氯胺酮對顱腦損傷神經細胞凋亡的影響

摘 要 目的：旨在探討氯胺酮在治療顱腦損傷方面可能的作用機理和應用前景，為臨床上治療顱腦損傷提供用藥基礎。方法：取大腦受傷部位，檢測腦組織的凋亡細胞。結果：氯胺酮治療組與同時間段的模型對比較差異有顯著性（P＜0.05）。結論：氯胺酮減少凋亡的發生，從而減輕繼發性損傷，對腦損傷具有一定的保護作用。

關鍵詞 氯胺酮 凋亡細胞 顱腦損傷

材料與方法

實驗分組：SD大鼠70只，適應性喂養3天后，隨機分為7組，每組9只。A組（假手術對照組）；B組（顱腦損傷模型對照組，簡稱損傷對照組），再根據傷后時間段分為傷后6、24、72小時組；C組（顱腦損傷+氯胺酮干預組，簡稱氯胺酮治療組），再根據傷后時間段分為傷后6、24、72小時組。

造模：實驗采用改進的Feeney自由落體硬膜脊外撞擊方法。氯胺酮治療組在打擊致傷后1小時腹腔注射氯胺酮120mg/kg，在設定的時間段取材。假手術組僅切開頭皮和顱骨開窗，不用打擊錘致腦損傷，術后6小時處死。

腦組織取材：取受傷部位及周圍腦組織置于4%多聚甲醛中固定24～36小時，常規脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋、連續切片（片厚5μm），一部分切片進行HE染色，鏡檢、封片，普通光鏡下觀察；用來觀察細胞凋亡（TUNNEL法）。

腦細胞凋亡檢測：應用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法（terminal-deoxynucleotidyl transferse mediated nick end labeling，TUNNEL）檢測腦組織的凋亡細胞。

統計學方法：采用SPSS11.5統計軟件進行統計學處理。實驗數據計數資料均以X±S表示，實驗數據經方差齊性檢驗和t檢驗，組間比較采用單因素方差分析和方差齊性檢驗，方差齊時采用t檢驗，方差不齊時采用t’檢驗，P＜0.05為有統計學意義。

結 果

氯胺酮對顱腦損傷大鼠神經細胞凋亡的影響：在未遭受打擊傷的假手術對照組中，大鼠腦組織中亦有少量TUNNEL陽性細胞表達，顱腦損傷后，在不同時間段的6、24、72小時，Tunnel凋亡細胞率緩慢增加，與假手術對照組比較，差異明顯（P＜0.05）。用氯胺酮治療24小時組、72小時組，能夠使凋亡細胞數量減少，與同時間段的模型對照組比較，差異明顯（P＜0.05），氯胺酮治療6小時組與損傷對照6小時組差異不明顯（P＞0.05）。見表1。

表1 氯胺酮對顱腦損傷大鼠神經細胞凋亡的影響

注：與假手術對照組比較，*P＜0.05；與損傷對照組同時段比較，【sup】△【/sup】P＜0.05

討 論

氯胺酮顱腦損傷大鼠神經細胞細胞凋亡：細胞凋亡指細胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，結束自己生命的過程，最后細胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體而被其他細胞吞噬，它是機體維持自身穩定的一種基本生理機制。傳統觀念認為顱腦損傷后某些內源性損害因子能直接損害腦細胞，破壞血腦屏障，誘發和加重腦水腫。本實驗研究結果發現腦損傷后TUNEL染色陽性細胞數持續增加，用氯胺酮治療，6小時時效果不明顯（與損傷對照組比較，P＞0.05），24、72小時時，氯胺酮能明顯降低腦損傷后TUNEL染色陽性細胞率（與損傷對照組比較，P＜0.05）。提示氯胺酮可通過調節凋亡蛋白對神經系統起保護作用。

氯胺酮顱腦損傷大鼠腦部病理組織學的影響：組織病理學觀察，腦損傷后出現明顯的腦水腫，血管周圍和細胞周圍充滿液體，組織呈篩網狀。損傷對照24小時組與72小時組較為明顯，細胞出現較多壞死，并有一些炎性細胞浸潤。損傷對照6小時組和氯胺酮治療6小時與假手術組比較，結構上沒有發生非常明顯改變，除了一些輕度水腫外神經元基本正常，這可能是時間較短，腦組織繼發性損害較輕。氯胺酮治療24小時組和72小時組分別與損傷對照24小時組和72小時組比較，癥狀明顯減輕，提示氯胺酮對顱腦損傷大鼠腦組織的病理改變有一定的保護作用。

本研究表明，氯胺酮可通過調節凋亡蛋白對神經系統起保護作用；氯胺酮對腦損傷的病理學改變有一定的保護作用。

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