利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)吊瓜病毒種類(lèi)的研究

摘要：小西葫蘆黃花葉病毒（Ｚｕｃｃｈｉｎｉ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ＺＹＭＶ）、西瓜花葉病毒（Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ＷＭＶ）、黃瓜花葉病毒（Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ）、南瓜花葉病毒（Ｓｑｕａｓｈ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ＳｑＭＶ）和番木瓜環(huán)斑病毒（Ｐａｐａｙａ ｒｉｎｇｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓ，ＰＲＳＶ）是危害葫蘆科作物最嚴(yán)重、最廣泛的５種病毒。根據(jù)已知的５種病毒序列設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)感染病毒的吊瓜總ＲＮＡ進(jìn)行ＲＴ－ＰＣＲ擴(kuò)增。結(jié)果表明長(zhǎng)興吊瓜的病毒種類(lèi)主要為ＰＲＳＶ，感染率為１００％，無(wú)復(fù)合病毒感染。吊瓜植株不同取樣部位（莖尖、卷須、嫩葉、莖、花、子房、老葉等）的ＲＴ－ＰＣＲ表明老葉是較好的病毒檢測(cè)取樣部位，而嫩葉是吊瓜脫毒最佳的外植體取樣部位。對(duì)莖尖的ＰＲＳＶ表達(dá)量高過(guò)幼葉的原因也進(jìn)行了分析，認(rèn)為可能是病毒的表達(dá)量與植株的代謝強(qiáng)度有關(guān)。

關(guān)鍵詞：吊瓜；ＲＴ－ＰＣＲ；病毒檢測(cè)；病毒分布

中圖分類(lèi)號(hào)：Ｓ６４２ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０11）09－1904-04

Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｉｎ Ｃａｕｓａｌ Ｖｉｒｕｓｅｓ in Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ

ＸＵ Ｊｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｚｈｅｎ－ｈｕａ，ＰＡＮＧ Ｊｉ－ｌｉａｎｇ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００３６，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｚｕｃｃｈｉｎｉ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ（ＺＹＭＶ）， Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ（ＷＭＶ）， Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ （ＣＭＶ）， Ｓｑｕａｓｈ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ （ＳｑＭＶ） ａｎｄ Ｐａｐａｙａ ｒｉｎｇｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓ （ＰＲＳＶ） ａｒｅ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｅｒｉｏｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅｏｕｓ ｃｒｏｐｓ． Ｆｉｖｅ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ５ ｖｉｒｕｓｅｓ， ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ Ｍａｘｉｍ． ｌｅａｖｅｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｖｉｒｕｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｔ． ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ ｉｎ Ｃｈａｎｇｘｉｎｇ ｗａｓ ＰＲＳＶ ｗｉｔｈ １００％ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ａｓ ｎｏ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ． Ｔｈｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｐａｒｔｓ ｏｆ Ｔ． ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｐａｒｔ ｆｏｒ ｖｉｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｌｄ ｌｅａｖｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔｖｉｒｕｓ－ｆｒｅｅ ｐａｒｔ ｗａｓ ｙｏｕｎｇ ｌｅａｖｅ． Ｔｈｅ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｍｏｒｅ ＰＲＳＶ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｓｈｏｏｔ ｔｉｐ ｔｈａｎ ｉｎ ｙｏｕｎｇ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ， ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｗａｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｐｌａｎｔ＇ｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ Maxim.； ＲＴ－ＰＣＲ；ｖｉｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ； ｖｉｒｕｓ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ

吊瓜，學(xué)名栝樓（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ Ｍａｘｉm．），屬葫蘆科多年生蔓性藤本植物。其根、莖、葉、瓜皮、種子均可供藥用，富含三萜皂甙、有機(jī)酸、樹(shù)脂、糖類(lèi)、色素、蛋白質(zhì)、脂肪油等，有解熱止渴、利尿、鎮(zhèn)咳祛痰等功效，并具抗腫瘤的作用。近年來(lái)，隨著吊瓜開(kāi)發(fā)和研究的不斷深入，吊瓜子也已成為炒貨中的佳品，它濃香撲鼻，深受消費(fèi)者喜愛(ài)，市場(chǎng)前景極為廣闊。吊瓜通常以種子或扦插繁殖，種子繁殖由于混交嚴(yán)重，種質(zhì)退化迅速；扦插繁殖時(shí)由于病毒病積累，導(dǎo)致大量減產(chǎn)。如何獲得優(yōu)質(zhì)不帶病毒的吊瓜種苗已是吊瓜生產(chǎn)上迫切需要解決的問(wèn)題。因此，亟需建立一種合適的吊瓜病毒檢測(cè)方法。

