高效液相色譜法測定香蕉中的多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈*

周雪晴,謝艷麗,張青,馮玉紅

（1.海南省精細化工重點實驗室，海口 570228；2. 海南大學分析測試中心，?？?570228； 3.海南大學環(huán)植學院，海口 570228）

高效液相色譜法測定香蕉中的多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈*

周雪晴1,2,謝艷麗1,2,張青3,馮玉紅1,2

（1.海南省精細化工重點實驗室，海口 570228；2. 海南大學分析測試中心，海口 570228； 3.海南大學環(huán)植學院，?？?570228）

采用高效液相色譜法測定香蕉中的多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈。樣品經(jīng)乙腈提取、硅膠柱凈化后用HPLC法測定，外標法定量。對樣品前處理和色譜分析條件進行了研究和優(yōu)化。3種殺菌劑在確定的濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r≥0.999。添加3個濃度水平標準品的回收率分別為：多菌靈80.5% ～ 91.2%，噻菌靈81.2% ～86.9%，68.9% ～ 72.6%。該法對多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈3種殺菌劑的檢出限較低，分別為0.008，0.009，0.015 mg/kg。該方法可滿足香蕉中多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈的殘留限量檢測要求。

香蕉；多菌靈；噻菌靈；甲基硫菌靈；高效液相色譜法

香蕉為熱帶水果，是華南地區(qū)主要經(jīng)濟作物之一。多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈在防治香蕉病蟲害中發(fā)揮著重要作用，它們都屬于苯并咪唑類農(nóng)藥，這類物質(zhì)在自然環(huán)境中降解較慢，對人、畜有一定的毒副作用［1］。近年來，隨著人們對食品安全和綠色食品的重視，水果中農(nóng)藥殘留問題日益突出［2,3］。目前有關(guān)多菌靈、噻菌靈單劑的殘留檢測較多，但同時分析香蕉中多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈的相關(guān)方法少見報道［4］。筆者采用高效液相色譜法對香蕉中的多菌靈、噻菌靈和甲基硫菌靈進行提取分析，旨在建立一種高效、實用的香蕉中多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈殘留分析方法［5］，為香蕉中農(nóng)殘的測定提供參考。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：2695型，2487紫外檢測器，配 Xbridge C18柱 (150mm×4.6 mm,5μm)，美 國Waters公司；

電子分析天平： AB265-S型，梅特勒-托利多儀器有限公司；

旋渦混勻器：IKA MS3 basic型，德國IKA公司；

高速分散器：IKA T25 digital ULTRA-TURRAX型，德國IKA公司；

氮吹儀：Zymark LV型，美國Caliper公司；

超聲清洗機：KS-120EI型,寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司；

真空干燥箱：VD23型，德國BINDER公司；

乙腈、甲醇：色譜純, 美國Sigma公司；

丙酮、正己烷：分析純；

超純水：英國ELGA超純水儀制備；

固相萃取柱：硅膠填料，500mg，6 m L容量；

針筒過濾器：0.22 μm, 上海興亞凈化材料廠；

多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈標準品：濃度均為100μg /m L，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所。

1.2 色譜條件

色譜柱：Waters xbridge C18柱（4.6 mm×150mm，5 μm）；流動相：乙腈-2 mmol/L乙酸銨溶液（體積比40∶60）；流速：0.8 m L/m in；檢測波長：280nm ；進樣量：100μL。

1.3 樣品制備

稱取20g香蕉泥于150m L燒杯中，加入60m L乙腈，用勻漿機以轉(zhuǎn)速15 000r/m in勻漿提取2 min 后用濾紙過濾，收集濾液于100m L具塞量筒中，加入干燥后的氯化鈉振搖，靜置后分層。準確吸取上層樣品乙腈溶液40m L，用氮吹儀吹干，加入2 m L丙酮-正己烷（體積比1∶9）溶液溶解，待凈化。

固相萃取柱分別通過10m L丙酮、5 m L正己烷預(yù)處理，加入待凈化的樣品溶液，再加入5 m L丙酮-正己烷（體積比1∶9），舍棄流出液。將20m L甲醇-丙酮（體積比1∶1）溶液分4次加入進行洗脫，收集洗脫液，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至干，加入2 m L乙腈定容，待測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

用紫外分光光度計對多菌靈、噻菌靈和甲基硫菌靈標準溶液進行全波長掃描（180～ 900nm），結(jié)果表明在280nm有最大吸收，因此選擇280nm作為檢測波長。

2.2 流動相及洗脫條件的選擇

分別試驗不同比例的甲醇-水、甲醇-緩沖鹽體系、乙腈-水、乙腈-乙酸銨溶液等混合溶劑體系對3種農(nóng)藥的分離效果，結(jié)果表明，甲醇與水的體積比為60∶40、流速為0.8 m L/m in時，3種農(nóng)藥的譜圖相互重疊；甲醇與磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）體積比為60∶40時，3種農(nóng)藥能分開，但是保留時間較長，而且磷酸鹽對色譜柱及儀器的維護影響較大；乙腈與水的體積比為40∶60時，3種農(nóng)藥能分開，但分離度不理想；流動相為乙腈-2 mmol/L乙酸銨溶液（體積比40∶60）時，3種農(nóng)藥能完全分開，而且峰型較好。

在優(yōu)化的色譜條件下，多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈混合標準品的色譜峰見圖1。

