢癌(1.92%)、肺癌(1.15%)、肝癌(0.94%)。各腫瘤患者NSE檢測陽性率比較無顯著差異(P>0.05)。

表2 各種腫瘤中NSE檢測陽性率情況(例，%)

注：其他腫瘤包括皮膚癌、腎癌、頭頸部腫瘤、惡性淋巴瘤、惡性黑色素瘤、胸腺瘤等

2.3 各良性疾病中NSE檢測陽性情況

3803例良性疾病中NSE檢測陽性者14例，其中慢性胃炎2例，急性胃炎、冠心病、腦梗塞、慢性腎炎、腎病綜合征、腎功能不全、肝硬化、膽囊息肉、結核性心包炎、梗阻性黃疸、不完全性腸梗阻、膀胱乳頭狀瘤各1例，各類良性疾病中NSE檢測陽性率無顯著差異(P>0.05)。

2.4 腫瘤患者中NSE聯合其它腫瘤標志物檢測陽性情況

由表3可見，103例NSE檢測陽性的腫瘤患者中，其他腫瘤標志物檢測陽性率最高的是CA125(78.64%)，其次為Ferritin(72.82%),CEA(52.43%)和CA199(44.66%)。

表3 NSE與其他腫瘤標志物聯合檢測陽性情況(例，%)

3 討論

腫瘤標志物是目前早期發現腫瘤和評估療效的手段之一。多腫瘤芯片通過利用抗原抗體特異性結合的免疫學原理，在固相基質上結合多腫瘤標志物抗體，捕捉被檢測者血清中的對應腫瘤標志物，通過特定的化學反應產生光信號，實現對腫瘤標志物定量檢測到目的[2]。同時，通過聯合檢測克服單一腫瘤標志物檢測作為診斷手段其靈敏度和特異度的有限性，提高惡性腫瘤的診斷準確率，降低漏診率[3]，因而在惡性腫瘤的臨床診斷中得到了廣泛應用。

神經元特異性烯醇化酶 (NSE) 是神經和神經內分泌組織中1種參與糖酵解的酸性蛋白酶,為二聚體的烯醇化酶異構酶的1種，是有價值的脫羧基化細胞系列細胞腫瘤標志物，主要作用是催化二磷酸甘油變成烯醇式磷酸丙酮，可以反映細胞更新及凋亡率。正常情況下，NSE主要特異性地存在于神經元和神經內分泌細胞的胞質中，在起源于神經內分泌細胞的腫瘤組織也有異常表達[4]。

NSE升高最常見于神經母細胞瘤、小細胞肺癌 (SCLC) ，在其它腫瘤如甲狀腺髓質癌、嗜鉻細胞瘤、胰島細胞瘤、黑色素瘤、視網膜母細胞瘤等患者的血清NSE也可升高。目前 NSE已作為神經系統損傷和 SCLC的標志物,被用于腫瘤的鑒別診斷、放化療療效判斷、預后監測等[5]。不同組織類型的肺癌患者的癌組織和血清中NSE 含量按高低排列依次為SCLC、大細胞癌、鱗癌和腺癌[6]。盧先鋒等[7]統計分析712篇文獻，共統計5 2832例肺癌患者血清，NSE靈敏度39.73%。王勇等[8]NSE單項檢測敏感度0～44.78%，聯合檢測靈敏度50%～89.47%。國內外文獻顯示 NSE不僅在 SCLC 中明顯升高,也在一些NSCLC中明顯升高,總陽性率達 50%左右[9]。小細胞肺癌是1種神經內分泌起源的腫瘤，NSE是目前診斷小細胞未分化肺癌最敏感、最特異的標志物，可作為鑒別肺癌病理類型的重要指標[10]。FIZAZI動態觀察135例小細胞肺癌患者，發現NSE水平對小細胞肺癌患者預后判斷很有意義[11]。

不同方法的NSE測定有一定差異。放免法測定靈敏度高，特異性強，樣品不需要分離純化，可直接測定[12]。蔡燕燕采用放射免疫法，檢測 374例肺癌患者、161例肺良性病變和 158例正常對照組血清NSE水平,結果顯示肺癌患者血清NSE水平顯著性高于肺良性疾病患者和正常對照組,小細胞肺癌血清NSE水平為最高,且NSE水平有隨肺癌分期升高而增高的趨勢[13]。酶聯免疫吸附ELISA法檢測小細胞肺癌患者血清神經元烯醇化酶 NSE的敏感度為 80%[14]。應用液相芯片技術，定量檢測人血清NSE靈敏度為93.5%，特異度為97%[15]。

本組資料顯示，應用C12型腫瘤蛋白芯片檢測NSE，惡性腫瘤患者NSE檢測陽性發生率明顯高于良性病變患者及正常體檢者，但NSE檢測陽性在各種腫瘤中的差異無統計學意義。NSE檢測陽性在惡性腫瘤患者中靈敏度低，肺癌NSE靈敏度僅1.15%，其中小細胞肺癌其陽性率僅1.30%。同時，本中心應用C12型腫瘤蛋白芯片，檢測CEA、CA19-9等其他11項腫瘤標志物其陽性率與文獻報道的基本相符合[16,17]。何江、黃竅銘、王玉芳、鄭玲等[18～21]用C12型腫瘤蛋白芯片對惡性腫瘤及肺癌檢測的結果也顯示NSE檢出陽性率偏低(0～15%)。分析C12型腫瘤蛋白芯片檢測NSE陽性率低的原因，可能包括以下因素：NSE指標在血清中很不穩定，其活性將會隨時間的延長而迅速下降，檢出率則相應降低；聯合檢測隨著腫瘤標志物檢測項目增多單項檢測靈敏度下降；高濃度的鉤狀效應導致被檢測的腫瘤指標陽性率降低；機體或組織中一些抗體與腫瘤標志物形成免疫復合物。此外，不排除少數由于操作和技術上的失誤引起檢測結果的偏差。

