一種簡易檢測牛奶中青霉素殘留的方法

摘要：采用微生物法建立了一種簡易檢測牛奶中青霉素殘留的方法。結果顯示該法對樣品中青霉素殘留的檢測限為０．８ＩＵ／ｍＬ。該法可以檢測出牛奶中的青霉素殘留，對基層奶牛養殖場檢測青霉素殘留具有重要的意義。

關鍵詞：青霉素；藥物殘留；檢測；牛奶

中圖分類號：ＴＳ２５２．７文獻標識碼：Ａ文章編號：１００７－２７３Ｘ（２０12）06-0011-01

長期使用抗生素會造成畜禽免疫力下降，引起畜禽內源性感染和殘留，而人類食用抗生素超量的畜產品會產生抗藥性，或因抗生素大量蓄積而對人體產生毒害。近年來，牛奶中的抗生素殘留成為人們日益關注的話題。目前抗生素的檢測方法按照檢測原理和使用的儀器可分微生物法、免疫法、理化儀器法等３類［１－４］。其中微生物法由于其簡單快速、易于普及，在基層養殖場具有極大的應用前景。本試驗采應用微生物法建立了一種快速檢測牛奶中青霉素殘留的方法。

１材料與方法

１．１材料

金黃色葡萄球菌由本中心保存。牛奶采自河北省保定市某牛場。青霉素標準品購自上海碩光科技有限公司，腦浸液肉湯培養基（ＢＨＩ）購自青島海博生物技術有限公司，牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉等購自上海希美生物科技有限公司，其他生化試劑均購自國藥集團化學試劑有限公司。

１．２方法

１．２．１菌種活化將金黃色葡萄球菌菌種從冰箱取出，劃線接種到固體營養瓊脂培養基上，３７ ℃培養２４ ｈ，然后接種到滅菌的ＢＨＩ培養基中，３７ ℃培養２４ ｈ，備用。

１．２．２青霉素標準液的配置和濾紙片的制備用蒸餾水配置青霉素標準液，使其含量分別為１．２、１．０、０．８、０．６、０．４、０．２ ＩＵ／ｍＬ。將干燥的滅菌濾紙片分別浸入上述青霉素溶液中，３０ ｍｉｎ后取出，置干燥箱中干燥，取出后分裝到不同的玻璃瓶中備用。

１．２．３青霉素檢測方法的建立取活化的金黃色葡萄球菌菌液５０ μＬ均勻涂布到固體營養瓊脂培養基表面，倒置培養皿１０ ｍｉｎ，使表面水分干燥。取上述制作好的青霉素濾紙片貼到固體培養基表面，做好標記，在平皿中間貼一個空白濾紙片做對照。３７ ℃培養２４ ｈ，用直尺測量抑菌圈大小，記錄結果。

１．２．４牛奶中青霉素殘留的檢測牛奶直接采自牛場，其中病牛３頭，健康牛３頭。將濾紙片用上述方法制作成牛奶浸液濾紙片，貼到涂布菌液的平板上，３７℃培養２４ ｈ后觀察結果。

２結果

本試驗采用金黃色葡萄球菌作為工作菌，首先用青霉素標準品探討了該方法的檢測限。結果表明，隨著青霉素含量的增加，其抑菌圈逐漸增大（圖１Ａ）。但在０．２～０．６ ＩＵ／ｍＬ范圍內觀察不到抑菌圈，０．８ ＩＵ／ｍＬ開始出現明顯的抑菌圈，說明該方法的檢測限為０．８ ＩＵ／ｍＬ。

對牛場采集的牛奶進行檢測，發現病牛牛奶均可檢測到青霉素殘留（圖１Ｂ）。這可能是因為牛場正在對患病牛進行治療，青霉素殘留在牛奶中所致。對健康牛奶檢測未觀察到抑菌圈。研究結果表明該方法可用來檢測牛奶中的青霉素殘留。

３討論

目前檢測抗生素殘留的方法很多，如ＴＴＣ、ＥＬＩＳＡ、ＨＰＬＣ法等［５，６］。對藥物殘留的檢測限也越來越低。但是對于廣大的基層奶牛養殖場來說，這樣的檢測方法大多數都需要特殊的儀器設備，尤其對于小規模奶牛養殖場，購買如此昂貴的儀器并不是理想的選擇［７］。所以微生物法在廣大基層奶牛養殖場具有極大的應用前景。本試驗所建立的抗生素檢測方法采用金黃色葡萄球菌作為工作菌，探索了對青霉素檢測的范圍，表明可以檢測到０．８ ＩＵ／ｍＬ的青霉素標準品。經過對奶牛場的牛奶樣品進行檢測，表明該方法具有可行性，可以檢測出牛奶中的青霉素殘留，在廣大基層奶牛養殖場具有廣泛的應用價值。

參考文獻：

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