用豬藍(lán)耳病弱毒疫苗治療普通型豬藍(lán)耳病效果觀察

摘要：２０１０年５月以來，宜昌市普通型豬藍(lán)耳病零星散發(fā)，通過對(duì)發(fā)病豬注射大劑量豬藍(lán)耳病弱毒疫苗進(jìn)行治療，對(duì)３０ｋｇ以上病豬的治愈率可達(dá)９０．２％，收到良好效果。

關(guān)鍵詞：豬藍(lán)耳病；弱毒疫苗；療效

中圖分類號(hào)：Ｓ８５８．２８文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：１００７－２７３Ｘ（２０12）06-0009-02

豬藍(lán)耳病是一種發(fā)病率和死亡率高、傳播快、主要侵害豬的繁殖和呼吸系統(tǒng)的病毒性傳染病。主要表現(xiàn)為母豬繁殖障礙、仔豬斷奶前高死亡率、育成豬的呼吸道疾病三大癥狀。多表現(xiàn)為高熱（４１℃以上）、精神沉郁、厭食、呼吸困難，耳朵、乳頭、外陰、腹部、尾部發(fā)紺，以耳尖最為常見。懷孕母豬流產(chǎn)或早產(chǎn)，產(chǎn)木乃伊、死胎和病弱仔豬，死產(chǎn)率可達(dá)８０％～１００％。仔豬特別是乳仔豬死亡率很高，可達(dá)８０％以上。大多數(shù)新生仔豬出現(xiàn)呼吸困難（腹式呼吸）、肌肉震顫、后軀麻痹、共濟(jì)失調(diào)、打噴嚏、嗜睡、精神沉郁、食欲不振等癥狀。育肥豬體溫可升高至４１℃左右，食欲明顯減少或廢絕，多數(shù)全身發(fā)紅，呼吸加快，咳嗽明顯，個(gè)別病豬流少量黏性鼻液［１］。該病大多混合感染豬瘟（ＨＣＶ）、豬流感病毒（ＳＩＶ）、偽狂犬病病毒（ＡＤＶ）、豬圓環(huán)病毒２型（ＰＣＶ－ＩＩ）和豬胸膜肺炎（ＡＰＰ）、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌（ＨＰ）、多殺性巴氏桿菌（ＰＭ）、豬支原體肺炎（ＭＨ）、弓形體、附紅細(xì)胞體、豬霍亂沙門氏菌（ＳＣ）等，無繼發(fā)感染的病豬死亡率較低。

２０１０年５月以來，在宜昌市先后對(duì)８起普通型豬藍(lán)耳病疫情進(jìn)行了治療，共治療１ ４９６頭，治愈１ ３１９頭，取得了很好的效果。現(xiàn)將治療情況總結(jié)如下。

１材料與方法

１．１藍(lán)耳病的診斷

２０１０年５月以來，先后對(duì)宜昌市出現(xiàn)有豬藍(lán)耳病臨床癥狀的８例病豬血樣進(jìn)行了ＰＣＲ診斷。

１．１．１試驗(yàn)材料

豬全血：疑似癥狀豬全血共２４份（每例３份）。

引物：參照方六榮［２］、李彬等［３］的方法設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物。上游引物（Ｎｓｐ２Ｆ）序列為５′－ＴＧＧＧＣＧＡＣＡＡＴＧＴＣＣＣ－３′，下游引物（Ｎｓｐ２Ｒ）序列為５′－ＧＣＴＧＡＧＴＡＴＴＴＴＧＧＧＣＧ－３′。ＰＲＲＳＶ變異株和經(jīng)典毒株預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度分別為４１８ｂｐ和５０８ｂｐ。

主要試劑：ＲＮＡ提取試劑盒購自美國(guó)ＯＭＥＧＡ公司；ＲＴ－ＰＣＲ試劑盒購自大連寶生物公司；低分子量蛋白質(zhì)Ｍａｒｋｅｒ、瓊脂糖購自ＯＸＯＩＤ公司。

１．１．２試驗(yàn)方法

病毒總ＲＮＡ的提取：采集的全血分離后收集上清，ＲＮＡ病毒的抽提按試劑盒說明書進(jìn)行。

反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：按ＴａＫａＲａ ＲＮＡ ＰＣＲ Ｋｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ ３．０說明書進(jìn)行。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物直接用于ＰＣＲ反應(yīng)模板或－２０℃保存。

ＰＣＲ反應(yīng)：反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物１０ μＬ，５×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ １０．０ μＬ，上下游引物各０．５ μＬ（２０ μｍｏｌ／Ｌ），ＴａＫａＲａ Ｅｘ Ｔａｑ ＨＳ ０．２５ μＬ（５ Ｕ／μＬ），用滅菌雙蒸水補(bǔ)充總體積至５０ μＬ。ＰＣＲ 反應(yīng)條件為：９４ ℃變性５ ｍｉｎ；進(jìn)入ＰＣＲ循環(huán)，９４ ℃ １ ｍｉｎ，５７ ℃ １ ｍｉｎ，７２ ℃ １ ｍｉｎ，３５次循環(huán)后，７２ ℃延伸１０ ｍｉｎ，４ ℃保存。

ＰＣＲ產(chǎn)物電泳檢測(cè)：ＰＣＲ產(chǎn)物在１％瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，當(dāng)溴酚藍(lán)電泳至適當(dāng)位置，在長(zhǎng)波紫外燈／凝膠成像系統(tǒng)下觀察或拍照。

１．２分組治療

１．２．１疫苗豬藍(lán)耳病弱毒疫苗為武漢中博生物股份有限公司生產(chǎn)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（ＪＸＡ１－Ｒ株）。

