Livin蛋白在膀胱移行細胞癌組織芯片中的表達及臨床意義

[摘要] 目的 探討Livin蛋白在膀胱移行細胞癌（BTCC）組織芯片中的表達及臨床意義。方法 免疫組化S-P法檢測70例BTCC組織芯片標本中Livin蛋白的表達，并探討其與患者的臨床病理特征的關系。另選擇30例正常的膀胱黏膜組織作對照。結果 BTCC組織中Livin蛋白的陽性率明顯高于正常膀胱黏膜組織（χ2=36.51，P＜0.01）。BTCC組織中Livin蛋白的表達與腫瘤數量、轉移與否、病理分級及臨床分期無明顯關系（P＞0.05），與腫瘤的初發和復發密切相關（P＜0.05）。結論 Livin基因參與BTCC的發生、發展和復發過程，可作為BTCC早期診斷和復發風險評估的一項重要指標，有望成為BTCC基因診斷和治療的新靶點。

[關鍵詞] 膀胱移行細胞癌；組織芯片；免疫組化；Livin；復發

[中圖分類號] R737.14 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）31-88-02

The Expression of Livin Protein in Bladder Transitional Cell Carcinoma Tissue Microarray and Its Clinical Significance

XIE Wenjun LI Xiaohong FU Tianhong

Department of Pathology，Integrated Chinese and Western Medicine Hospital of Zhejiang Province，Hangzhou 310003，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of Livin protein in bladder transitional cell carcinoma（BTCC） tissue microarray and its clinical significance. Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of Livin protein in 70 cases of BTCC tissue microarray samples and to explore its relationship with clinical pathological features. Another 30 cases of normal bladder mucosal tissues were chosen as the control group. Results The expression of Livin protein in BTCC tissues was significantly higher than that in the normal bladder mucosa（χ2=36.51，P＜0.01）. There was no significant relationship between the expression of Livin protein in BTCC tissues and the number of tumors，metastasis or not， pathological grade and clinical stage（P＞0.05），while it had a close relation with the initiation and recurrence of tumor（P＜0.05）. Conclusion Livin gene gets involved in the occurrence，development and relapse of BTCC. It can be taken as an important indicator for early diagnosis and recurrence risk assessment of BTCC，and can be expected to become a new gene target for diagnosis and treatment of BTCC.

[Key words] Bladder transitional cell carcinoma；Tissue microarray；Immunohistochemistry；Livin；Recurrence

凋亡抑制是腫瘤發生、發展的重要作用機制，凋亡途徑的調節紊亂及相關基因的表達失調，都會導致腫瘤的發生與發展，且幾乎所有的化療藥物都誘導細胞凋亡來殺死腫瘤細胞。Livin是近年來新發現的一種凋亡抑制蛋白，特異性表達于人的胚胎組織以及大多數人類實體瘤組織，這種異常的表達與腫瘤的發生、發展、轉移甚至預后相關[1]。本研究采用免疫組化S-P法檢測Livin蛋白在膀胱移行細胞癌（BTCC）組織芯片中的表達，并探討其與患者的臨床病理特征的關系。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選擇我院泌尿科2005年1月～2011年8月術后病理證實的BTCC手術標本70例。其中男41例，女29例；年齡37～87歲，平均（54.5±6.7）歲；所有患者術前均未行放、化療。另選擇30例正常的膀胱黏膜標本組織作對照。

1.2 組織芯片制備

用組織陳列儀在模板蠟塊（2mm×4mm）打孔，直徑2mm，根據病理切片HE染色鏡下所見，取典型癌組織區2mm的柱狀組織，填入已打孔模板蠟塊中并編號，壓平后行再次包埋成的組織芯片蠟塊。組織芯片蠟塊5μm厚連續切片，進行免疫組化染色。

1.3 免疫組化染色

采用免疫組化S-P法，嚴格按試劑盒說明書進行實驗操作。用已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。試劑兔抗人Livin多克隆抗體和免疫組化S-P試劑盒均購自北京中山生物技術有限公司。

1.4 結果判定[2]

以細胞漿內出現棕黃（褐）色顆粒為陽性細胞。根據細胞著色強度無著色、淺黃色、棕黃色和棕褐色分別計0～3分，光鏡下隨機選擇5個高倍視野，根據陽性細胞的平均百分率進行計分。0%計0分，1%～10%計1分，11%～40%計2分，51%～70%計3分，＞70%計4分。根據細胞著色強度和陽性細胞計分的乘積為最后得分，其中0～1分為（-），＞1分為（+）。

