食用植物油中膽固醇含量的快速測(cè)定*

廖連英，韓飛，趙質(zhì)創(chuàng)，施煜，胡宏?duì)N，林悅凱，石聲鑫，盧仁杰

［廣東省汕頭市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東省質(zhì)量監(jiān)督食品檢驗(yàn)站（汕頭），廣東汕頭 515041］

食用植物油中膽固醇含量的快速測(cè)定*

廖連英，韓飛，趙質(zhì)創(chuàng)，施煜，胡宏?duì)N，林悅凱，石聲鑫，盧仁杰

［廣東省汕頭市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東省質(zhì)量監(jiān)督食品檢驗(yàn)站（汕頭），廣東汕頭 515041］

將食用植物油直接用無(wú)水乙醇完全溶解，經(jīng)濾膜過(guò)濾后，用高效液相色譜法測(cè)定其中的膽固醇含量。HPLC條件：Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6 mm，5 μm），100%甲醇為流動(dòng)相，流速1.0m L/min，柱溫38℃，檢測(cè)波長(zhǎng)208 nm。方法的檢出限為50mg/L，加標(biāo)回收率在91.5%～101.4%之間，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.12%～4.15%。該法適用于食用植物油中膽固醇含量的快速測(cè)定。

膽固醇；食用植物油；高效液相色譜

膽固醇常存在于動(dòng)物源性食物中，也是人體內(nèi)許多重要活性物質(zhì)的合成材料。過(guò)多食用膽固醇會(huì)形成高血脂癥，引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化，進(jìn)而誘發(fā)高血壓、冠心病等一系列心腦血管疾病［1］。餐廚廢油脂中的地溝油、潲水油是多種動(dòng)、植物油脂的混合物，其中含有大量的動(dòng)物油脂，而動(dòng)物油脂中普遍含有膽固醇，而食用植物油中一般不含或含有極少量的膽固醇。因此，可以通過(guò)檢測(cè)食用植物油中的膽固醇含量來(lái)判定其中是否含有動(dòng)物油脂，從而推斷該食用植物油是否混有地溝油。

目前，膽固醇的測(cè)定方法主要有比色法、薄層層析法、氣相色譜法、酶法及高效液相色譜法等［2］。比色法存在著操作繁瑣，測(cè)量結(jié)果誤差大、重現(xiàn)性差等問(wèn)題；薄層層析法所用的固定相粒度大，傳質(zhì)擴(kuò)散慢，柱效低，分離能力差，只能進(jìn)行簡(jiǎn)單混合物的分離；氣相色譜法需要內(nèi)標(biāo)物，或者將不皂化物酰化衍生化才能有準(zhǔn)確的結(jié)果；酶法技術(shù)要求較高，不適于作為常規(guī)方法［3］。美國(guó)FDA推薦用直接皂化法處理樣品，采用HPLC法測(cè)定膽固醇，目前該法常用于細(xì)胞、血清及膽固醇氧化產(chǎn)物的測(cè)定，但用于植物油中膽固醇的測(cè)定較少，因?yàn)椴捎迷砘ㄖ参镄杂椭瑫?huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)，原因是植物性油脂中甾醇類物質(zhì)會(huì)參與皂化反應(yīng)。筆者通過(guò)簡(jiǎn)化樣品前處理過(guò)程，直接用無(wú)水乙醇作為溶劑溶解食用植物油，經(jīng)濾膜過(guò)濾后，用高效液相色譜法快速測(cè)定其膽固醇含量，旨在為質(zhì)監(jiān)部門辨別食用植物油中是否摻有地溝油提供一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便而快速的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1100型，配DAD紫外檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司；

無(wú)水乙醇、甲醇、乙腈：色譜純，美國(guó)TEDIA公司；

膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院;

膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：1 mg/m L,準(zhǔn)確稱取0.1 g膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品，用無(wú)水乙醇溶解定容至100m L；

濾膜：0.22 μm，有機(jī)相。

1.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇，流速為1.0m L/m in；柱溫：38℃；進(jìn)樣量：10μL ；測(cè)定波長(zhǎng)：208 nm。

1.3 樣品前處理

稱取油樣約1 g（精確至0.1 mg），用無(wú)水乙醇溶解并定容于50m L容量瓶中，經(jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，供HPLC檢測(cè)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 油樣溶解

分別稱取 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 g 大豆油樣品，用無(wú)水乙醇溶解并定容于50m L容量瓶中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0.5，1.0g 油樣溶解良好，而 1.5，2.0，2.5 g 油樣均出現(xiàn)不同程度的乳濁現(xiàn)象。這表明油樣在無(wú)水乙醇中有一定的溶解度，以50m L無(wú)水乙醇中溶解1 g油樣為宜。

