大鼠子宮內(nèi)膜異位癥動物模型建立方法的比較

彭 艷，何援利

(南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣州 510282)

子宮內(nèi)膜異位癥是指有生長功能的子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔被覆黏膜以外的身體其他部位的疾病。臨床癥狀可表現(xiàn)為盆腔痛、月經(jīng)失調(diào)、不孕、盆腔包塊等[1]，在育齡婦女中發(fā)病率高達(dá)10%～15%[2]，嚴(yán)重困擾著廣大婦女的身心健康。目前子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制仍不清楚，藥物和手術(shù)治療后的復(fù)發(fā)率較高，治療效果不理想。子宮內(nèi)膜異位癥動物模型是研究內(nèi)異癥發(fā)病機(jī)制、治療方法的主要途徑，所以建立子宮內(nèi)膜異位癥動物模型，為進(jìn)一步研究內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)制、治療方法等奠定基礎(chǔ)，有著深遠(yuǎn)的研究意義[3]。目前國內(nèi)外已有相關(guān)的造模方法，但是造模方法和成功率存在差異。因此，本研究旨在探索一種操作簡便而且成模率高的子宮內(nèi)膜異位癥動物模型的建模方法。

1 材料與方法

1.1材料 (1)實(shí)驗(yàn)動物：性成熟雌性Wistar大鼠15只，體質(zhì)量150～200 g，標(biāo)準(zhǔn)光照周期(14 h白光，10 h黑夜)，室內(nèi)溫度(20±2)℃、濕度40%～50%、標(biāo)準(zhǔn)飼料和水。(2)實(shí)驗(yàn)器械及藥品：普通手術(shù)器械及眼科剪；3.6%的水合氯醛、氨芐西林及常規(guī)消毒藥品等。

1.2方法

1.2.1手術(shù)方法 經(jīng)陰道涂片檢查，在大鼠動情周期的動情期進(jìn)行手術(shù)造模。根據(jù)楊萍等[4]手術(shù)在室溫28～32 ℃環(huán)境下進(jìn)行，無菌操作，以3.6%的水合氯醛10 mL/kg進(jìn)行腹腔注射麻醉。腹部備皮，常規(guī)消毒后取大鼠下腹正中、恥骨聯(lián)合上1 cm切口(長2～3 cm)，進(jìn)腹后在膀胱背側(cè)找到子宮。近端離右側(cè)子宮角1 cm處結(jié)扎，遠(yuǎn)端離卵巢1 cm處結(jié)扎。將切下的子宮組織放入盛有無菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中縱向剖開。將子宮內(nèi)膜與肌層分離(部分子宮內(nèi)膜較薄、與肌層粘連緊密者，內(nèi)膜與肌層不分離，只剝?nèi){膜層)，剪取3塊3 mm×5 mm的內(nèi)膜，分別進(jìn)行腹腔種植、皮下移植和皮下注射法進(jìn)行子宮內(nèi)膜異位移植建模。(1)腹腔種植法：將1塊內(nèi)膜組織用5-0絲線縫1針固定在左側(cè)遠(yuǎn)離腹部切口的腹壁上。(2)皮下移植法：在腹壁切口右側(cè)從腹肌與皮下筋膜層之間打隧道，以正好能置入子宮內(nèi)膜片為宜，取1塊子宮內(nèi)膜組織平整的置人右側(cè)隧道底部。(3)皮下注射法：取1塊內(nèi)膜組織修剪成0.5 mm×0.5 mm×0.5 mm大小的內(nèi)膜碎片，用9號頭皮針頭連接1 mL注射器吸取含內(nèi)膜碎屑的生理鹽水，在盡量遠(yuǎn)離腹壁切口處皮下注射。0號絲線分層縫合腹部切口，常規(guī)關(guān)腹。術(shù)畢肌內(nèi)注射16萬u/kg氨芐西林。術(shù)后正常喂養(yǎng)，觀察大鼠傷口及生活情況。

1.2.2觀察指標(biāo) 4周后再次剖腹觀察移植物生長狀況，同時(shí)切取移植物送病檢。根據(jù)子宮內(nèi)膜異位癥病理診斷標(biāo)準(zhǔn)，鏡下出現(xiàn)子宮內(nèi)膜、腺體或腺體樣結(jié)構(gòu)、間質(zhì)和出血這4種改變中的2種可確診造模成功。觀察腹腔種植、皮下移植和皮下注射法的成模情況。游標(biāo)卡尺測量內(nèi)膜異位癥病灶的長、高和寬，計(jì)算病灶體積(V)=0.52×長×寬×高[5]。比較3處病灶的成模率及病灶體積大小。取異位內(nèi)膜病灶和左側(cè)未行手術(shù)的在位內(nèi)膜標(biāo)本置于4%多聚甲醛固定24 h常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片厚3 μm，HE染色觀察組織病理學(xué)變化。