目前，植物病毒的檢測(cè)方法主要有生物學(xué)、電鏡觀察、血清學(xué)、ＲＴ－ＰＣＲ和核酸雜交等［１］，但由于生物學(xué)檢測(cè)法周期長(zhǎng)，電鏡操作需要一定技能，儀器費(fèi)用高，也不易進(jìn)行大量樣本的集中處理，所以生物學(xué)方法和電鏡檢測(cè)在病毒檢測(cè)中存在很大局限性。血清學(xué)方法的應(yīng)用相對(duì)較為廣泛［２，３］，但商品化的抗血清價(jià)格較高，靈敏度不夠高，易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，檢測(cè)結(jié)果不可靠。而ＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)等顯著優(yōu)點(diǎn)，在植物病毒檢測(cè)中得到了廣泛的應(yīng)用［４－６］。危害葫蘆科作物的病毒多達(dá)４８種［７］，而且在田間病毒經(jīng)常還會(huì)發(fā)生復(fù)合感染，目前尚無(wú)吊瓜病毒檢測(cè)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，本研究選取了發(fā)生普遍、危害嚴(yán)重的ＺＹＭＶ、ＷＭＶ、ＣＭＶ、ＳｑＭＶ、ＰＲＳＶ ５種病毒對(duì)采集的田間吊瓜染病樣本進(jìn)行ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)，為吊瓜病毒病的防治及抗病育種工作提供了理論依據(jù)。

１材料和方法

１．１材料

感染病毒的吊瓜植株來(lái)自浙江省長(zhǎng)興縣，引種后栽種于杭州師范大學(xué)溫室。

１．２試劑

Ｔｒｉｚｏｌ試劑購(gòu)自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自東洋紡（上海）生物科技有限公司；Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶購(gòu)自廣州東盛生物科技有限公司。

１．３總ＲＮＡ的提取

取０．２～０．５ ｇ感染病毒的新鮮吊瓜葉片置于處理過(guò)的研缽中，加液氮研磨成粉末后迅速轉(zhuǎn)移至１．５ ｍＬ的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，用Ｔｒｉｚｏｌ試劑提取總ＲＮＡ，最后用２０ μＬ ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ Ｈ２Ｏ溶解總ＲＮＡ。

１．４引物的設(shè)計(jì)和合成

根據(jù)ＧｅｎＢａｎｋ上登錄的各病毒序列，用Ｐｒｉｍｅｒ５軟件設(shè)計(jì)各病毒的特異性引物。引物設(shè)計(jì)完成后，通過(guò)ＮＣＢＩ對(duì)其特異性進(jìn)行分析，均具有良好的特異性。引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，見(jiàn)表１。

１．５ｃＤＮＡ合成和ＰＣＲ擴(kuò)增

用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成各病毒ｃＤＮＡ第一鏈。ＰＣＲ反應(yīng)在５０ μＬ體系中進(jìn)行：３６．５ μＬ ｄｄＨ２Ｏ、５．０ μＬ １０×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ、４．０ μＬ 10 μｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰs、１．０ μＬ 病毒正向引物（１０ μｍｏｌ／Ｌ）、１．０ μＬ病毒反向引物（１０ μｍｏｌ／Ｌ）、２．０ μＬ ｃＤＮＡ模板和０．５ μＬ Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶，ＰＣＲ反應(yīng)程序：９４ ℃預(yù)變性５ ｍｉｎ；９４ ℃變性３０ ｓ、５５ ℃退火３０ ｓ、７２ ℃延伸１ ｍｉｎ，循環(huán)３０次；最后７２ ℃延伸１０ ｍｉｎ。ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)１．０％瓊脂糖凝膠電泳后分析比較。

１．６ＰＣＲ產(chǎn)物測(cè)序

將ＲＴ－ＰＣＲ產(chǎn)物回收純化后與ｐＭＤ１８－Ｔ Ｖｅｃｔｏｒ連接轉(zhuǎn)化大腸桿菌ＤＨ５α感受態(tài)細(xì)胞，用氨芐青霉素和β－半乳糖苷酶的底物Ｘ－Ｇａｌ進(jìn)行藍(lán)白斑篩選。陽(yáng)性克隆經(jīng)ＰＣＲ和限制性酶酶切分析進(jìn)一步篩選后，提取質(zhì)粒送上海澤衡生物技術(shù)有限公司測(cè)序，利用ＤＮＡＭＡＮ和ＢＬＡＳＴ對(duì)所測(cè)序列進(jìn)行比較分析。

