根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的‘魏可’葡萄遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化

摘要： 以‘魏可’葡萄離體葉片為外植體，利用植物表達(dá)載體上含有卡那霉素抗性基因（nptⅡ）的根癌農(nóng)桿菌LBA4404 （pCAMBIA2301）對(duì)影響‘魏可’葡萄遺傳轉(zhuǎn)化效率的因素進(jìn)行系統(tǒng)研究。結(jié)果表明，最佳農(nóng)桿菌介導(dǎo)‘魏可’葡萄遺傳轉(zhuǎn)化體系為農(nóng)桿菌侵染4 min，共培養(yǎng)3 d，卡那霉素質(zhì)量濃度5 mg·L-1，羧芐青霉素質(zhì)量濃度200 mg·L-1。采用此體系對(duì)‘魏可’葡萄進(jìn)行轉(zhuǎn)化，共獲得9株抗性苗。利用GUS組織化學(xué)染色、PCR擴(kuò)增的方法檢測(cè)，結(jié)果表明，有4株通過(guò)了PCR檢測(cè)，1株通過(guò)了RT-PCR檢測(cè)，初步證明nptⅡ基因已經(jīng)整合進(jìn)入‘魏可’葡萄基因組中。將PCR產(chǎn)物回收，經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證nptⅡ基因完全整合進(jìn)入‘魏可’葡萄基因組中。對(duì)CK及經(jīng)PCR檢測(cè)呈陽(yáng)性的株系進(jìn)行卡那霉素抗性鑒定，發(fā)現(xiàn)PCR呈陽(yáng)性的株系均比CK抗Kan的能力明顯增強(qiáng)。