2 結(jié) 果

2.1成模情況 造模大鼠15只，均存活。異位病灶組織形態(tài)相似，外觀表現(xiàn)為體積增大，呈透明的囊狀，質(zhì)地軟，囊內(nèi)有清亮的液體積聚。在腹腔種植處15只大鼠均可見異位病灶，呈單個(gè)圓形，表面與大網(wǎng)膜粘連包裹(封3圖1a)。在皮下移植處14只大鼠可見異位病灶，經(jīng)皮膚均可觸及，呈單個(gè)球型突起，表面被結(jié)締組織覆蓋并有血管形成(封3圖1b)。在皮下注射處13只大鼠可見異位病灶，經(jīng)皮膚均可觸及，呈單個(gè)橢圓形或圓形突起，表面被結(jié)締組織覆蓋并有血管形成，其內(nèi)可見1～3個(gè)清亮小水泡黏附聚集生長(封3圖1c)。腹腔種植、皮下移植和皮下注射法的造模成功率分別為100%、93.3%和86.7%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.343)。

2.23種建模方法的異位病灶體積比較 造模4周后3種造模方法的異位病灶體積大小差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.09)。見表1。

表1 3種方法造模病灶體積比較

2.3組織學(xué)光鏡檢查 3種造模方法異位病灶顯微鏡下形態(tài)相似。異位病灶生長成1個(gè)或數(shù)個(gè)腔樣結(jié)構(gòu)，可見腺上皮及間質(zhì)細(xì)胞生長并見腺體形成，腔內(nèi)壁所襯的上皮細(xì)胞層以柱狀上皮或立方狀細(xì)胞形成環(huán)形或鋸齒狀生長，部分上皮細(xì)胞可見核下空泡。腺體結(jié)構(gòu)與大鼠正常子宮內(nèi)膜腺體結(jié)構(gòu)相似，見封3圖2。

3 討 論

自1860年首次報(bào)道子宮內(nèi)膜異位癥以來，其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明了。建立理想的動物模型模擬人類子宮內(nèi)膜內(nèi)異癥，才能有助于研究子宮內(nèi)膜異位癥的病因、發(fā)病機(jī)制、治療及預(yù)防對策。子宮內(nèi)膜異位癥常用的動物模型有猴、狒狒、大鼠等。猴和狒狒像人一樣有月經(jīng)，是最理想的動物模型，但是價(jià)格昂貴、飼養(yǎng)復(fù)雜，限制其在實(shí)驗(yàn)室廣泛使用。大鼠在研究子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制和治療方面運(yùn)用最多最廣[6-7]。大鼠雖無月經(jīng)，但其動情周期與人月經(jīng)周期相似，有一定規(guī)律性。利用陰道涂片觀察其動情期，在大鼠動情期制作子宮內(nèi)膜異位癥模型，造模成功率高，模型使用可靠。本實(shí)驗(yàn)在動情期造模，子宮內(nèi)膜異位癥造模成功率達(dá)到86.7%～100%。

手術(shù)移植法是建立子宮內(nèi)膜異位癥動物模型的主要方法[1]。經(jīng)典的子宮內(nèi)膜異位癥造模方法為將大鼠自體子宮內(nèi)膜手術(shù)移植至腹腔內(nèi)單一部位，如縫合于腹壁、卵巢表面、子宮直腸陷凹[8]。亦有報(bào)道將子宮內(nèi)膜組織移植于皮下(腹肌與皮下筋膜層之間)，造模成功率與腹腔種植無差異，有內(nèi)膜固定好，免去手術(shù)縫合，操作簡單等優(yōu)點(diǎn)[9-11]。亦有報(bào)道皮下注射法造模成功率高于皮下移植法[12]。但是王寧寧等[13]報(bào)道皮下移植法和皮下注射法在造模成功率和病灶體積無差異。本實(shí)驗(yàn)比較腹腔種植、皮下移植和皮下注射3種方法的子宮內(nèi)膜異位癥造模成功率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。種植物組織形態(tài)相似，體積大小無明顯差異。因此，3種造模方法均可以較好的建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型。相對于腹腔種植法，皮下移植法無需縫合子宮內(nèi)膜組織，符合自然黏附原則，避免縫線的異物刺激改變子宮內(nèi)膜異位癥病灶周圍的微環(huán)境，并且病灶位于皮下，觀察直觀，可進(jìn)行動態(tài)觀察，更適用于子宮內(nèi)膜異位癥病灶的連續(xù)性觀測及治療研究。相對于皮下注射法，皮下移植法無需將內(nèi)膜組織修剪成小碎片，操作簡單快速，造模成功率無差異。

綜上所述，3種方法均可以建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，但皮下種植法操作簡單，觀察直觀，便于動態(tài)觀察和連續(xù)性實(shí)驗(yàn)研究。

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