MCP-1、MMP-9在賁門腺癌組織中的表達及意義

金 冰 趙玉亭 胡述提 (新鄉醫學院，河南 新鄉 453000)

最新多項研究表明，單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)在多種惡性腫瘤細胞中的表達明顯增高，它們的表達水平與多種實體惡性腫瘤大小、浸潤深度、淋巴和血管侵犯、淋巴結轉移和國際抗癌聯盟(UICC)分期密切相關，與腫瘤生長的轉移速度密切相關〔1〕，而有關MCP-1和MMP-9在賁門癌中的表達情況還未見有報道。本研究探討MCP-1和MMP-9在不同組織學類型、不同分化程度賁門癌組織中的表達情況及二者的相關性，尋找可能的賁門癌治療的有效新途徑。

1 材料與方法

1.1 標本 選取南陽市中心醫院2008年7月至2009年7月臨床、病理資料完整的賁門癌切除標本51例，每例均取癌灶、淋巴結，選取癌旁及非賁門癌賁門組織各10例作為對照組。51例賁門癌中男36例，女15例;年齡35～74歲，中位年齡60歲;有淋巴結轉移37例，無淋巴結轉移14例;按2009版UICC TNM分期〔1〕，Ⅰ+Ⅱ期15例，Ⅲ+Ⅳ期36例;所有病例均經蘇木素-伊紅(HE)染色、光鏡下證實為賁門腺癌，其中乳頭狀腺癌17例，管狀腺癌22例，印戒細胞癌6例，黏液腺癌6例。所有患者既往均無惡性腫瘤病史，術前未接受放、化療或其他抗腫瘤治療。

1.2 試劑 兔抗人單克隆抗體MCP-1和MMP-9均購自美國signalway antibodys公司，SP通用型免疫組化試劑盒購于北京博奧森生物技術公司。二氨基聯苯胺(DAB)顯示增強劑購于北京中杉生物技術公司。

1.3 方法 手術標本切除后，立即用甲醛固定，24 h內取材、石蠟包埋、4 μm連續切片，采用免疫組化SP法，免疫組化染色按試劑盒操作說明進行，兔抗人單克隆抗體MCP-1和MMP-9稀釋濃度均為1∶100。以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對照，已知腫瘤標志物做陽性對照，同時采用組內對照。

1.4 結果判定 采用二級積分法，陽性細胞計數：根據陽性細胞占5個以上高倍視野比例計數，＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，＞50%為3分。染色強度分類：淡黃色為1分，黃或深黃色為2分，棕色或棕褐色為3分。二者計分相乘＞1分為陽性。采用雙盲法由兩位病理科醫師計分。

1.5 統計學分析 應用SPSS15.0統計學軟件對結果進行χ2檢驗及Fisher精確檢驗和Spearman相關分析。

2 結果

2.1 不同組織MCP-1，MMP-9的表達 賁門癌組織中MCP-1、MMP-9的表達率分別是84.3%(43/51)和76.5%(39/51)，均顯高于對照組〔15%(3/20)，10%(2/20)〕(P ＜0.01)。

2.2 賁門癌組織中MCP-1、MMP-9的表達與賁門癌臨床病理特征的關系 賁門癌組織中MCP-1、MMP-9的表達與腫瘤的TNM臨床分期、病理分化程度、有無淋巴結轉移明顯相關(P＜0.05)。二者的表達與患者性別、年齡、腫瘤的病理類型無關(P＞0.05)。見表1。

表1 MCP-1、MMP-9表達與賁門癌臨床病理特征的關系(n)

2.3 賁門癌組織中MCP-1、MMP-9表達的相關性 賁門癌組織中MMP-9、MCP-1雙陽性36例，雙陰性5例，僅MMP-9陽性3例，僅MCP-1陽性7例。Spearman相關性檢驗顯示賁門癌中MCP-1與 MMP-9的表達呈顯著正相關性(r=0.396，P＜0.05)。

3 討論

大量的研究報道，在人體惡性腫瘤組織中有較多巨噬細胞浸潤，腫瘤相關巨噬細胞浸潤與胃癌患者生存率降低相關;但也有少數研究報道巨噬細胞的數量較高與較好的預后相關〔3〕。腫瘤相關巨噬細胞浸潤程度與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期直接相關。巨噬細胞浸潤到腫瘤是由一系列細胞因子和趨化因子控制的，尤其是MCP-1。MCP-1在許多腫瘤如黑色素瘤、神經膠質瘤、肉瘤、白血病、肝海綿狀血管瘤、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌中都有較高表達〔4〕。

MCP-1是CC型趨化因子家族成員〔1，2〕，是最有效的巨噬細胞趨化蛋白之一，影響單核細胞、自然殺傷細胞、堿性粒細胞、T淋巴細胞〔2〕。胃癌細胞MCP-1表達與巨噬細胞浸潤和腫瘤血管密度密切相關〔3〕。Goede等〔5〕的研究表明 MCP-1能通過招募巨噬細胞間接誘導血管生成。腫瘤相關巨噬細胞可生產多種血管生成因子，研究表明MCP-1表達增加了致瘤性。Kuroda等〔6〕通過轉染實驗發現，MCP-1在裸鼠模型體內的高表達，可刺激腫瘤新生血管形成，增加正常細胞癌變的潛在風險。此外，MCP-1可誘導淋巴結轉移和血性腹水發生。Nakashima等〔7〕報道，MCP-1通過增加新血管生成，促進鼠結腸癌肺轉移。一些研究發現，MCP-1增加了體內血管內皮生長因子(VEGF)表達。VEGF是促進新生血管生成的強效、多功能的細胞因子，運用可能的獨立的功能作用于血管內皮，包括內皮細胞分裂、血管滲透性增加、生成血管活性物質和抗內皮細胞凋亡抗體來促進新生血管生成。巨噬細胞和腫瘤細胞之間的相互作用，可能是VEGF生成的一種重要途徑〔3，8〕。本文研究結果發現，賁門癌細胞內MCP-1表達明顯增高，但在癌旁賁門黏膜組織中卻極少表達;同時，賁門癌間質中浸潤的少數巨噬細胞也有MCP-1表達。

