蘋果葉片總蛋白提取及其雙向電泳分析

摘要: 蛋白質(zhì)提取方法和電泳條件的建立是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中雙向電泳分析的關(guān)鍵。通過比較不同提取方法，包括酚/SDS 抽提、TCA-丙酮沉淀法、甲醇/醋酸銨沉淀法以及改良HB-酚抽提方法。此外，還優(yōu)化了樣品上樣量、等電聚焦程序設(shè)置等條件。從所得2-D圖譜分離效果來看，改良HB-酚抽提方法所得蛋白點(diǎn)數(shù)最多，2-D圖譜背景清晰、分離效果好，明顯優(yōu)于其他3種方法。300 μg上樣量可作為蘋果葉片總蛋白2-DE分析的理想的上樣量，同時優(yōu)化了等電聚焦程序，最終得到的2-D圖譜分離效果較為理想。該研究的開展也為蘋果葉片蛋白質(zhì)組學(xué)后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。