Caspase-3在肥胖患者乳腺癌組織中的表達與細胞凋亡的關系
2011-12-31 00:00:00郭銀謀高建芝
中國社區醫師·醫學專業 2011年32期
乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤，肥胖癥亦被認為是乳腺癌的一個危險因素。Caspase-3是最重要的效應性蛋白裂解酶，在乳腺癌、神經纖維瘤等腫瘤細胞中均有Caspase-3過表達。激活的Caspase-3能裂解一定量的底物，包括抗凋亡成分及結構或看家蛋白，并誘導細胞凋亡。基于上述研究進展，本研究采用免疫組化和TUNEL方法，檢測肥胖和正常體重患者乳腺癌組織中Caspase-3蛋白表達和細胞凋亡，研究其與肥胖乳腺癌的臨床特征及預后的相關性。
資料與方法
一般資料：所有研究對象均為女性，選擇60例肥胖乳腺癌患者，60例正常體重乳腺癌患者，術前均未化療，根據國際抗癌協會建議以T(原發癌)、N(局部淋巴結)、M(遠處轉移)對乳腺癌進行分期，所有病例術前未行任何治療，術后均經病理檢查證實診斷，全部病例均經細胞學或組織病理學證實。肥胖癥的診斷符合WHO為亞洲成年人制定的標準，即體重指數≥25kg/m2。各組每例乳腺癌組織標本取材后4%多聚甲醛固定。
身高、體重測量：固定專人，測量身高(m)和體重(kg)。測得身高和體重數據精確至01cm和01kg，體重指數(BMI)=體重(kg)/身高(m2)。
試劑與儀器：兔抗Caspase-8和Caspase-3單克隆抗體、生物素標記二抗和TUNEL凋亡試劑盒均購于北京中杉生物公司。
TUNEL檢測細胞凋亡：采用細胞凋亡試劑盒(北京中杉生物工程有限公司的產品)，按照試劑盒說明書操作，免疫組化ABC染色法，DAB顯色，蘇木素輕度復染、脫水、透明、封片。細胞核中出現棕黃色顆粒為原位末端標記陽性細胞，即凋亡細胞。采用顯微鏡計數法(10目鏡×40物鏡)，觀察每個高倍視野的凋亡細胞數，每只動物隨機取3張切片，每張切片隨機觀察6個視野。細胞凋亡指數的測定(apoptotic index AⅠ)：每張切片選擇5個陽性染色最明顯高倍視野(×400)計數500個腫瘤細胞中陽性細胞所占的百分比。
免疫組化結果的判斷：陽性結果呈棕黃色或棕褐色，Caspase-3陽性細胞分別為細胞質顯色，Caspase-3蛋白表達結果判定標準如下。用計算機圖像分析技術半定量監測其蛋白表達的強弱，應用Image-Pro Plus 50彩色病理圖文分析系統隨機選取5個視野，測定乳腺癌組織Caspase-3免疫反應陽性產物平均光密度值，以平均光密度值來進行量化后的統計學分析。
統計學處理：使用SPSS130軟件包。所得數據以X±S表示，采用方差分析；P＜005為差異有統計學意義。
結果
兩組患者一般情況比較：肥胖組患者平均年齡5135±775歲，正常體重組為4964±617歲，兩組相比差異無顯著性(P＞005)。肥胖組(2851±555)和正常體重組(1945±479)體重比較差異有統計學意義(P＜005)。
TUNEL法檢測各組乳腺癌細胞凋亡：光學顯微鏡下觀察，細胞核濃縮，染色質凝集，呈圓形或新月形，體積變小，核被標記成棕黃色的細胞即為凋亡細胞。正常體重組中腫瘤細胞有凋亡現象，凋亡率為038±007。肥胖組凋亡率為013±002，較正常體重組降低，表明肥胖組細胞凋亡作用明顯低于正常體重組(P＜001)。
各組乳腺組織中Caspase-3蛋白表達及與細胞凋亡二者的相關性：肥胖組乳腺組織Caspase-3蛋白表達的平均光密度值為017±005，正常體重組為056±014，兩組比較差異有統計學意義(P＜005)。肥胖患者乳腺癌細胞凋亡與Caspase-3蛋白表達的相關系數(r=086，P＜005)；正常體重組乳腺癌細胞凋亡與Caspase-3蛋白表達的相關系數(r=038，P＜005)。Caspase-3蛋白表達與5年復發轉移的關系：60例正常體重乳腺癌Caspase-3陽性患者17例中，有13例(765%)發生復發轉移；而43例Caspase-3陰性患者中，37例(814%)發生復發轉移，經比較無統計學差異。60例肥胖乳腺癌39陽性患者中，15例(385%)發生復發轉移；而21例Caspase-3陰性患者中，有16例(762%)發生復發轉移，有顯著性差異。見表1。
討論
乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，在許多國家和地區居女性惡性腫瘤的首位。引起乳腺癌的發病因素很多如遺傳因素、內分泌因素、物理因素等，其中肥胖為其發病的高危因素之一，日益受到人們的重視。體重過重和肥胖增加了患乳腺癌的風險［1］。
細胞凋亡是基因控制的細胞自主性死亡。Caspase為含半胱氨酸的天冬氨酸特異水解酶，是凋亡的主要執行者，Caspase分啟動型、效應型和炎癥型3型［2］。Caspase-3是哺乳類動物細胞凋亡的關鍵蛋白酶，在Caspase家族中屬于效應型，在引起細胞凋亡蛋白酶級聯反應中處于核心；在正常情況下，胞質中的Caspase-3以無活性的酶原形式存在只有當細胞凋亡時，才被激活為有活性的Caspase-3［3～4］。近年來發現Caspase-3參與了腫瘤發生過程中細胞凋亡異常的病理過程［5］。
本組研究表明，肥胖乳腺癌組織中，Caspase-3的陽性表達率低于對照組正常體重乳腺癌組織(P＜005)，肥胖患者乳腺癌組織中，Caspase-3的陽性表達低于正常體重患者乳腺癌組織(P＜005)，肥胖乳腺癌組織中Caspase-3蛋白表達與細胞凋亡無明顯相關，且本研究結果提示，與正常體重乳腺癌患者比較，肥胖乳腺癌患者乳腺癌組織Caspase-3蛋白陽性的表達肥胖乳腺癌患者5年復發轉移中起重要作用。因此推測Caspase-3參與了乳腺癌組織的發育及轉化細胞凋亡過程的調節，Caspase-3表達促進了腫瘤細胞的生長，在肥胖相關性乳腺癌的發生發展中可能起重要的作用［6］。
綜上所述，肥胖乳腺癌患者組織中的Caspase-3表達減少是促進乳腺癌發生、發展的高危因素，并且使乳腺癌的惡化和影響預后。預防肥胖對降低患乳腺癌的發病率有積極的意義。
參考文獻
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