1.5 統計學處理

應用SPSS13.0統計學分析軟件，采用χ2檢驗。

2 結果

70例BTCC組織中Livin蛋白陽性表達為46例（65.7%）；30例正常的膀胱黏膜組織Livin蛋白表達均陰性。BTCC組織中Livin蛋白的陽性率明顯高于正常膀胱黏膜組織（χ2=36.51，P＜0.01）。BTCC組織中Livin蛋白的表達與腫瘤數量、轉移與否、病理分級及臨床分期無明顯關系（P＞0.05），與腫瘤的初發和復發密切相關（P＜0.05）。

3 討論

腫瘤病因與發病機制是一個有多基因共同參與、相互作用的復雜病理過程。Livin基因是新近發現的人類IAP蛋白家族的新成員，在大多數正常的成人組織中不表達，只在人體的胎盤和胚胎組織中高表達。近年來研究發現Livin基因可以通過抑制Caspase-3 及Caspase-9的活性而抑制細胞凋亡，與腫瘤的發生、發展、復發和預后密切相關[3，4]。

近年來國內外的研究發現Livin基因與膀胱癌的發生、發展關系密切。王曉慶等[5]研究發現Livin蛋白在膀胱移行細胞癌組織中高表達，Livin的表達與行癌細胞的病理分級、臨床分期、是否轉移、腫瘤數量無明顯關系，與腫瘤復發關系密切，可作為膀胱移行細胞癌早期診斷和術后復發監測的一項重要指標。李顯文等[6]研究發現Livin基因與BTCC的發生、發展和復發有關，可作為BTCC早期診斷、術后復發風險評估的重要指標。本研究結果發現BTCC組織中Livin蛋白的陽性率明顯高于正常膀胱黏膜組織（P＜0.01），表明Livin基因與BTCC的發生、發展密切相關，可作為BTCC早期診斷的分子標志物，推測Livin可能通過抑制Caspase-3及Caspase-9的活性而抑制膀胱癌細胞凋亡，從而使已轉化的膀胱癌細胞進行異常有絲分裂，導致膀胱上皮細胞發生永生化或發生癌變[7]。同時本研究發現BTCC組織中Livin蛋白的表達與腫瘤數量、轉移與否、病理分級及臨床分期無明顯關系（P＞0.05），而與腫瘤的初發和復發密切相關（P＜0.05）。表明Livin基因的表達可作為監測BTCC早期復發和評估術后復發風險的一個重要指標。

總之，Livin基因參與BTCC的發生、發展和復發過程，可作為BTCC早期診斷和復發風險評估的一項重要指標，有望成為BTCC基因診斷和治療的新靶點。為探討膀胱癌的病因、發生機制和評估預后提供有效的參考指標。

[參考文獻]

[1] Kasof GM，Gomes BC. Livin，a novel inhibitor of apopt osis prot ein family member[J]. J Biol Chem，2001，276（5）：3238-3246.

[2] 張旭宏，張貞玲，楊笑泉. 凋亡抑制因子Livin和Survivin在大腸癌組織中的表達和意義[J]. 現代腫瘤醫學，2008，16（9）：1571-1574.

[3] Vucic D，Stennicke HR，Pisabarro MT，et al. ML-IAP， a novel inhibitor of apoptosis that is preferentially expressed in human melanomas[J]. Curr Biol，2000，10（21）：1359-1366.

[4] Yagihash iA，A sanuma K，Kobayash iD，et al. Detection of autoantibodies to Livin and Surviving in Sera from lung cancer patients[J]. Lung Cancer，2005，48（2）：217-221.

[5] 王曉慶，盧績，陳岐輝，等. Livin基因在淺表性膀胱癌中的表達及其與腫瘤復發的關系[J]. 中華腔鏡泌尿外科雜志（電子版），2010，4（2）：148-151.

[6] 李顯文，楊羅艷，王紅珊，等. 凋亡抑制蛋白Livin在膀胱移行細胞癌中的表達及臨床意義[J]. 臨床泌尿外科雜志，2006，21（3）：216-218，220.

[7] Gazzaniga P，Gradilone A，Giuliani L，et al. Expression and prognostic significance of Livin，Survivin and other apoptosis-related genes in the progression o f superficial bladder cancer[J]. Ann Oncol，2003，14（1）：85-90.

（收稿日期：2011-09-02）