齦溝液血管內皮生長因子水平與牙周病變臨床指標的關系

劉 碩，李仲影，劉艷如，薛 毅，王 琳，仇立斌，李 煒

齦溝液血管內皮生長因子水平與牙周病變臨床指標的關系

劉 碩1，李仲影1，劉艷如2，薛 毅2，王 琳1，仇立斌1，李 煒1

目的探討齦溝液中血管內皮生長因子(VEGF)與牙周病變主要臨床指標的關系。方法選擇牙周健康組12例，牙齦炎組12例，慢性牙周炎組24例(又分為靜止期和活動期，各12例)，采用酶聯免疫吸附 (ELISA)試驗對齦溝液(gingival crevicular fluid，GCF)中VEGF的水平進行檢測，數據采集完成后應用SPSS13.0軟件進行統計學分析。結果健康牙齦、慢性齦緣炎、慢性牙周炎靜止期至慢性牙周炎活動期位點 GCF中VEGF水平逐漸升高 (P＜0.05)，VEGF的濃度與牙齦指數(GI)、附著喪失(AL)呈正相關;其相關系數分別是 0.341、0.325(P 均 ＜0.05)，與牙周探診深度(PD)(r=0.236，P ＞0.05)無相關。結論齦溝液中VEGF水平與牙周病變發展密切相關，VEGF水平有可能作為評價牙周組織炎性反應與破壞程度的參考標志。

血管內皮生長因子;齦溝液;慢性牙周炎

牙周病是以炎性反應及牙周支持組織破壞為特點的感染性疾病，其病因多樣，發病機制復雜，我國成年人患病率約為50%［1］。目前還沒有精確的方法監測牙周組織炎性反應的動態變化，臨床上常用的牙周指標如牙齦指數(gingival index，GI)、牙周探診深度(probing depth，PD)、牙齦附著喪失(attachment loss，AL)等來反映牙周炎性反應和組織破壞的情況。觀察齦溝液的量和內容物的變化，對了解牙周疾病的病情變化，評價治療效果等均有重要的臨床意義［2－8］。血管內皮生長因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)是一種特異性作用于血管內皮細胞的多功能細胞因子，有誘導血管生成的作用，與血管的發生和生長有密切聯系［9］。近年許多學者研究證明，齦溝液(gingival Crevicular Fluid，GCF)中VEGF的水平高低與該部位的炎性反應程度和骨破壞程度有關［10，11］。因此，為進一步探討 VEGF與牙周病臨床指標的關系，對齦溝液中VEGF的量及內容物的變化進行檢測，為臨床治療提供參考。

1 對象與方法

1.1 對象 選取到武警河北總隊醫院口腔科門診就診并自愿參加本實驗的牙周病患者36例，以及參加正常體檢的健康者12例。入選者全身無系統性疾病，6個月內未曾服用任何抗生素及避孕藥物，未接受過牙周治療，婦女無妊娠及哺乳期;所有觀察牙牙體無齲壞及充填物，并排除吸煙、飲酒等不良生活習慣。所有患者均接受系統全口的牙周檢查，觀察牙拍數字化牙片，依據《牙周病學》［12］診斷標準分為牙周健康組、慢性齦緣炎組和慢性牙周炎組。依據華西醫科大學口腔醫學院趙江川［13］提出的慢性牙周炎活動期診斷標準，將慢性牙周炎組分為靜止期組與活動期組兩個亞組。各組資料如下:牙周健康組12例，其中男7例，女5例，年齡20～60歲，平均40.3 歲，要求 PD ＜2 mm，GI=0，AL=0 mm，X 線無牙槽骨吸收;慢性齦緣炎組12例，其中男6例，女6例，年齡20～63 歲，平均43.3 歲，要求 GI≥1，AL=0 mm，并排除青春期齦炎、妊娠期齦炎、增生性齦炎及其他牙齦病;慢性牙周炎靜止期組12例，男6例，女6例，年齡20～62歲，平均42.6歲;慢性牙周炎活動期組12例，男7例，女5例，年齡22～66歲，平均46.2 歲;要求 PD≥4 mm，GI≥1，AL≥2 mm。各組間患者的年齡差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 實驗儀器與試劑 數字化牙科成像系統(Schick公司，美國)，電子天平(BP110S，德國Sartorius公司)，高速臺式離心機(LD4－2A型，r=8 cm，北京醫用離心機廠)，Whatman 3號濾紙(Whatman公司，英國)，VEGF ELISA試劑盒(Adlitteram Diagnostic Laboratories美國)。

