GLP屏障環境動物實驗室SD大鼠標準生物學指標的建立

王麗芳 代寶強 譚余慶 劉 婷 王 洋

(中國中醫科學院中藥研究所，北京 100029)

大鼠是實驗室廣泛使用的模型動物，在毒理學，藥物，行為學，營養學和代謝疾病等多個研究中都有較為廣泛的應用[1-2]，大鼠可作為許多疾病模型，如自發性高血壓、抑郁癥、子宮內膜炎、過敏性哮喘、神經性疼痛、糖尿病、大鼠高脂血癥和房顫等[3-10]，馬秀蘭等[11]探討了成年大鼠臟器系數，陳長勛等[12]測定了正常SD大鼠的部分生物數據，孫于蘭等[13]探討了喂養SD大鼠30 d的食物利用率及臟器系數的正常值，由于樣本數較小，環境不一，且統計數據較少，因此具有局限性，但是由于試驗過程中大鼠的遺傳、周齡、性別、個體差異、喂養環境、設施、測量儀器、來源等多項因素的差異，對一些應激產生的反映也各不相同，大鼠的組織、臟器等的生長發育、運行狀態也不盡相同，對大鼠的血液及生理生化指標也會產生影響[14-18]，目前GLP屏障環境動物實驗室正常SD大鼠的標準生物學指標尚未十分明確。本文統計分析GLP屏障環境動物實驗室10批次長期毒性試驗的正常對照組SD大鼠飼喂過程中的日常攝食量、體質量增長、臟器指數、血液指標及生化指標，建立正常SD大鼠的標準生物學指標數據，為以后SD大鼠長期毒性試驗提供全面、可靠的正常值數據參照標準，和以后GLP屏障環境動物實驗室的大鼠試驗提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及飼養管理

實驗在中國中醫科學院中藥安全評價中心屏障環境動物實驗室進行，選取SPF級，體質量120～140 g健康SD大鼠，飼養在中國中醫科學院中藥研究所屏障環境動物實驗室，使用許可證SYXK(京)2013-0035，各組均正常給予飼料及飲水，飼料經60Co照射、飲水經反滲透凈化處理、墊料均采用125 ℃高壓滅菌。雌2 000只，雄2 000只，分成10批次，每批次雌雄各200只，每組10只，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號SCXK(京)2012-0001，飼料為大鼠維持飼料，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。分籠飼養，每5只一籠，雌雄分開，室溫20 ℃左右，雄性大鼠體質量達到200 g時再次分籠。

1.2 大鼠一般情況與行為學觀察及攝食量、體質量檢測

10批次作為長期毒性試驗的正常對照組SD大鼠適應性飼喂一周后，再飼養7個月，包括6個月測試時期和1個月恢復期，每天觀察大鼠的一般情況與行為學，包括精神狀態，皮毛色澤，運動，對外界的反應是否靈敏，有無多飲多食，有無腹瀉、便秘交替。每周精確稱取一次大鼠的體質量與攝食量，并做好記錄。

1.3 大鼠臟器指數、血液指標及血清生化指標檢測

分別飼喂大鼠3、6個月后按照48 mg/kg體質量注射0.8%戊巴比妥鈉麻醉各組大鼠，解剖檢查及計算大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、腦、睪丸/卵巢、附睪/子宮系數等臟器系數。相對臟器系數計算公式為：臟器系數=臟器質量(g)/體質量(g)×100%。

分別于3、6、7個月后采用腹主動脈采血，使用全自動生化分析儀(東芝，40FR)分析各組大鼠中血液指標，包括RBC、HCT、MCV、RDW、HGB、MCH、MCHC、PLT、PCT、MPV、PDW、WBC、LYM%、NEUT%、EOS%、BASO%、MONO%、RET、PT、APTT。另取靜脈血，3 000 g離心15 min分離血清，測量血生化指標，包括：TP(g/L)、ALB(g/L)、TBIL(μmol/L)、AST(U/L)、ALT(U/L)、ALP(U/L)、GGT(U/L)、CK(U/L)、CRE(μmol/L)、UREA(mmol/L)、GLU(mmol/L)、CHO(mmol/L)、TG(mmol/L)、A/G(mmol/L)、GLB(mmol/L)和O/P(mmol/L)。

