PCR擴增過程中污染的預防與對策

PCR技術是聚合酶鏈反應，該技術可將極微量的靶DNA特異的擴增上百萬倍，從而大大提高對DNA分子的分析和檢測能力。PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，操作復雜，所以在其操作過程中常有污染發生，即使極少量的污染也會造成假陽性，稍有差錯就會出現假陰性。

本文討論PCR擴增過程中污染的預防與對策。操作者必須熟練掌握技術，嚴格按操作規程操作，防止假陽性、假陰性結果的產生。

污染的原因調查

標本間的污染；采集標本的容器被污染；提取過程中加樣槍污染；試劑的污染；提取過程中氣溶膠的污染等。

防止污染的預防與對策

實驗人員要熟練掌握PCR操作技術，嚴格規范操作程序，操作過程中加樣槍的使用，手套、槍頭、離心管應一次性使用。嚴格按試劑生產廠家提供的程序進行操作。

嚴把質量關，在操作當中總結，馬上到期的試劑或剛過期試劑對PCR結果影響很大。

設立陰性質控和陽性質控：陰性質控以監測試劑是否污染，陽性質控以監測PCR反應是否成功，產物大小是否合本理論要求。

實驗室設置及設備的規范化

實驗室劃分為4區：試劑準備區、，標本準備區、PCR循環擴增區、檢測區。擴增儀的設置要符合要求，取樣器刻度準確，減少PCR循環次數，只要PCR產物過剩檢測水。

近年來PCR技術已普及到各基層醫院，廣泛地用于感染性病原體，如HBV HCV的臨床檢測，由于缺乏對核酸擴增檢驗技術完整的了解以及缺乏質量保證措施，導致部分實驗室結果出現假陽性、假陰性的出現，所以操作者必須熟練掌握技術，嚴格按操作規程操作，防止假陽性，假陰性結果的產生。