圖1 多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈混合標準品的色譜圖

2.3 提取溶劑的選擇

比較了乙酸乙酯、乙腈兩種溶劑的提取效果，結(jié)果見表1。從表1可以看出，樣品用乙腈提取的效果較好，回收率較高，重現(xiàn)性較好；乙酸乙酯提取效果差，并且乙酸乙酯與水分層不明顯，導致樣品損失較大，重現(xiàn)性差，所以選擇乙腈作提取溶劑。

表1 不同提取溶劑的回收率結(jié)果

2.4 標準曲線與線性關(guān)系

準確移取多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈農(nóng)藥標準品（濃度均為100μg/m L）各 1 m L于5 m L容量瓶中，定容得20μg/m L混合標準溶液，逐級稀釋至濃度分別為 4，2，1，0.5，0.2，0.1 μg/m L。在實驗確定的最佳色譜分離條件下進行色譜測定，以各組分的峰面積（y）對樣品濃度（x）做標準曲線，結(jié)果見表2。

表2 多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈的標準曲線和檢出限

實驗表明，多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈3種農(nóng)藥在0.1～10μg/m L范圍內(nèi)線性相關(guān)性良好，r2均大于0.999，按照信噪比S/N=3得到該方法對多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈的檢出限分別為0.008，0.009，0.015 mg/kg，可以滿足香蕉樣品的最高殘留限量（MRL）的檢測要求［6］。

2.5 回收試驗

在空白香蕉樣品中分別添加3種濃度的混合標準溶液，每種濃度做3次平行試驗，按照上述樣品前處理方法和儀器工作條件進行試驗，用外標法定量，計算回收率，結(jié)果見表3。

由表3可知，多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈的加標回收率分別為 80.5%～91.2%，81.2%～86.9%，68.9%～72.6%，滿足農(nóng)殘分析準確度要求。

表3 回收試驗結(jié)果( n=3)

2.6 樣品測定結(jié)果

取海南市場上不同品種的香蕉樣品，按1.3樣品處理方法進行提取濃縮，用2 m L乙腈定容后進行液相色譜檢測，圖2是香蕉樣品的色譜圖（其中甲基硫菌靈未檢出）。表4是不同樣品的檢測結(jié)果。

圖2 香蕉樣品的色譜圖

表4 不同香蕉樣品農(nóng)殘檢測結(jié)果

通過與多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈的標準色譜峰保留時間對比，得到不同樣品中的農(nóng)殘檢測結(jié)果。由表4可以看出，只有HN008樣品中3種農(nóng)殘沒有檢出，其它樣品中都檢出一種或幾種農(nóng)殘，均小于國家標準規(guī)定食品中農(nóng)藥最大殘留限量的要求：多菌靈0.5 mg/kg（香蕉）,噻菌靈5 mg/kg（香蕉）,甲基硫菌靈 1 mg/kg(香蕉 )［6］。

3 結(jié)語

采用液相色譜法對香蕉樣品的農(nóng)殘進行檢測，香蕉樣品中的多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈得到了較好的分離，該方法準確可靠，靈敏度高。

［1］劉杰，楊春亮，查玉兵,等. 高效液相色譜法-熒光檢測器同時檢測龍眼中多菌靈和噻菌靈殘留［J］. 廣東農(nóng)業(yè)科學，2010(3):150-152.

［2］NY/T 1453-2007 蔬菜及水果中多菌靈等16種農(nóng)藥殘留測定液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［S］.

［3］盛靈慧，趙正宜，王晶，等. 液相色譜法測定多元維生素片中4中水溶性維生素［J］. 化學分析計量，2010,19(1): 30-32.

［4］廖濤，楊玉平，程薇，等. 蘋果中多菌靈、噻菌靈和甲基托布津的高效液相色譜法分析［J］. 分析測試技術(shù)與儀器，2010,16(4):257-261.

［5］Filigenzi M S, Puscher B, Aston L S, et al. Dterm ination of melam ine and related compounds in kidney tissue by liquid chromatography / tandem mass spectrometey［J］. J Agri Food Chem,2008,56(17): 7 593-7 599.

［6］GB 2763-2005 食品中農(nóng)藥最大殘留限量［S］.

Determ ination of Carbendazim, Thiabendazole and M ethylthiophanate in Banana by High Performance Liquid Chromatography

Zhou Xueqing1,2, Xie Yanli1,2, Zhang Qing3, Feng Yuhong1,2
(1. Hainan Provincial Key Lab of Fine Chem., Haikou 570228, China;2. Chemical Analytical and Testing Center of Hainan University,
Haikou 570228, China;3. College of Environment and Plant Protection of Hainan University, Haikou 570228, China)

A method of high performance liquid chromatographic(HPLC) was developed to determ ine the residues of carbendazim, thiabendazole and methylthiophanate in banana. Samples extracted w ith acetonitrile, extracts were cleaned up by silica gel column. Analytical samples were determined by HPLC and quantified by external standard method. The average recoveries spiked in banana at three concentration levels of carbendazim, thiabendazole and methylthiophanate were 80.5%-91.2%, 81.2%-86.9%, 68.9%-72.6%, respectively. The detection lim its of carbendazim, thiabendazole and methylthiophanate in banana samples were 0.008, 0.009, 0.015 mg/kg, respectively. The result showed the method is suitable for the determ ination of carbendazim, thiabendazole and methylthiophanate in banana.

banana; carbendazim; thiabendazole; methylthiophanate; HPLC

O657.7

A

1008–6145(2012)02–0034–03

10.3969/j.issn.1008–6145.2012.02.010

*海南大學2010年青年基金項目（qnjj1003）; 海南大學研究生創(chuàng)新平臺科研項目基金

聯(lián)系人：周雪晴；E-mail: zhouxueqing001@sina.com

2011-12-15