血液標本處置方式和時間對血糖濃度的影響及統計學問題探討

牟衛東（重慶市云陽縣中醫院檢驗科 404500）

由于血液標本離體后紅細胞對葡萄糖進行酵解作用，導致血液標本中血糖濃度降低，因此將血液標本中紅細胞與血清進行分離處置和放置時間是影響血糖濃度的重要因素［1-3］。大量研究重復該類研究實驗，但由于作者對統計學知識的不熟悉，在統計學方法選擇上存在一些誤用，特別是在考察血液標本放置不同時間點對血糖濃度檢測的影響時均采用配對t檢驗，直接導致犯同一類錯誤的概率增大，即把本無差異兩個總體均數判為有差異，使結論的可信度降低［1-7］。為此，作者選擇3種常見的血液標本離體后狀態，放置不同時間后進行血糖濃度測量，以分析其對血糖濃度檢測的影響，重點在于給出了這類實驗設計正確的數據統計方法，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按照隨機抽樣原則選取臨床診斷無糖尿病的健康體檢人員30例，男17例，女13例，年齡31～52歲（平均43.8歲）。所有參與人員簽署了知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 血糖濃度檢測儀器為深圳邁瑞BS－800全自動生化分析儀及配套校準品、質控品，檢測試劑為葡萄糖測定試劑盒（葡萄糖氧化酶法），批號141512003，由深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司提供。

1.2.2 方法 按照參考文獻［5］對血液標本進行處理，抽取清晨空腹靜脈血9 mL，不抗凝，分裝成6管，各1.5 mL，分別編號A、B、C、D、E、F管。血液標本進行以下處理：A管離心，分離血清；B管離心，不分離血清；C管、D管、E管、F管靜置于室溫中（27℃），檢測前離心。在距離采血時間1 h測A、B管；2 h測 A、B、C管；4 h測 A、B、D管；6 h測 A、B、E管；8 h測 A、B、F管。每份樣品平行測定2次，取均值記錄。按樣本處理方式進行分類，A 管為第1組，B管為第2組，C、D、E、F為第3組。

1.3 統計學處理 用統計學分析軟件SPSS 13.0進行統計分析，實驗數據用表示。不同處理方式下血液標本不同時間點血糖值檢測結果間的均值比較采用方差分析；以A管第1小時測量值為對照組，各組不同時間點血糖值與對照組兩兩比較采用Dunnett－t檢驗；作為比較，各組不同時間點血糖值與對照組比較還采用配對t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 血液標本不同處理方式下放置不同時間對血糖測量值的影響 按處理方式的不同對血液標本匹配為3個組，血液標本的處理方式對血糖測量結果有顯著影響（F＝84.216，P＜0.01），同時標本放置時間對血糖結果也存在顯著影響（F＝14.621，P＜0.01），見表1。

表1 處理方式和放置時間對血糖測量結果方差分析

表2 不同處理方式的血液標本放置不同時間血糖測定結果的比較（mmol／L

表2 不同處理方式的血液標本放置不同時間血糖測定結果的比較（mmol／L

注：－表示無數據。采用配對t檢驗與0 h相比，a P＜0.01；與0 h相比，b P＜0.05，c P＜0.01。

放置時間（h）第1組（離心，分離血清）第2組（離心，不分離血清）第3組（未離心，37℃水浴）0 6.02±1.12 6.02±1.12 6.02±1.12 1 6.02±1.12 5.56±1.10a －2 5.93±1.10a 5.39±1.10a 5.12±1.10ab 4 5.87±1.12a 4.87±0.80ab 4.37±1.14ac 6 5.82±1.11a 4.89±1.04ac 3.43±1.20ac 8 5.66±1.07a 4.55±1.02ac 2.72±1.24ac F 0.457 7.062 38.487 P 0.767 ＜0.01 ＜0.01