MMP-9是一種血管生成因子，使毛細血管通透性增加，促使腫瘤細胞浸潤和轉移〔9〕。和許多實體瘤一樣，賁門癌會形成新生血管，新的血管生成是腫瘤生長和轉移的一個十分重要的過程。新生血管的生成，一方面有助于提供更多的營養物質，滿足腫瘤日益增長的生長代謝需求;另一方面還為腫瘤浸潤、轉移提供了潛在通路。MMP-9通過各種機制，包括細胞外基質降解和可能的腫瘤細胞自身生長調節，促進腫瘤生長和轉移〔10〕。MMP-9有助于腫瘤壞死因子-α和配體溶解酶的細胞外釋放，避免癌細胞接受淋巴誘導的免疫作用而凋亡，在胃癌發生發展中作用活躍〔4〕。MMP-9能重塑細胞外基質，促進血管上皮細胞的遷移〔11〕。VEGF能促進血管上皮細胞增殖并且抑制細胞凋亡〔12〕。MMP-9和VEGF與胃癌發生、血管生成、腫瘤細胞增殖關系親密。

研究表明，MMP-9在腫瘤的發生早期即有強烈表達，并在腫瘤的生長中發揮著重要作用。隨著腫瘤浸潤程度的加深、淋巴結轉移站次增高及TNM分期升高，MMP-9在腫瘤組織中的陽性表達逐漸升高〔9〕。本實驗結果說明MMP-9的表達與賁門癌組織的TNM分期、淋巴結轉移、分化程度密切相關，而與年齡、性別、病理類型等臨床病理特征無關，也證實MMP-9過度表達與賁門癌浸潤、轉移密切相關。

綜上所述，MCP-1、MMP-9在可能在賁門癌的發生、發展及浸潤、轉移過程中起促進作用，為賁門癌抗血管生成療法提供了潛在靶點。聯合檢測有助于確定賁門癌的惡性程度和估計預后，為賁門癌的綜合治療提供有益的幫助;但二者在體內聯系的詳細分子機制仍有待進一步研究加以確定。

1 Zheng HC，Takahashi H，Murai Y，et al.Expressions of MMP-2，MMP-9 and VEGF are closely linked to growth，invasion，metastasis and angiogenesis of gastric carcinoma〔J〕.Anticancer Res，2006;26(5A)：3579-83.

2 Ohta M，Kitadai Y，Tanaka S，et al.Monocyte chemoattractant protein-1 expression correlates with macrophage infiltration and tumor vascularity in human gastric carcinomas〔J〕.Int J Oncol，2003;22(4)：773-8.

3 Hong KH，Ryu J，Han KH.Monocyte chemoattractant protein-1-induced angiogenesis is mediated by vascular endothelial growth factor-A〔J〕.Blood，2005;105(4)：1405-7.

4 Carmeliet P.Angiogenesis in life，disease and medicine〔J〕.Nature，2005;438(7070)：932-6.

5 Goede V，Brogelli L，Ziche M，et al.Induction of inflammatory angiogenesis by monocyte chemoattractant protein-1〔J〕.Int J Cancer，1999;82(5)：765-70.

6 Kuroda R，Ponce ML，Young HA，et al.Human endothelial cells express CCR2 and respond to MCP-1：direct role of MCP-1 in angiogenesis and tumor progression〔J〕.Blood，2000;96(1)：34-40.

7 Nakashima S，Tatsuguchi A，Hiratsuka T，et al.Monocyte chemoattractant protein 1 and CD40 ligation have a synergistic effect on vascular endothelial growth factor production through cyclooxygenase 2 upregulation in gastric cancer〔J〕.J Gastroenterol，2008;43(3)：216-24.

8 Kondo K，Kaneko T，Baba M，et al.VEGF-C and VEGF-A synergistically enhance lymph node metastasis of gastric cancer〔J〕.Biol Pharmaceutical Bull，2007;30(4)：633-7.

9 Rundhaug JE.Matrix metalloproteinases and angiogenesis〔J〕.J Cell Mol Med，2005;9(2)：267-85.

10 Klein G，Vellenga E，Fraaije MW，et al.The possible role of matrix metalloproteinase(MMP)-2 and MMP-9 in cancer，e.g.acute leukemia〔J〕.Crit Rev Oncol Hematol，2004;50(2)：87-100.

11 Miyata Y，Kanda S，Nomata K，et al.Expression of metalloproteinase-2，metalloproteinase-9，and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in transitional cell carcinoma of upper urinary tract：correlation with tumor stage and survival〔J〕.Urology，2004;63(3)：602-8.

12 Kaneko T，Konno H，Baba M，et al.Urokinase-type plasminogen activator expression correlates with tumor angiogenesis and poor outcome in gastric cancer〔J〕.Cancer Sci，2003;94(1)：43-9.