1.2.2 位點的選擇 牙周健康組選取右上第一磨牙為觀察牙;慢性齦緣炎組選取臨床癥狀最明顯的部位為觀察部位，如:牙齦紅腫，探診出血;慢性牙周炎組依據X線片所示，選取牙槽骨吸收并附著喪失最大者為觀察牙;上述人員如指定牙缺失者則選取左上第一磨牙為觀察牙。

1.2.3 齦溝液樣本的采集 隔濕取樣牙位，器械去除受試牙的齦上菌斑，吹干受試牙牙面及周圍牙齦黏膜，將準備就緒的2條濾紙分別插入受試牙的近中頰和遠中舌牙周袋內，遇到輕微阻力止，留置30 s后取出(舍去帶血或被唾液污染的標本)，稱重，減去原重量，換算成體積，－70℃冰箱保存待檢測。

1.2.4 觀察指標 記錄受試牙PD、GI、AL;為防止臨床檢查對GCF質和量的影響，臨床觀察指標的檢測和記錄均在取樣后進行。

1.2.5 齦溝液中VEGF的檢測 采用酶聯免疫吸附試驗對齦溝液中VEGF水平進行檢測。所有樣本收集完畢后，將冰凍樣本在室溫下解凍，加入100 μl PBS 緩沖液(0.01 mol/L，pH=7.4)，微型混合器震蕩5 min，3000 r/min，10 min離心后取上清液用于檢測VEGF。用VEGF酶聯免疫試劑盒測定VEGF水平。

1.3 統計學處理 應用 SPSS13.0軟件，4組間VEGF水平與GCF量的比較采用單因素方差分析，四組間兩兩比較采用LSD法;VEGF與GI的關系采用Spearma相關檢驗，VEGF與 PD、AL的關系采用Pearson相關檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

各組GCF量、VEGF濃度與牙周病變各指標見表1。從健康牙齦、慢性齦炎、慢性牙周炎靜止期至慢性牙周炎活動期位點，GCF量及VEGF濃度均升高，且差異有統計學意義 (P＜0.05)。VEGF濃度與GI、AL存在正相關關系，相關系數分別是0.341、0.325(P均 ＜0.05)，而與 PD 則無相關關系，相關系數為0.236(P ＞0.05)。

表1 四組間每位點中VEGF濃度與GCF量及各項臨床檢驗指標的比較(n=12;±s)

表1 四組間每位點中VEGF濃度與GCF量及各項臨床檢驗指標的比較(n=12;±s)

注:與牙周健康組比較，①P＜0.05;與慢性齦緣炎組，②P＜0.05;與慢性牙周炎靜止期比較，③P＜0.05

組別 GCF(μl) VEGF(ng/μl) 牙齦指數 牙周探診深度(mm)牙齦附著喪失(mm)牙周健康組0.767 ±0.358 23.519 ±13.376 0 1.517 ±0.420 0慢性齦緣炎組 1.125±0.617① 30.348±19.594① 1.530±0.674① 1.875±0.365 0慢性牙周炎靜止期組 1.483 ±0.781①② 34.039 ±28.125①② 1.751 ±0.622①② 3.267 ±1.614 4.167 ±1.642①②慢性牙周炎活動期組 2.192 ±1.312①②③ 57.831 ±25.208①②③ 2.083 ±0.669①②③ 4.350 ±1.485 4.833 ±1.801①②③