目前主張在一定范圍內有選擇地采用多項腫瘤標志物聯合檢測來提高診斷靈敏度[22]。本研究發現，C12型腫瘤蛋白芯片中NSE陽性率低，這是此腫瘤蛋白芯片系統存在的缺陷，但是，我們可以對腫瘤標志物的組合考慮其檢測方法的可行性及經濟性，對某一惡性腫瘤優選出3～5項較敏感的標志物以獲得滿意的靈敏度和特異度。根據不同腫瘤特性分別設計針對不同腫瘤的特異性較高的腫瘤標志物蛋白芯片，如設計專門針對肺癌的CEA、CA153、NSE、CYFRA21-1、SCC、CA125等聯合檢測芯片，有助于肺癌及其組織學分型的早期診斷[23]。通過結合患者的臨床及影像資料，選擇針對不同腫瘤的特異性較高的腫瘤標志物蛋白芯片進行檢測，以期更能實現協助診斷、療效評價、預后監測等重要意義。

雖然C12型腫瘤診斷用蛋白芯片中NSE陽性率較低，但NSE單項或聯合其它腫瘤標志物仍可用于多種腫瘤的篩查和臨床診斷。

[1] 李心河,單寧寧,高 揚,等.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床應用中的評價〔J〕.檢驗醫學,2009,24(7):523.

[2] Weinberger SR,Dalmasso EA,Fung ET.Current achievements using protein chip array technology〔J〕.Curr Opin Chem Biol,2002,6(1):86.

[3] 仲召陽,王 東,李增鵬,等.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測對腫瘤診斷的臨床意義〔J〕.第三軍醫大學學報,2008,30(17):1658.

[4] Tracy MR,Hedges S B.Evolutionary history of the enolase gene family〔J〕.Gene,2000,259(1-2):129.

[5] Ferrigno D,Buccheri G,Giordano C.Neuron-specific enolase is an effective tumour marker in non-small cell lung cancer (NSCLC)〔J〕.Lung Cancer,2003,41(3):311.

[6] Plebani M,Basso D,Navaglia F.Clinical evaluation of seven tumor markers in lung cancer diagnosis:Can any combination improve the results[J].Br J Cancer,2005,72( 1):170.

[7] 盧先鋒,楊學琴,張志敏,等.肺癌血清腫瘤標志物meta分析〔J〕.中國肺癌雜志,2010,13(12):1136.

[8] 王 勇,卜智斌,張志培,等.C - 12多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在肺癌診斷中的價值〔J〕.現代腫瘤學,2011,19(1):49.

[9] Ruibal A,Nunez MI,Rodriguez J,et al.Cytosolic levels of neuron-specific enolase in squamous cell carcinomas of the lung〔J〕.Int J Biol Marker，2003,18 (3)：188.

[10] 張小紅,王 靜,王紅民.血清NSE、TSGF、CA12-5、CYF-RA21-1 聯合檢測對肺癌的診斷價值〔J〕.腫瘤基礎與臨床,2006,19( 1):16 .

[11] Fizazi K,Cojean I,Pignon JP,et al.Normal serum neuron specific enolase( NSE) value after the first cycle of chemotherapy：an early predictor of complete response and survival in patients with small lung〔J〕.Cancer,1998,82( 6):1049.

[12] 梁 成,孔凡元.神經元特異烯醇化酶檢測與臨床研究〔J〕.寧夏醫學院學報,2004,26(2):129.

[13] 蔡燕燕,曾波航.神經元烯醇化酶在肺癌中的臨床意義〔J〕.中國腫瘤,2007,16 (8):631.

[14] 張翠玲,寇大慶,白洪濤,等.神經元烯醇化酶對小細胞肺癌診斷的臨床應用〔J〕.中國醫師進修雜志,2006,29 (8)：70.

[15] 彭 娟,陳 緯,吳英松,等.液相芯片技術定量檢測人血清CEA、AFP和NSE〔J〕.熱帶醫學雜志,2007,7(1):19.

[16] 杜 佳,王 東,楊雪琴,等.基于多腫瘤標志物蛋白芯片檢測惡性腫瘤血清癌胚抗原的診斷價值分析〔J〕.第二軍醫大學學報,2012,33(5):523.

[17] 向大開,謝家印,羅 維,等.多腫瘤標志物芯片中CA19-9表達水平升高對惡性腫瘤的診斷價值〔J〕.實用癌癥雜志,2012,27:147.

[18] 何 江,余伍忠,劉 麗,等.C - 12多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統對肺癌的診斷價值〔J〕.現代腫瘤學,2009,3:468.

[19] 黃竅銘,葛明建,羅 鵬.多腫瘤標志物芯片檢測系統對非小細胞肺癌的診斷及組織分型的臨床研究〔J〕.重慶醫學,2010,39(15):2045.

[20] 王玉芳,李首慶,楊廣民,等.多腫瘤標志物聯合檢測在惡性腫瘤診斷中的價值分析〔J〕.中國現代醫藥雜志,2009,11(3):5.

[21] 鄭 玲,伍建蓉,楊 紅,等.肺癌患者血清中12種腫瘤標志物的表達〔J〕.腫瘤,2009,29(8):786.

[22] 韓景銀.腫瘤標志物聯檢對常見腫瘤診斷的評價〔J〕.放射免疫學雜志,2005,18(2):86.

[23] 黃 瀅,高興華,郭柳薇.腫瘤標志物聯合檢測在肺癌中的診斷價值〔J〕.廣西醫學,2010,32(8):908.