2.2 血液標本不同處理方式下放置不同時間血糖結果比較為進一步了解標本放置時間對血糖值測量結果的影響，每組間進行方差分析，后用Dunnett－t檢驗進行兩兩比較，結果見表2。結果顯示采用第1組處理方式處理血液標本，血糖測定值在各時間點差異無統計學意義（F＝0.457，P＞0.05）；采用第2組和第3組處理方式，發現隨著放置時間的延長，血糖測量值均逐漸降低，而第3組處理方式下血糖值下降更為顯著，如圖1所示；與對照組相比，第2組在第4小時時血糖值下降差異具有統計學意義（P＜0.05），而第6、8小時血糖值顯著降低（P＜0.01）；第3組則在第2小時時血糖值降低差異就具有統計學意義（P＜0.05）。各組放置不同時間后血糖值與0 h采用配對t檢驗，發現各時間點血糖值均顯著降低（P＜0.01）。

圖1 不同處理方式的血液標本血糖值隨放置時間的變化曲線

3 討 論

血液標本采集后，紅細胞仍然酵解葡萄糖，使標本血糖濃度降低［8］。眾多研究顯示，標本放置時間、保存溫度、血清分離、采用不同的抗凝劑均對血糖測量的穩定性產生影響［1-2，4，7］。本實 驗結果也顯示，血液標本處理方式和放置時間對血糖濃度具有顯著影響，提示臨床醫生在分析血糖檢測結果時，要注意實驗前因素對檢測結果的影響。另一方面，臨床實驗室在重視室內質量控制的時候，也要充分認識實驗前質量控制的重要性。這需要加強臨床醫生及臨床實驗室對這一常規檢測項目充分認識和溝，從而使血糖檢測更有助于相關疾病診療和檢測。

t檢驗和方差分析均是對計量資料間均值比較的常用統計學方法，然而一些臨床醫務人員由于并不熟悉這兩種統計學方法，在實際運用中難免出現一些不妥甚至誤用現象。通過分析已發表血液標本處理和放置時間對血糖濃度影響系列研究中的相關文章，最常見的錯誤在于對多個不同時間點的標本血糖值均數進行比較時，采用配對t檢驗方法，這樣做使得增大了犯同一類錯誤的概率α，即可能把本來無差異的兩個總體均數判為有差異，使結論的可信度降低。本文給出以一種正確的該類實驗的統計學方法，同時與文章報道的采用配對t檢驗統計學方法相比，得出的結論截然不同，發現每組不同時間點與對照組相比，差異有統計學意義，即采用配對t檢驗增大了假陽性概率。

通過糾正該類研究的統計學方法發現，對血液標本及時離心并分離血清血糖值在8 h內差異無統計學意義；離心但不分離血清將在第4小時血糖值濃度出現降低；不離心置于室外下的標本則在第2小時血糖值濃度出現降低。因此，為保障血糖檢測結果的準確性，在血液標本不能及時送檢情況下，采血人員應及時對血液標本進行血清分離操作。

［1］吳鑫，陳峰.室溫下血液標本放置時間對血糖測定結果的影響［J］.檢驗醫學與臨床，2011，8（9）：1131－1132.

［2］譚國萍.血液標本放置時間和抗凝劑對血糖檢測結果的影響［J］.實用醫技雜志，2004，11（7）：1292－1293.

［3］夏歷，謝小兵.血糖測定中影響因素的探討［J］.湖南師范大學學報：醫學版，2007，4（1）：33－35.

［4］沈紅五，陳宏梅，徐秀群，等.標本放置時間與保存溫度對血糖血鉀結果的影響［J］.護理學雜志，2011，26（8）：61－63.

［5］魏成翠，劉阿玲，賈琳.血液標本放置時間對血糖檢測結果的影響［J］.中國誤診學雜志，2009，9（15）：3559－3560.

［6］任愛英.血液標本放置時間對血糖測定結果的影響［J］.檢驗醫學與臨床，2010，7（1）：59－60.

［7］劉學政.血液標本放置時間和處理方式對血糖濃度的影響［J］.國際檢驗醫學雜志，2012，33（3）：368－369.

［8］王正芳.糖尿病患者靜脈血液離體后不同時間血糖濃度的變化［J］.中國社區醫師：醫學專業，2011，30（13）：30.