淋巴結組織制片中常見問題與對策

病理常規制片技術是病理診斷的基礎。切片質量是指導醫師作出準確診斷的重要保證。在制片時，會遇到許多問題，如切片時出現裂痕、皺褶、破碎；染色過深或過淺等。特別是淋巴結組織，由于淋巴結組織細胞成分豐富，間質少，外周有一層較致密的結締組織被膜【sup】［1］【/sup】，這樣的結構特征決定了淋巴組織的常規制片必須遵循“薄切、淡染”的原則。筆者通過摸索和實踐，針對淋巴結組織制片時出現這些的常見問題的原因加以分析，總結出了一些經驗和體會。

首先對組織切片產生裂隙的原因經行實驗分析

材料：本院手術切除的淋巴結樣本30例，取材厚度均為0.2～0.3cm，厚薄均勻，采用ZT-12P全自動脫水機進行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋機包埋。采用手工染色，主要試劑：Baso蘇木素-伊紅染液、0.5%鹽酸乙醇分化液。

方法：將30例樣本每個樣本分別制成兩個蠟塊，然后均分為A、B兩組；A組30例蠟塊常規置于冷臺冷卻后，按報道【sup】［2］【/sup】直接切片厚度為3μm。B組30例蠟塊置于冷臺冷卻后，將蠟塊修到最大面時用拇指捂5～6秒再切片，厚度為3μm。A、B兩組切片展片時水溫均控制在40℃左右即可，過高小皺褶打不開；過低則切片不平坦、貼片不牢易脫片；最后同時染色。

結果：B組切片效果較好、片子完整、結構完好，鏡下組織無裂隙、且連片。

染色時間的實驗分析

將B組每個蠟塊分別切3張，然后均分為①②③3組用新鮮蘇木素分別進行5、8、10分鐘染色，用0.5%鹽酸乙醇分化15秒。伊紅染色30秒。常規脫水、透明、封固。

蘇木素染色5分鐘的①組染色效果最好，顏色鮮艷，均勻，胞核、胞質清晰，這與報道的一致【sup】［3］【/sup】。

討 論

在淋巴組織疾病的研究中，石蠟切片，HE染色仍是臨床病理診斷中最為實用、簡便的方法。為了減少或糾正組織切片的裂隙、和解決染色效果不佳的問題，提如下建議。

組織處理時，標本取材0.2～0.3cm為宜，厚薄要均勻；最好選用4%中性緩沖甲醛液作為常規組織固定液，并且適當延長固定時間。

切片時，擰固刀座，夾緊刀片，防止因機械部分松動而出現切片裂隙，蠟塊冷凍后不易立即切片，應將蠟塊修到最大面后用拇指捂4～5秒后切片。

裱片時水溫以40℃左右為宜，以免因水溫過高，造成切片擴散，形成人為裂隙。

染色時間比常規HE染色、蘇木素染色的時間約縮短了一半。大約為5分鐘。此時制出的淋巴組織切片平整，結構完好，鏡下觀察裂隙明顯減少或消除，組織細胞核漿對比明顯，色彩鮮艷，在高倍鏡下可以清晰地觀察核膜、核仁和染色質等細微結構。這樣能夠獲得更優良的HE染色切片，從而為臨床病理診斷醫師做出準確的診斷提供重要保障。

參考文獻

1 王德田，羅玉鳳，曹金伶，等.如何制作精良的淋巴結組織切片［J］.診斷病理學雜志，2005，12（4）:314.

2 康源，劉衛平.淋巴結常規制片技術體會［J］.臨床與實驗病理學雜志，2008，24（2）:235-236.

3 姜冰，楊軍，彭長纓.淋巴結片子染色中蘇木精染色時間的探討［J］.診斷病理學雜志，2010，17（3）:238.