2.2 流動(dòng)相的選擇

分別以甲醇、甲醇–水、乙腈、乙腈–水為流動(dòng)相進(jìn)行條件優(yōu)化。結(jié)果顯示，甲醇或乙腈可以使膽固醇快速出峰，保留時(shí)間短，分離效果好；而當(dāng)流動(dòng)相中甲醇或乙腈的比例降低時(shí)，膽固醇出峰慢，保留時(shí)間延長(zhǎng)，且與干擾雜質(zhì)一起流出，分離效果差。由于乙腈具有揮發(fā)性強(qiáng)、毒性大、成本高等特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)采用甲醇作為流動(dòng)相。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

對(duì)膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行掃描，確定在205 nm處有最大吸收峰。但試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，選擇205 nm為測(cè)定波長(zhǎng)時(shí)，膽固醇標(biāo)樣和油樣的基線均不平，且易發(fā)生漂移，而甲醇在205 nm略有吸收，故選擇208 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。試驗(yàn)表明，選擇208 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)時(shí)，膽固醇標(biāo)樣和油樣的基線平穩(wěn)，無(wú)漂移現(xiàn)象。盡管選擇208 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)可造成峰值的降低，但對(duì)已知濃度樣品的測(cè)定結(jié)果表明，選擇208 nm沒(méi)有很大影響。

2.4 線性方程與檢出限

對(duì)膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋后，配制濃度分別為 0.1，0.2，0.3，0.5，1.0mg/m L 的系 列 標(biāo) 準(zhǔn)工作溶液，并進(jìn)行HPLC測(cè)定。以色譜峰面積A對(duì)膽固醇濃度c（mg/L）進(jìn)行線性回歸，得線性方程為A=3 320.517 37c-2.558 719 5，相 關(guān) 系 數(shù) r=0.999 9。根據(jù)對(duì)添加低濃度水平的膽固醇樣品的測(cè)定，以3倍信噪比計(jì)算方法的檢出限為50mg/L。

2.5 加標(biāo)回收率和測(cè)量精密度

稱取兩種已知膽固醇含量的植物油樣品各1.0g，分別進(jìn)行0.2，0.3，0.5 mg的膽固醇加標(biāo)回收試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果列于表1。由表1可見，3種水平的加標(biāo)回收率在91.5%～101.4%之間，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.12%～4.15%，符合食品檢驗(yàn)分析要求。空白油樣和加標(biāo)油樣的色譜圖分別見圖1、圖2。

表1 回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

圖1 空白油樣的色譜圖

圖2 加標(biāo)油樣的色譜圖

3 結(jié)語(yǔ)

利用膽固醇和食用植物油易溶于無(wú)水乙醇的特性，用無(wú)水乙醇直接溶解油樣，濾膜過(guò)濾后用高效液相色譜法測(cè)定其中膽固醇的含量，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該法省去了繁瑣的皂化前處理過(guò)程，操作簡(jiǎn)單、快速，為判定食用植物油中是否含有動(dòng)物油脂，進(jìn)而判斷植物油是否混有餐飲廢棄油脂提供依據(jù)。

［1］張佳程，駱承庠.直接皂化－比色法測(cè)定食品中膽固醇的研究［J］.食品與發(fā)酵業(yè)，2003，26(3): 35–38.

［2］Jiang Z，F(xiàn)enton M，Sim J S. Comparison of four different methods for egg cholesterol determ ination ［J］. Poultry Science，1991,70(4): 1 015–1 019

［3］丁卓平，王明華，劉振華，等.食品中膽固醇含量測(cè)定方法的研究與比較［J］.食品科學(xué)，2004，26(1): 130–135.

Rapid Determ ination of Cholesterol in Vegetable Oil

Liao Lianying，Han Fei，Zhao Zhichuang，Shi Yu，Hu Hongcan，Lin Yuekai，Shi Shengxin，Lu Renjie
［Guangdong Shantou Institute of Quality and Metrology Supervision Testing，Guangdong Food Supervision Inspection Station (Shantou)，Shantou 515041，China］

Samples of vegetable oil were treated w ith ethanol and filtered w ith membrane, which were used for the determination of cholesterol content by HPLC. HPLC conditions: Diamonsil C18column (250mm×4.6 mm, 5μm) was used, the mobile phase was 100% acetonitrile w ith flow rate of 1.0m L/m in, Column temperature was 38℃, UV-detector was carried out at the wavelength of 208 nm. Detection limit of the method was 50mg/L，the recovery was in the range of 91.5% – 101.4%，and the relative standard deviation was 2.12% – 4.15%. The method was suitable for rapid determ ination of cholesterol in vegetable oil.

cholesterol; vegetable oil; high performance liquid chromatography

O656.3

A

1008–6145(2012)02–0032–02

10.3969/j.issn.1008–6145.2012.02.009

*廣東省質(zhì)量監(jiān)督食品檢驗(yàn)站（汕頭）食品類風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)專項(xiàng)（汕質(zhì)計(jì)［2011］70號(hào)）

聯(lián)系人：韓飛；E-mail: fei.han@163.com

2011–11–23