１．２．２治療方法對(duì)確認(rèn)發(fā)生普通型豬藍(lán)耳病的豬每頭注射豬藍(lán)耳病弱毒疫苗1次（１０頭份）。同時(shí)每天注射林可霉素防止繼發(fā)感染，飲水中添加口服補(bǔ)液鹽，以提供能量。

１．２．３分組治療對(duì)４例（８９７頭）５０ ｋｇ以上確診為普通型豬藍(lán)耳病病豬按以上方法治療，１０ ｄ后觀察結(jié)果；對(duì)３例（５３５頭）３０～５０ ｋｇ確診為普通型豬藍(lán)耳病病豬按以上方法治療，１０ ｄ后觀察結(jié)果；對(duì)１例（６４頭）３０ ｋｇ以下確診為普通型豬藍(lán)耳病病豬按以上方法治療，１０ ｄ后觀察結(jié)果；對(duì)照組１６頭（每病例２頭）只注射林可霉素和飲水中添加口服補(bǔ)液鹽，1周后觀察結(jié)果。

１．３其他防控措施

１．３．１無害化處理病死豬尸體嚴(yán)格要求各養(yǎng)殖場(chǎng)及時(shí)采用深埋、焚燒等無害化方法處理死胎、死豬，嚴(yán)格控制病豬的流動(dòng)，防止疫情擴(kuò)散蔓延。

１．３．２嚴(yán)格消毒加強(qiáng)環(huán)境消毒，實(shí)行帶體消毒，保持飼養(yǎng)用具的清潔，對(duì)污染的所有地方進(jìn)行嚴(yán)格消毒。隔離病豬，封鎖疫區(qū)，確保疫情不外傳。

１．３．３加強(qiáng)飼養(yǎng)管理加強(qiáng)飼養(yǎng)環(huán)境管理，降低飼養(yǎng)密度，加強(qiáng)通風(fēng)、防暑降溫，改善豬舍環(huán)境。調(diào)整日糧，對(duì)病豬飼喂高能量飼料及青綠飼料，提高飼料中維生素及礦物質(zhì)含量。

１．３．４加強(qiáng)對(duì)其他病的診治藍(lán)耳疫情中常混有豬瘟等其他疫病，因此必須加強(qiáng)對(duì)其他疫病的免疫工作，減少混合感染，減少死亡。

２結(jié)果與分析

２．１ＰＣＲ反應(yīng)結(jié)果

提取總ＲＮＡ、ＲＴ－ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)１％瓊脂糖凝膠電泳，陽性對(duì)照變異毒株獲得大小為４１８ ｂｐ左右的片段，經(jīng)典毒株獲得大小為５０８ ｂｐ左右的片段，與預(yù)期片段大小一致。發(fā)病豬血樣片段都在５００ ｂｐ以上。初步診斷發(fā)病病例為普通型豬藍(lán)耳病。

２．２分組治療結(jié)果

治療１０ｄ后，病豬情況基本穩(wěn)定。統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表１。由表１可見，利用豬藍(lán)耳病弱毒疫苗治療３０ ｋｇ以上的發(fā)生普通型豬藍(lán)耳病的病豬，治愈率可達(dá)９０．２％。對(duì)３０ ｋｇ以下的豬，治愈率低于５０％，建議不用此法。

３小結(jié)與討論

利用豬藍(lán)耳病弱毒疫苗治療３０ ｋｇ以上的發(fā)生普通型豬藍(lán)耳病的病豬，取得了很好的效果，治愈率達(dá)９０．２％。

豬藍(lán)耳病疫苗的最大優(yōu)點(diǎn)就是對(duì)豬藍(lán)耳病野毒有干擾作用，注射后幾個(gè)小時(shí)就會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素（ＩＦＮ），尤其是大劑量注射豬藍(lán)耳病疫苗的時(shí)候產(chǎn)生得更快。干擾野毒病毒的復(fù)制，機(jī)體本身產(chǎn)生的干擾素是源源不斷的，而且是越來越多，４ｄ達(dá)到高峰，可維持十幾天之久。大劑量的豬藍(lán)耳病疫苗能迅速導(dǎo)致ＩＦＮ的產(chǎn)生和釋放，同時(shí)被病毒感染的細(xì)胞死亡、崩解，ＩＦＮ也隨之釋放。ＩＦＮ分子向附近擴(kuò)散，并隨血液循環(huán)至全身。ＩＦＮ可與周圍細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，活化細(xì)胞膜腺苷酸環(huán)化酶，促使ｃＡＭＰ形成。ｃＡＭＰ的增多可激活細(xì)胞內(nèi)抗病毒作用機(jī)制，產(chǎn)生一組抗病毒物質(zhì)，迅速使病毒滅亡。也有資料報(bào)道是干擾素與補(bǔ)體共同作用的結(jié)果，其作用機(jī)理值得進(jìn)一步探討。

注射大劑量豬藍(lán)耳病弱毒疫苗有強(qiáng)制激活機(jī)體免疫系統(tǒng)的作用，可以導(dǎo)致機(jī)體迅速產(chǎn)生抗體，殺滅病毒。關(guān)于大劑量豬藍(lán)耳病疫苗“治”豬藍(lán)耳病，其本身意義就是緊急接種。

本治療作用必須控制好混合感染，特別是控制好呼吸道的細(xì)菌感染，否則會(huì)引起大面積死亡。

參考文獻(xiàn)：

［１］斯特勞Ｂ Ｅ． 豬病學(xué)［Ｍ］． 趙德明，張仲秋，沈建忠，譯． 第八版． 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，２００３． ２０５－２３８．

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