3 討 論

牙齦炎性反應的最初表現是齦溝探診出血，它比牙齦顏色及水腫的改變出現早［14］，而且比較客觀，故臨床上常以探診后出血作為牙齦有無炎性反應的一個可靠、安全、方便、客觀性的指標。但由于炎性反應和出血在牙齦炎和牙周炎中均可存在，不能區分牙周不同病變組織的變化，所以并不能明確診斷。本研究結果表明，齦溝液中VEGF的濃度與牙齦指數的相關系數為0.341，經統計學檢驗具有相關性。提示VEGF與牙齦指數可能和牙周的急性炎性反應期有關，牙齦炎與牙周炎在急性期時，臨床表現為牙齦紅腫，有出血傾向，與齦溝液中的VEGF的促血管生成可增加血管通透性的作用有關，其機制尚需進一步實驗研究。但根據統計學原理，表示關系密切程度的確定系數r2為0.116，表明齦溝液中影響VEGF的濃度因素中僅有11.6%與牙齦指數有關，數值并不大，尚不能說明齦溝液中VEGF的濃度變化與牙齦指數變化具有明顯相關性，這可能是由于GI主要反映牙齦組織的炎性反應程度，不能反映深部牙周支持組織的炎性反應和破壞程度。同理推測牙齦出血癥狀是較粗糙的臨床指征，僅依據牙齦出血判定牙周炎是否處于活動性病變并不十分準確，需參考其他指標綜合判定。

牙周袋是病理性加深的齦溝，也是牙周炎的重要病理改變之一，是否存在真性牙周袋是牙周炎和齦炎的重要區別。本研究結果顯示，齦溝液中VEGF的濃度與牙周探診深度的相關系數 r為0.236，經統計學檢驗無相關性，這可能由于牙周探診受許多因素的影響，如所用探針的設計，探診力量、方向、位置，根面上附著牙石，牙齦炎性反應，牙鄰面接觸區阻擋，牙根外形，以及觸覺誤差、視覺誤差、記錄誤差等。研究發現，牙齦炎是影響PD測量值的重要因素之一。健康牙齦在一般探診壓力下，探針尖端越過齦溝底而終止于結合上皮內，而在有炎性反應的牙齦，由于組織水腫，結締組織內的膠原纖維大部分破壞，同樣的探診力量可使探針穿透袋底部而達到結締組織內，終止于炎性反應區外圍的正常膠原纖維的冠方，導致PD值增加。研究還發現，臨床探診檢查時，不同檢查者之間探診力量不同，同一檢查者探診不同位點時探診力量也不同，范圍為 5 ～135 g［15］。

牙周附著水平是衡量和判斷牙周組織狀況的一個重要指標，附著喪失能客觀地反映出牙周組織的破壞程度［16］。本研究結果顯示，齦溝液中VEGF的濃度與附著喪失的相關系數r為0.325，經統計學檢驗有相關性。Prapulla等［17］也曾做過類似研究，結果與本試驗一致，他認為VEGF在牙周組織的破壞中發揮一定的作用，其濃度水平可以在一定程度上反映牙周的破壞程度。但根據統計學原理，表示關系密切程度的確定系數r2為0.106，提示在影響齦溝液VEGF濃度的因素中，有10.6%與附著喪失有關，數值并不大，尚不能提示齦溝液VEGF的濃度變化與附著喪失變化強烈相關，需要進一步研究。

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Vascular endothelial growth factor level in gingival crevicular fluid in periodontal disease

LIU Shuo1，LI Zhongying1，LIU Yanru2，XUE Yi2，WANG Lin1，QIU Libin1，and LI Wei1.1.Hebei Provincial Corps Hospital of Chinese People’s Armed Polices Forces，Shijiazhuang 050081，China;2.Bethune International Peace Hospital，Shijiazhuang 050071，China

ObjectiveTo study the relationship between the vascular endothelial growth factor(VEGF)level in gingival crericalar fluid(GCF)and periodontal clinical parameters.Methods The GCF samples were collected in 12 periodontally healthy individuals，12 gingivitis and 24 chronic periodontitis patients.VEGF levels in GCF were measured by enzyme － linked immunosorbent assay(ELISA).The data were analyzed using SPSS13.0 software package.Results The VEGF concentrations were higher in patients with periodontal disease than in persons with healthy gingiva.There was a statistical difference between the four groups(P ＜0.05).The concentration of VEGF in GCF was positivly related to gingival index(GI)and attachment loss(AL)and not related to probing depth(PD) .Conclusions VEGF level in GCF is closly related progression of periodontal disease，and can be regarded as an useful index to reflect the status of periodontal disease.

vascular endothelial growth factor;gingival crevicular fluid;chronic periodontitis

R781.41

劉 碩，男，1974年出生。碩士，主治醫師，主要從事口腔治療和修復工作。

1.050081 石家莊，武警河北總隊醫院;2.050071 石家莊，白求恩國際和平醫院

(2012－06－13收稿 2012－10－09修回)

(責任編輯 武建虎)