２結(jié)果與分析

２．１染病吊瓜樣品與健康吊瓜樣品的癥狀

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，浙江長(zhǎng)興吊瓜普遍受病毒侵染，且病毒病后期常導(dǎo)致大量減產(chǎn)，這嚴(yán)重影響了吊瓜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。染病的吊瓜植株癥狀主要為花葉、出現(xiàn)小黃斑、葉片黃化，后期黃化壞死（圖１－Ａ）；而組培苗也有黃化、出現(xiàn)小黃斑的癥狀，這說(shuō)明組培苗還未脫除母株體內(nèi)的病毒（圖１－Ｂ）。未受病毒侵染的健康吊瓜植株葉片深綠，無(wú)黃斑、花葉、黃化現(xiàn)象（圖１－Ｃ）。

２．２５種病毒ＲＴ－ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果

以ＺＹＭＶ、ＷＭＶ、ＣＭＶ、ＳｑＭＶ和ＰＲＳＶ ５種病毒的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為ＰＣＲ反應(yīng)的模板，經(jīng)ＰＣＲ擴(kuò)增后ＺＹＭＶ、ＷＭＶ、ＣＭＶ、ＳｑＭＶ均未得到相應(yīng)的條帶，僅ＰＲＳＶ得到１條大小５７０ ｂｐ左右的特異性條帶（圖２），這與按ＰＲＳＶ外殼蛋白基因序列設(shè)計(jì)的引物目標(biāo)片段大小相符，說(shuō)明擴(kuò)增的條帶可能是從ＰＲＳＶ病毒基因組特異擴(kuò)增得來(lái)的，健康陰性對(duì)照則無(wú)任何擴(kuò)增條帶出現(xiàn)。在１０塊不同田地的材料中全部檢測(cè)到ＰＲＳＶ，檢出率達(dá)到１００％。

２．３ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)靈敏度

將受病毒侵染的吊瓜葉片總ＲＮＡ按３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６倍梯度稀釋為不同濃度后的擴(kuò)增結(jié)果表明，ＲＴ－ＰＣＲ在ＰＲＳＶ病毒ＲＮＡ稀釋?zhuān)常当稌r(shí)仍能夠獲得陽(yáng)性結(jié)果（圖３），這說(shuō)明ＲＴ－ＰＣＲ對(duì)病毒檢測(cè)具有較高的靈敏度。

２．４ＲＴ－ＰＣＲ對(duì)吊瓜不同取樣部位的ＰＲＳＶ檢測(cè)

用同一感病植株的莖尖（５ ｍｍ）、幼嫩卷須、橫向直徑１０ ｍｍ以下的嫩葉、橫向直徑１０～２０ ｍｍ的嫩葉、嫩莖、老莖、花萼、花瓣、子房、老葉提取ＲＮＡ，分別進(jìn)行ＲＴ－ＰＣＲ，結(jié)果均得到了清晰的擴(kuò)增條帶（圖４）。結(jié)果表明，病毒ＰＲＳＶ在以上吊瓜組織中均有分布，且不同取樣部位的特異擴(kuò)增條帶的強(qiáng)度不同，ＰＲＳＶ在幼嫩卷須、老莖、花萼、花瓣、子房、老葉中擴(kuò)增較強(qiáng)；在莖尖（５ ｍｍ）、嫩莖處稍弱；在橫向直徑１０ ｍｍ以下與橫向直徑１０～２０ ｍｍ的嫩葉處最弱。

２．５ＰＣＲ產(chǎn)物序列分析

ＰＲＳＶ的ＲＴ－ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后測(cè)序。測(cè)序結(jié)果表明ＰＲＳＶ的擴(kuò)增產(chǎn)物序列由５７０個(gè)核苷酸組成，與設(shè)計(jì)的ＰＣＲ產(chǎn)物大小相同。序列同源性分析結(jié)果表明，所得序列與參考序列的同源率達(dá)到９９％，為ＰＲＳＶ基因的部分序列，這進(jìn)一步證明了ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

２．６ＲＴ－ＰＣＲ對(duì)吊瓜組培苗的檢測(cè)

應(yīng)用ＲＴ－ＰＣＲ隨機(jī)抽樣檢測(cè)以莖尖為外植體的吊瓜組培苗４株，結(jié)果都檢測(cè)到未脫除的ＰＲＳＶ（圖５）。證明該方法具有較高的準(zhǔn)確性，可以用于大量脫毒苗的檢測(cè)。

３結(jié)論

ＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)用于植物病毒的檢測(cè)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便及所需樣品量少等特點(diǎn)，因而對(duì)于病毒侵染早期及種子帶毒的檢測(cè)具有重要意義，可以為許多植物病毒的檢測(cè)所借鑒。