1.4 統計方法

2 結果

2.1 一般行為學觀察、體質量及攝食量觀察

通過觀察各組大鼠的一般行為學狀態正常：精神狀態良好，皮毛色澤潔白，有光澤，運動狀態良好，對外界的反應靈敏，無多飲多食，無腹瀉、便秘交替現象。同性別大鼠攝食量無顯著差異，體質量呈增長迅速，雄性比雌性增長速度快，攝食量也多，說明雄性SD大鼠比雌性生長發育速度快(表1～4)。

表1 10批正常SD大鼠(♂)7個月中的攝食量變化Table 1 Dietary change of ten batches of normal SD rats(♂)during 7

表2 10批正常SD大鼠(♀)7個月中攝食量變化Table 2 Dietary change of ten batches of normal SD rats(♀)during 7

表3 10批正常SD大鼠(♂)7個月中體質量增長Table 3 Weight gain of ten batches of normal SD rats(♂) during 7

表4 10批正常大鼠(♀)7個月中體質量增長Table 4 Weight gain of ten batches of normal SD rats(♀) during 7

2.2 大鼠臟器指數、血液指標及血清生化指標檢測

第3個月、6個月和7個月試驗周期結束檢測臟器指數、生化指標、血液指標(表5～13)。數據表明雄性大鼠的臟器指數逐漸下降，雌性臟器指數無明顯變化，表明大鼠的臟器質量隨著體質量逐漸增加，各個時間段大鼠的血液和血清生化指標無明顯差異。

表5 10批正常大鼠6個月中第3個月臟器系數Table 5 Organ coefficients at 3 months of ten batches of normal SD rats during 6

表6 10批正常大鼠6個月驗中第6個月臟器系數Table 6 Organ coefficients at 6 months of ten batches of normal SD rats during 6

表7 10批正常大鼠(♂)恢復期臟器系數Table 7 Organ coefficients at recovery phase of ten batches of normal SD

表8 10批正常SD大鼠6個月中第3個月的血液指標Table 8 Blood indicators at 3 months of ten batches of normal SD rats during 6

表9 10批正常SD大鼠6個月中第6個月的血液指標Table 9 Blood indicators at 6 months of ten batches of normal SD rats during 6

表10 10批正常SD大鼠6個月中恢復期的血液指標Table 10 Blood indicators at recovery phase of ten batches of normal SD rats during 6

表11 10批正常SD大鼠6個月中第3個月的生化指標Table 11 Biochemical indices at 3 month of ten batches of normal SD rats during 6

表12 10批正常SD大鼠6個月中第6個月的生化指標Table 12 Biochemical indices at 6 month of ten batches of normal SD rats during 6

表13 10批正常SD大鼠6個月中恢復期的生化指標Table 13 Biochemical indices at recovery phase of ten batches of normal SD rats during 6

3 討論

本次試驗統計結果的特點為：樣本量大，誤差小；實驗地點固定：全部在中國中醫科學院GLP中心屏障動物實驗室進行；飼喂條件固定：SPF級，給予充足飼料及飲水；品系、來源相同：同為SD大鼠，且雌雄分開；周齡固定；初始體質量接近；各項指標均標準化；具有一定的代表性，能夠為以后在中國中醫科學院GLP中心屏障動物實驗室進行的SD大鼠長期毒性試驗提供良好的數據支持，結果表明SD大鼠的雄性生長發育較快，飼料利用率較高，臟器質量隨著體質量的增長而逐漸增加，血液指標和生化指標在各個時期無明顯變化。能夠作為大鼠長期毒性試驗的標準生物學指標，為以后中國中醫科學院GLP中心屏障動物實驗室SD大鼠的長期毒性試驗及飼養提供參考標準。