本文對(duì)來(lái)自１０份不同田地的吊瓜染病樣本進(jìn)行了ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)，結(jié)果從感病組織中全部擴(kuò)增出與ＰＲＳＶ預(yù)期大小一致的目的片段，而健康組織無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物，說(shuō)明擴(kuò)增片段是從ＰＲＳＶ病毒基因組特異擴(kuò)增得來(lái)的，目的片段的序列測(cè)定進(jìn)一步證明了這一點(diǎn)；至于另外４種病毒，ＲＴ－ＰＣＲ均未擴(kuò)增出任何條帶，這說(shuō)明侵染吊瓜的病毒種類(lèi)可能為ＰＲＳＶ單一感染。本實(shí)驗(yàn)只選取了危害最普遍的５種病毒進(jìn)行檢測(cè)，至于有沒(méi)有這５種病毒以外的其他病毒復(fù)合感染，這需要進(jìn)一步對(duì)吊瓜染病癥狀進(jìn)行觀察研究。

為了了解病毒ＰＲＳＶ在宿主體內(nèi)的分布狀況，本實(shí)驗(yàn)對(duì)吊瓜的不同部位——莖尖（５ ｍｍ）、幼嫩卷須、橫向直徑１０ ｍｍ以下的嫩葉、橫向直徑１０～２０ ｍｍ的嫩葉、嫩莖、老莖、花萼、花瓣、子房、老葉的病毒分布進(jìn)行了檢測(cè)，這不僅對(duì)于尋找合適的外植體部位來(lái)對(duì)吊瓜進(jìn)行脫毒處理，進(jìn)而獲得脫毒苗具有重大意義；另外，由于病毒在感病植株體內(nèi)各組織器官具有不均勻分布特性［８］，這也有效避免了因檢測(cè)部位差異造成的檢測(cè)結(jié)論偏差。莖尖很少受病毒侵染，所以人們常取莖尖經(jīng)組培獲得脫毒苗。然而在提取ＲＮＡ濃度基本相同的條件下，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻顯示莖尖的病毒表達(dá)量高過(guò)嫩葉，這可能預(yù)示ＰＲＳＶ的表達(dá)與植株的代謝強(qiáng)度有關(guān)。因?yàn)槟廴~代謝強(qiáng)度較莖尖弱，所以其病毒的表達(dá)量也相對(duì)較低。

本實(shí)驗(yàn)建立的吊瓜病毒ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)方法，在吊瓜栽培生產(chǎn)中，能夠快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)地檢測(cè)出幼苗帶毒情況，對(duì)預(yù)防和控制病害在田間的發(fā)生、減少經(jīng)濟(jì)損失、抗病篩選和病害流行預(yù)測(cè)具有十分重要的意義。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 金羽，文景芝．植物病毒檢測(cè)方法研究進(jìn)展［Ｊ］． 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００５（３）：３７－４０．

［２］ 肖火根，范懷忠． 植物組織粗汁液中的番木瓜環(huán)斑病毒的ＥＬＩＳＡ檢測(cè)技術(shù)［Ｊ］． 中國(guó)病毒學(xué)，１９９４，９（３）：２４９－２５５．

［３］ 古勤生，ＲＯＧＧＥＲＯ Ｐ，ＬＥＮＺＩ Ｒ，等． 北方地區(qū)小西葫蘆黃花葉病毒的酶聯(lián)檢測(cè)和西瓜品種抗病性鑒定［Ｊ］． 果樹(shù)學(xué)報(bào)，２００２， １９（３）：１８４－１８７．

［４］ ＪＡＭＥＳ Ｄ． Ｆａｃｔｏｒｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｐｌｅ ｓｔｅｍ ｇｒｏｏｖｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ｂｙ ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］． Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，１９９８，４７２：１１９－１２４．

［５］ ＣＡＮＤＲＥＳＳＥ Ｔ，ＬＡＮＮＥＡＵ Ｍ，ＲＥＶＥＲＳ Ｆ，ｅｔ ａｌ． ＰＣＲ－ｂａｓｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ ｖｉｒｏｉｄｓ［Ｊ］． Ａｃｔａ Ｈｏｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，２０００，５３０：６１－６７．

［６］ 吳紅芝，孔寶華， 鄭海如， 等． ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)菊花Ｂ病毒的研究［Ｊ］． 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２００２，２４（２）：１１５－１１７．

［７］ 古勤生，范在豐，李懷方． 葫蘆科作物病毒名錄［Ｊ］． 中國(guó)西瓜甜瓜，２００２（１）：４５－４７．

［８］ ＷＨＩＴＥ Ｐ． Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｏｆ ｔｏｙ－ｂａｃｃｏ ａｎｄ ａｕｃｕｂａ ｍｏｓａｉｃ ｏｎ ｇｒｏｗｉｎｇ ｅｘｉｓｉｅｄ ｔｏｍａｔｏ ｒｏｏｔｓ［Ｊ］． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９３４，２４：１００３－１０１１．